转录因子Foxd3、Sox2在宫颈上皮内瘤样病变中的表达临床意义

黄红芳

[摘 要] 目的：研究转录因子 Foxd3、Sox2在宫颈上皮内瘤样病变中表达，为临床诊断治疗提供参考。方法：46例不同级别宫颈上皮内瘤样病变（CIN）患者组织标本，采用免疫组织化学法检测Foxd3和Sox2的表达情况，与正常宫颈组织进行对比。结果：Foxd3在CIN组织中表达水平显著高于正常宫颈组织（P<0.05），Sox2蛋白在CIN组织表达水平（91.30%）显著高于正常宫颈组织水平（P<0.05）；随着CIN分级的提高，Sox2蛋白表达呈递增的趋势，Sox2在CIN I 为13.33%，CIN II 为29.41%，CIN III为57.14%。结论：转录因子 Foxd3在CIN组织中高表达、Sox2在宫颈上皮内瘤样病变中的表达与CIN分级呈正相关，检测Foxd3、Sox2表达情况对了解CIN生物学行为和评估预后具有重要临床价值。

[关键词] 转录因子；Foxd3；Sox2；宫颈上皮内瘤样病变

中图分类号：R737.33 文献标识码： A 文章编号：2095-5200（2015）03-077-03

宫颈上皮内瘤变（CIN）为宫颈癌癌前病变。CIN分为3个等级[1-2]，I～II级可以治愈、保持稳定或者逆转的，但是也可能发展成III级或者浸润癌，甚至宫颈癌[3]。CIN级别越高，瘤变的逆转率就越低，进展率就越高。CIN的尽早发现、治疗、和随访监控对防治宫颈癌有重要作用[4]。转录因子 Foxd3、Sox2能在胚胎干细胞、胚胎肿瘤细胞、胚胎生殖细胞、成长组织祖细胞、多种肿瘤细胞中表达[5-6]。本研究分析转录因子 Foxd3、Sox2在CIN中表达，探讨其临床意义。

1 材料与方法

1.1 材料

46例宫颈上皮内瘤样病变（CIN）组织标本，标本选自2010年～2014年本院宫颈活检及手术切除标本，标本经病理证实为宫颈上皮内瘤样病变。其中CINI 15例、CIN II 17例、CIN III 14例；另取20例正常宫颈组织标本为对照组。患者手术前均未经过放化疗等方式治疗。标本处理：经10%的中性福尔马林固定，石蜡包埋标本，以5 um厚度切片。

1.2 仪器与试剂

鼠抗人Fox3单克隆抗体由美国R&D公司提供，羊抗鼠多克隆抗体由美国Pierce公司提供；浓缩型鼠抗人Sox2单克隆抗体由美国SantaCruz公司提供；氨基联苯胺（DAB）显色试剂盒、链素抗生物素-过氧化物酶（SP）免疫组化试剂盒由武汉博士德生物有限公司提供。

1.3 实验方法

1.3.1 Fox3检测方法 免疫组化法：均在组织芯片上进行，经脱蜡（二甲苯）、水化（梯度酒精）后，用3%过氧化氢抑制内源性过氧化酶活性，采用枸橼酸钠（浓度：0.01mol/L，PH6.0，100℃）修复抗原10min，采用PBS冲洗4遍，10%BSA封闭非特异性位点10min。4℃孵育鼠抗人Fox3单克隆抗体12h，采用PBS冲洗3遍，20℃孵育羊抗鼠多克隆抗体1h，采用PBS冲洗3次，DAB显色观察。细胞内出现棕黄色颗粒作为阳性表达。

1.3.2 Sox2检测 采用免疫组化染色法：均在组织芯片上进行，经脱蜡（二甲苯）、水化（梯度酒精）后，用3%过氧化氢抑制内源性过氧化酶活性，采用枸橼酸钠（浓度：0.01mol/L，PH6.0）修复抗原10min，滴加非免疫性动物血清，在室温下孵育10min；再滴加第一抗体100μL，在室温下孵育1h，再滴加第二抗体（经生物素标记）100μL，在室温下孵育10min，滴加SP溶液，在室温下孵育10min，最后滴加DAB显色剂显色5min，镜下观察。随机选取5块高倍视野，计算出平均阳性细胞占比进行评分，0，阳性细胞占0%；1，阳性细胞占<25%；2，阳性细胞占25%～50%；3，阳性细胞占50.1%～75% ；4，阳性细胞占>75%；根据细胞染色强度分级评分，0级，无着色；1，弱染色；2，中等强度染色；3，强染色；组织学评分为阳性细胞数占比评分×染色强度评分。根据组织学评分判断阳性强度，0分为（-），1～4分为（+），5～8分为（++），9～12分为（+++），5～12分判定为Sox2阳性表达。

1.4 统计学处理

应用SPSS19.0统计分析，计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验，P<0.05为显著性差异。

2 结果

2.1 Foxd3在宫颈上皮内瘤样病变中的表达

Foxd3蛋白在正常宫颈组织中未见阳性表达，阳性表达率为0（见图1a）；Foxd3蛋白在CIN组织表达主要位于胞浆中，少数表达于单个癌细胞中，46例CIN组织中有42例可见阳性表达，阳性表达率为91.30%（见图1b）。Foxd3蛋白在CIN组织表达水平显著高于正常宫颈组织水平（P<0.05）。

a为正常宫颈组织，b为CIN组织

图1 Foxd3蛋白在正常宫颈组织与CIN组织中的表达

2.2 Sox2在宫颈上皮内瘤样病变中的表达

CIN级别不同，Sox2蛋白呈不用程度的阳性表达（见图2），随着CIN分级的提高，Sox2表达呈递增的趋势。

a为正常宫颈组织，b为 CIN I级组织，c为 CIN II级组织，

d为CIN III级组织

图2 Sox2在正常宫颈组织、CIN组织的表达

46例CIN组织中Sox2阳性表达率为32.61%，其中CIN I 为13.33%，CIN II 为29.41%，CIN III为57.14%，Sox2在CIN III级组织中阳性表达率显著高于I级和II级，且有显著性差异（P<0.05）。见表1。

3 讨论

Foxd3为一种转录因子，又名翼状螺旋蛋白，拥有翼状螺旋DNA结合区域，能表达于胚胎干细胞或者胚胎瘤细胞等细胞中 [7-8]。

转录因子Sox2基因是一种性别决定区因子，对胚胎干细胞维持多向性发展和自我更新起决定性作用，是胶质瘤祖细胞维持增殖和遗传特性的关键调节因子[9]。Sox2异常表达直接关系到肺癌、口腔肿瘤、乳腺癌、睾丸干细胞肿瘤、脑膜瘤、食管癌等许多肿瘤的发生、发展[10]。Sox家族的代表性特征是具有高度保守的HMGDNA结合区域[11]。Sox的蛋白是重要的调控因子，对早期神经系统的发言、性别的决定和分化、多种组织器官的形成有重要作用。不但能在胚胎干细胞、胚胎生殖细胞、胚胎生殖肿瘤细胞中表达，还在部分成人组织的祖细胞、多种肿瘤细胞中表达。研究发现，Sox2是一个干细胞诱导的关键转录因子，能调控干细胞。肿瘤干细胞极少存在于肿瘤组织内，具有无限增殖及基因突变的潜能，决定着肿瘤的发生、发展。Sox2蛋白的检测有助于评价CIN疾病的生物学行为，为临床生物学治疗肿瘤提供理论依

据[12]。本研究提示，正常宫颈组织中仅存在极少的干性基因细胞，而CIN组织中干细胞的表达率显著升高，可推测正常宫颈组织中的干细胞积累的大量突变基因变异干细胞失去自控，转化为宫颈癌干细胞[13]。

本研究结果显示，Foxd3蛋白在CIN组织表达水平（91.30%）显著高于正常宫颈组织水平（0%），Foxd3这个特性为研究和评估CIN的生物学活性和预后提供了潜在的靶点；随着CIN分级的提高，Sox2蛋白表达呈递增趋势，Sox2蛋白在CIN组织表达率CIN I 为13.33%，CIN II 为29.41%，CIN III为57.14%，表达与CIN呈正相关。

综上所述，转录因子 Foxd3、Sox2在宫颈上皮内瘤样病变中的表达与CIN分级呈正相关，检测转录因子 Foxd3、Sox2的表达情况，对了解CIN生物学行为和评估预后具有重要的临床价值。

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