东莞地区20400例HPV感染情况及基因型分布特点分析

邵锦欢，肖翔，钟阳青，张达秀

(东莞市塘厦医院检验科，广东东莞523721)



东莞地区20400例HPV感染情况及基因型分布特点分析

邵锦欢，肖翔，钟阳青，张达秀

(东莞市塘厦医院检验科，广东东莞523721)

摘要:目的了解本地区妇女宫颈脱落细胞HPV的感染情况和基因型分布特点，观察其在不同年份、不同年龄段、不同亚型的分布特点，为本地区HPV的筛查和防治提供依据。方法以2011年1月至2015年8月来我院妇产科门诊就诊的妇女为研究对象，按照年龄分为6个组即（T1<20岁，T2：21～30岁，T3：31～40岁，T4：41～50岁，T5：51～60岁，T6：>60岁）采集宫颈脱落细胞，使用深圳亚能公司生产的试剂进行HPV基因型的检测，一共可以检测23种常见的基因亚型。将得到的测试数据按照年份排序，统计HPV总感染率，总体基因亚型分布特点，再比较不同年份，不同年龄，不同亚型的感染情况。结果①总共检测20400例标本，HPV阳性的标本数为4466例，总感染率为21.89%。②因为存在多重感染（两种或两种以上的基因亚型感染）的情况，4466例阳性的标本中23种HPV常见基因型共出现7024次，其中高危型占72.72%（5108/7024），以HPV52、16、58三种亚型为主分别占14.24%（1000/7024）、10.75%（755/7024）和7.30%（513/7024），低危型占27.28%（1916/ 7024），以HPV43、6、11三种亚型为主，分别占9.38%（659/7024）、8.93%（627/7024）、5.11%（359/7024）。③HPV感染的高峰期出现在T1、T5和T6组，分别为41.34%、31.65%、32.93%。随着年龄的增加低危型感染率逐渐降低，高危型感染率逐渐升高，各年龄组高危型感染率均大于低危型感染率。④患者HPV单一种基因型感染率为66.41%（2966/4466），多重感染率为33.59% （1500/4466），多重感染主要出现在15～40岁之间，其中最多出现了9重感染。⑤2011－2015年各年份HPV总感染率的差异没有统计学意义，但是HPV6型感染百分比逐年降低，HPV51、52型感染百分比逐年升高。结论本地区HPV感染率高达到21.89%，以高危型感染为主，HPV基因型在不同年份和不同年龄组有差异，因此加强HPV的筛查很有必要。

关键词：人乳头瘤病毒；基因型；流行病学调查

人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖。据报道宫颈癌患者中90%以上存在HPV感染[1]，全球约有2.91亿妇女感染HPV，宫颈癌已成为全世界女性最常见的恶性肿瘤[2，3]。根据HPV型别与子宫颈癌发生危险性高低分为低危型HPV和高危型HPV，不同基因型别感染在不同国家，不同地区存在着较大差异[4－6]，因此获得本地区的HPV基因型分布特点有助于临床疾病的筛查和诊疗。本研究对20400例妇科门诊患者的宫颈脱落细胞HPV感染率进行分析得到本地区的流行病学调查数据，为临床诊疗提供依据。

1　材料与方法

1.1研究对象2011年1月至2015年8月来广东省东莞市塘厦医院妇产科门诊就诊的妇女共20400例。年龄10～83岁，平均年龄32岁。

1.2仪器试剂DNA快速提取试剂盒；PCR扩增仪；PCR－RDB试剂盒；分子杂交箱。以上试剂设备均由深圳亚能公司提供。

1.3方法

1.3.1宫颈脱落细胞的采集按照知情同意原则，采集标本前需要预先告诉患者并自愿接受检查。受检患者需要满足：⑴检查前24h没有性生活；⑵检查前3d内未行阴道内检查、阴道冲洗及放置阴道栓剂；⑶检查时为非月经期；⑷有性生活使。采集使用专用的宫颈脱落细胞采集器，先用窥阴器或阴道张开器暴露宫颈，用棉拭子将阴道及宫颈口过多的分泌物轻轻擦拭干净，再用试剂盒提供的专用宫颈刷插入子宫颈外口，单方向旋转4～5周以获得足量的上皮细胞样本，然后将其放入含专用细胞保存液的试管中，2～8℃冰箱保存，每隔3d检测一次。

1.3.2检测采用深圳亚能公司生产的试剂进行检测，并严格按照说明书进行操作。整个实验过程在通过了国家卫生部临检中心验收的PCR实验室内进行，操作人员都是通过培训考核合格的有证人员。

1.3.3结果判断检测结果按照说明书规定的判读方法进行结果判断。本实验使用的是深圳亚能公司生产的PCR－RDB试剂盒，其可以检测23种常见HPV基因型，包括18种高危型；HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4.5种低危型6、11、41、42、43。

1.3.4统计指标2011年－2015年五年HPV的总体感染率，各基因型的总体出现频率，各年各基因亚型的出现频率，各年各年龄段的感染率和基因亚型的出现率，单一HPV基因亚型和多重亚型感染率等。

1.3.5统计学处理实验数据全部记录在EXCEL表格中，当实验结束时采用SPSS 17.0统计软件进行分析，计数资料以例数或百分率表示，数据比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1 HPV总体感染情况在接受HPV检查的20400例患者中，年龄在10～83岁之间，平均年龄为32岁。共检测出4466例HPV感染者，HPV总感染率为21.89%，各年份的数据统计详见表1。

表1　2011年- 2015年各年份HPV感染数据汇总表

从表1可以看到近5年来受检者在逐渐增多，阳性检出例数也随之增加，但是各年的受检者平均年龄没有差异，阳性率没有差异。

2.2各基因亚型出现频率因为存在多重感染的情况4466例阳性的标本中23种HPV常见基因型共出现7024次，其中高危型占72.72%（5108/ 7024），以HPV52、16、58三种亚型为主分别占14.24%（1000/7024）、10.75%（755/7024）和7.30% （513/7024），低危型占27.28%（1916/7024），以HPV43、6、11三种亚型为主，分别占9.38%（659/ 7024）、8.93%（627/7024）、5.11%（359/7024）。具体数据详见图1。

图1　2011年- 2015年HPV各基因型出现平率图

从图2可以看出HPV51、52、68三型感染率随着年份的变化在逐渐递增，6、11两型在逐渐递减。高危型和低危型历年出现的频率是一样的即高危型以52、16、58为主，低危型以6、11、43为主。

图2　各年份各HPV基因型出现平率

2.3不同年龄段的感染情况将20400例参与筛查的患者按照年龄分为6组即T1（<20岁）、T2（21～30）、T3（31～40）、T4（41～50）、T5（51～60）、T6（>60岁）。各年龄组的HPV感染率分别为41.34%，22.44%，18.5%，19.64%，31.65%，32.93%。具体数据详见表2。

表2　2011- 2015年各年龄段HPV感染情况表

从表2可以看出主要的受检者集中在T2、T3、T4三个组，受检人数占了总受检人数的92.32%，HPV阳性率也组要集中在T1、T5、T6三个组。

2.4各年龄段HPV基因亚型高、低危型出现频率T1至T6组随着年龄的递增低危型感染率呈现递减趋势，高危型感染呈现递增趋势。详见表2、表3。

表3　各年龄段HPV感染高、低危型出现频率

2.5各年龄组各基因亚型感染情况低危型感染主要出现在T1、T2、T3三组，其中T2组高、低危两型感染率均明显高于其他各年龄组，T3组高、低危型均有。T4、T5、T6三组的感染类型主要为高危型。具体数据详见图3。

图3　2011- 2015各年龄段各基因型出现频率

2.6多重感染情况HPV感染呈现单一感染和多重感染两种情况，本实验总检测出4466例阳性患者标本，由于出现了多重感染情况23种HPV基因亚型一共出现了7027次。其中患者单一HPV基因亚型感染占66.37%（2964/4466），多重感染率为33.63%（1502/4466），其中多重感染主要发生在T1组。单一感染和多重感染率数据占详见表4，各年龄组中多重感染率数据详见表5。

表4　单一感染和多重感染数据

表5　各年龄段多重感染率数据

3　讨论

研究表明HPV高危型持续感染是引起宫颈癌的必要因素[7]，据统计每年宫颈癌的发病率按照2%～3%的速度增长[8]，宫颈癌已经成为全球第二位的恶性肿瘤。HPV感染属于性传播疾病，性活跃期妇女普遍易感，随着易感人群的年轻化HPV感染率持续升高。HPV基因亚型根据其与宫颈癌的发生率可将其分为高危型和低危型。

近年来HPV感染得到了大量的研究，研究表明不同地区，不同人群，不同的筛查方法等原因得到的结果有较大差异。国外的研究指出宫颈癌患者中常见亚型感染依次为HPV16、18、45、31、33、58和52型，而亚洲地区58和52型高于欧美地区常见的31、33和45型[9－11]。我国地域辽阔，人口众多，各族人群的生活方式和习惯不同造成我国HPV感染呈现地区多态性。本研究共检测20400例标本其中HPV阳性的标本数为4466例，及HPV感染率为21.89%，因为存在多重感染（同一患者两种或两种以上的基因亚型感染）的情况，4466例阳性的标本中23种常见HPV基因型共出现7024次，其中高危型占72.72%（5108/7024），以HPV52、16、58三种亚型为主分别占14.24%（1000/ 7024）、10.75%（755/7024）和7.30%（513/7024），低危型占27.28%（1916/7024），以HPV43、6、11三种亚型为主，分别占9.38%（659/7024）、8.93%（627/7024）、5.11%（359/7024），这与其他学者的研究有差异[12，13]。HPV51、52、68三型感染率随着年份的变化在逐渐递增，HPV6、11两型在逐渐递减。高危型和低危型历年出现的频率是一样的即高危型以52、16、58为主，低危型以6、11、43为主。

本研究显示从2011年到2015年每年的受检者都在增加，其中T2、T3两组受检者最多占总人数的93.33%，这表明随着生活水平的提高人们对HPV的关注越来越多，尤其是年轻女性，本次研究最小年龄为10岁，也表明现在家长对子女的健康关注度在不断的提高。本文6个研究组中HPV基因亚型感染都以高危型感染为主，其中随着年龄的增加低危型感染率逐渐降低，高危型感染率逐渐升高，到了T6组时高危型感染率达到了86.05%。各年龄组的HPV感染率分别为41.34%，22.44%，18.5%，19.64%，31.65%，32.93%，表明年龄小于20岁组对HPV易感，且呈现低危、高危型混合感染为主，到了大于51岁时有出现了HPV感染的高峰这说明老年人对HPV易感，且以高危型感染为主，这可能是由于老年人处于绝经期，激素水平紊乱、乳酸杆菌的减少及阴道pH值变化等原因，使得机体免疫功能衰退，而导致HPV易感性增加及清除HPV的能力降低[14，15]。本文研究数据表明HPV低危型感染可能存在随着时间的延长有自身清除现象，而高危型存在持续感染的可能性更大。

有文献显示单一型HPV感染可以使宫颈癌的患病风险提高19.9倍，而多重HPV感染则使该风险增加31.8倍，且多重感染对宫颈病变有促进作用[16]。本文患者HPV单一种基因型感染率为66.41%（2966/4466），多重感染率为33.59%（1500/ 4466），多重感染主要出现在年龄小于20岁组，以高、低危混合感染为主，其中最多出现了9重感染。

综上所述，本地区HPV感染率较高达到21.89%，最常见的基因亚型为HPV52、16、43、6、58、11，多重感染率达到33.59%。不同年龄段的感染率存在差异（P<0.05），且呈现”U”型感染情况。随着年龄的增加高危型感染率逐渐升高。因此筛查HPV感染是疾病的早期预防和治疗的必要手段。

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·实验研究·

Analysis of the infection and genotype distribution of 20400 HPV patients in Dongguan

SHAO Jinhuan，XIAO Xiang，ZHONG Yangqing，ZHANG Daxiu. Department of Clinical Laboratory，Dongguan Tangxia Hospital，Guangdong dongguan，523721，China.

Abstract：Objective To investigate the infection and genotype distribution of human papillomavirus (HPV) in Dongguan base on the year，age and subtype，so as to provide evidence for HPV screening and prevention in Dongguan. Methods The patients who were from outpatient service of department of gynaecology of our hospital from January 2011 to August 2015 were collected to gather cervical cytological speciments，23 common genotypes of HPV were detected by analysis kits (YANENGBIO，Shenzhen). Six groups (T1－T6) were set up based on the age. A retrospective analysis was carried out to evaluate the overall prevalence of HPV infection. The prevalence of HPV infecton in different ages and subtypes were compared. Results①Atotal of 20400 specimen were collected，and the overall HPV infection rate were 21.89%(4466/20400).②The more common high risk genotype and low risk genotypes were HPV52，HPV16，HPV58 and HPV43，HPV16，HPV11 respectively. Conclusion The screening of HPV genotypes for healthy person is meaningful in early prevention of cervical cancer and epidemiological studies of HPV，and we should pay more attention in the prevention of HPV for young and elderly people．

Key words:Human papilloma virus；Genotypes；Epidemiological investigation

(收稿日期2015-12-07；修回日期2016-03-07)

作者简介：邵锦欢，女，1977年9月生，本科，主管技师,主要从事分子诊断工作。

DOI：10.3969/j.issn.1674－1129.2016.02.013

中图分类号：R737.33

文献标识码：A

文章编号：1674－1129(2016)02－0166－04