STAT3和Ki－67在非小细胞肺癌中的表达①

郭文博，邹志田，朱晓峰

(佳木斯大学附属第一医院，黑龙江佳木斯154003)



STAT3和Ki－67在非小细胞肺癌中的表达①

郭文博，邹志田，朱晓峰

(佳木斯大学附属第一医院，黑龙江佳木斯154003)

摘要:目的:观察STAT3和Ki－67在人非小细胞肺癌(NSCLC)组织及癌旁组织中的表达情况，分析两者的表达水平及其与临床病理因素的关系。方法:采用免疫组织化学的方法对NSCLC组织及癌旁组织中的STAT3和Ki－67表达水平进行检测，本次研究共选择73例NSCLC组织和30例癌旁组织，研究STAT3和Ki－67的表达与患者性别、年龄、组织学类型等临床病理特征的关系。结果: STAT3在非小细胞肺癌组织中高表达(57.53%)，显著高于其在癌旁组织中的表达(37.5%) (P＜0.01)。Ki－67在非小细胞肺癌组织中表达的阳性率为75.34%，而癌旁组织的表达率为36.7%。STAT3和Ki－67的表达水平均与性别、年龄和组织学类型无关(P＞0.05)，与淋巴结转移有关(P＜0.05)。结论:①STAT3在非小细胞肺癌中高表达，尤其在有淋巴结转移的患者中，提示STAT3在非小细胞肺癌的发生发展过程中积极参与，是肺癌发病机制中的一个重要因子。②Ki－67主要定位于细胞核，在NSCLC中高表达，与性别、年龄和组织学类型无关，但发现与有无淋巴结的转移具有一定的相关性。

关键词:非小细胞肺癌; STAT3; Ki－67

STAT3是一种双功能蛋白，主要是通过与酪氨酸磷酸化信号通道相偶联而发挥作用的，然而STAT3发生过度表达将引起细胞增殖、调亡之间发生平衡的失调。相关研究表明多种人体肿瘤中存在STAT3的过度表达［2］。Ki－67被视为增殖细胞核的相关性抗原，目前被国内外学者作为生物学标记而广泛使用。恶性肿瘤发生发展的本质是异常细胞无限增殖和凋亡过程受阻，因而Ki－67可作为全细胞周期理想的标记物，目前大量研究表明Ki－67的表达水平上调与肿瘤预后不良具有相关性［3～5］。本课题采用免疫组织化学的方法对NSCLC组织及癌旁组织中的STAT3和Ki－67表达水平进行检测，从而观察STAT3和Ki－67在人非小细胞肺癌［1］(NSCLC)组织及癌旁组织中的表达情况，分析两者的表达水平及其与临床病理因素的关系，为NSCLC的早期诊断、临床治疗及预后判断提供新的理论基础。

1　材料与试剂

1.1材料

收集2013－01～2014－07我院手术切除的非小细胞肺癌存档蜡块，并进行系统分析和整理，从中挑选出各项资料齐整的80例，经过详细的阅片分析最后得到73例有效的病例。本次研究根据WHO标准将73例有效病例进行分型，得到腺癌40例，鳞癌33例，此外还分出无淋巴结转移的病例有24例，有淋巴结转移的病例为49例;同时选取癌旁相对正常肺组织30例作为正常对照组(取自距癌组织边缘＞5cm的肺组织，并经病理证实未查见癌细胞)。在73例非小细胞肺癌组织中，男45例，女28例，年龄34～82岁，平均62.4岁，其中＜60岁的患者有38例，≥60岁的患者有35例。所有患者术前均未进行任何的化疗和放疗。选取的所有标本用福尔马林固定后进行石蜡包埋，连续性切片，且都分别行HE染色后重新复习病理。

1.2主要试剂

鼠STAT3单克隆抗体购自武汉博士德生物工程公司，鼠抗人单克隆Ki－67抗体、S－P试剂盒以及EDTA抗原修复液(pH 8.0)均为北京中杉金桥生物科技有限公司产品。DAB显色试剂盒为武汉博士德生物工程公司产品。不同浓度梯度的酒精以及二甲苯等为中心实验室提供。

2　方法

2.1实验方法

免疫组织化学染色检测［6］STAT3及Ki－67表达，组织经10%甲醛固定和石蜡包埋，5μm厚切片，常规脱蜡和脱水化后，加过氧化物酶阻断内源性酶的活性，分别加入一抗、二抗进行孵育。DAB显色，苏木精复染，封片后镜下观察。

2.2结果判定

免疫组化染色结果的判定:阳性结果为NSCLC组织中的肿瘤细胞。STAT3阳性信号定位为肿瘤细胞的细胞质中出现黄色至棕褐色的颗粒，其具体评价标准有相关参考文献的报道。Ki－67染色定位于细胞核。方法:将染好的组织切片放置于400倍光学显微镜下进行计数，观察视野中的全部肿瘤细胞和免疫染色为阳性结果的细胞(癌旁组织则计数肺泡上皮细胞)，然后计算阳性表达的百分数。若镜下观察到STAT3阳性细胞的百分率＜5%则判定为阴性(－)，阳性细胞百分率为5%～25%时判定为弱阳性(+ )，阳性细胞百分率25%～50%判定为阳性()，阳性细胞百分率＞50%时判定为强阳性()［7］。镜下观察Ki－67阳性肿瘤细胞百分率＜30%时即可判定为阴性，≥30%时则判定为阳性。

2.3统计学方法

采用SPSS17.0统计学软件进行结果的分析。所有测得的实验数据用均数±标准差(±s)表示，检测的结果采用方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

3　结果

3.1 STAT3在NSCLC中的表达

在所选取的73例非小细胞肺癌组织中，STAT3在肿瘤细胞中表达的阳性率为57.53% (42/73)，而癌旁组织的表达率为26.7%(8/30)，差异有统计学意义(P＜0.01)。镜下观察免疫组化结果中的阳性细胞表现为肿瘤细胞的胞浆和部分胞核出现棕黄色的颗粒，此结果与相关的文献报道相一致［8～10］。见图1。

图1　STAT3在NSCLC以及癌旁组织中的表达情况

3.2 Ki－67在非小细胞肺癌中的表达

结果显示Ki－67的表达情况主要定位在肿瘤细胞的胞核中，并且胞核中可见棕黄色的颗粒即为阳性。在所选取的73例非小细胞肺癌组织中，Ki－67在肿瘤细胞中表达的阳性率为75.34% (55/ 73)，而癌旁组织的表达率为36.7% (11/30)，差异有统计学意义(P＜0.01)。见图2。

图2　Ki－67在NSCLC以及癌旁组织中的表达

3.3 STAT3的表达水平与临床病理特征的关系

在所有肺癌标本中，腺癌中的阳性表达率为67.5%(27/40)，在鳞癌中为54.5% (18/33)，差异无统计学意义(P＞0.05)，结果表明STAT3的表达与病理类型无关。此外STAT3的表达与性别、年龄无关(P＞0.05)，而与淋巴结的转移有相关性(P＜0.05)。见表1。

表1　STAT3的表达与临床病理特征的关系

3.4 Ki－67的表达水平与临床病理特征之间的相关性

Ki－67在鳞癌中的表达相对于在腺癌中的表达较高，但无显著差异性(P＞0.05) ;有淋巴结转移组阳性表达率明显高于无淋巴结转移组，且差异有显著性(P＜0.01) ; Ki－67的表达与性别、年龄无关(P＞0.05)。见表2。

表2　STAT3的表达与临床病理特征的关系

4　讨论

近年来，关于STAT3信号通路与非小细胞肺癌(non small cell lung cancer，NSCLC)关系的研究表明在NSCLC组织中STAT3的表达水平较在癌旁组织的表达明显上调，且STAT3表达水平与分化程度具有负相关联系，淋巴结转移组比无淋巴结转移组的表达显著增加，由此可见STAT3与NSCLC的组织分化水平及淋巴结转移具有紧密联系。本次研究通过实验表明，非小细胞肺癌中STAT3的表达显著高于正常对照组(P＜0.05)，此结果与相关文献报道的结果一致。此外，研究还发现了STAT3的表达与病理类型之间没有特定的相关性，并且发现其在腺、鳞癌中的表达比较不存在统计学上的差异，这一研究结果可能与病例数的选择以及病例资料的选择有一定的关系，需要对其进行更深入的研究。Ki－67被视为增殖细胞核的相关性抗原，此次研究表明Ki －67在NSCLC中的表达明显高于正常对照组，且两者的差异有显著性(P＜0.05)。有相关的文献指出如果细胞的增殖过程越活跃，其染色质的复制增加，造成有丝分裂的活动也越活跃，则Ki－67的表达也就明显升高。因此，肿瘤细胞的增殖过程发生失控，这一结果促进了肿瘤细胞的增殖高于正常组织，因此就表现为Ki－67的表达出现明显增高［10］。结果还显示Ki－67在鳞癌中的表达相对于在腺癌中的表达较高，但无显著差异性(P＞0.05)，根据此结果可以推断得出肺鳞癌细胞的增殖活跃程度要高于腺癌的增殖，推测这一结论可能与鳞癌的染色体倍增时间较短，且分裂速度较快有很大的相关性，由此也能够充分说明Ki－67在反映肿瘤细胞的增殖及生长速度上具有意义，然而此理论的具体机理还有待于进一步的研究探索。STAT3和Ki－67在肺癌中均具有较高水平的表达，因此对于这两个因子的探究将会进一步的揭示肺癌发生发展的相关机理，也将会成为肺癌诊断以及治疗的新的研究靶向，进而为肺癌患者提供更为高效的治疗手段，为提高患者的生存周期以及生存质量做出贡献。

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(收稿日期:2015－04-07)

通讯作者:邹志田(1963～)男，黑龙江佳木斯人，博士，教授，硕士研究生导师。E－mail: zouzhitian@163.com。

作者简介:①郭文博(1988～)男，黑龙江佳木斯人，在读硕士研究生。

中图分类号:R586.2+4

文献标识码:B

文章编号:1008－0104(2016) 02－0111－03