乳腺癌生发过程中WWOX和Caspase－9的表达①

王　新，周　昱，廉奇鑫

(佳木斯大学附属第一医院肿瘤科，黑龙江佳木斯154003)



乳腺癌生发过程中WWOX和Caspase－9的表达①

王新，周昱，廉奇鑫

(佳木斯大学附属第一医院肿瘤科，黑龙江佳木斯154003)

摘要:目的: WWOX、Caspase－9两因子通过检测是否在人体乳腺癌组织有表达，并分析WWOX、Caspase－9在乳腺癌组织中的表达特点，研究两者关系。方法:在乳腺正常组织、乳腺癌组织中应用Elivision法测50例正常乳腺组织、乳腺癌组织中，同时整理患者的病理资料进行统计学。结果:在原位癌以及正常乳腺组织、浸润癌组织中的阳性表达率分别是40.00% (18/45) ;53.85%(7/13)，76.92%(10/13)，66.67% (8/12)，58.33% (7/12)，75.56% (34/45)。且WWOX、Caspase－9每组两两相互比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论:①WWOX在乳腺癌组织中呈高表达，Caspase－9在乳腺癌中呈低表达。②WWOX、Csapase－9可能与乳腺癌的发生、发展及预后有关。

关键词:乳腺癌; WWOX、Caspase－9;免疫组织化学Elivision法

在恶性肿瘤中乳腺癌现今已经成为女性最常见的恶性肿瘤之一［1］，我国女性乳腺癌在我国所有恶性肿瘤中比例为7%～10%并且呈上升状态。无论在国内外乳腺癌都是女性常见的恶性肿瘤之一，世界卫生组织(WHO)统计，全球每年有至少120万女性诊断为乳腺癌，50万人死于本病。在发达国家有报道显示乳腺癌是女性恶性肿瘤中的第1位，比例约为32%［2］。

WWOX (ww domain contaming oxidoreductase)因子是近些年新发现的新抑癌基因［3］，它是在人类染色体16q23.3－q24.1中发现的，它含有414个氨基酸。WWOX因子内含有一个特殊的氧化还原酶它其中的短链(short－ehaindehydrogenase reauetasedomainSRD)，国内外学着研究表明WWOX可与ER、雌二醇相结合［3］，并作用于这两个因子上。

半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶－9(Caspase －9)、在人体染色体1号染色体短臂中(p36.3p 36.1)发现该因子，Caspase－9它的结构非常特殊常以无活性酶原结构存在，至今为止只发现Caspase－9含有N末端的原域、大亚单位的20KD和小亚的10KD单位。而该区域中又包含了死亡效应区域DED和Caspase聚集区域CARD，且DED和CARD属于死亡域超家族。本实验应用研究Elivision法检验WWOX、Caspase－9两因子分别在50例乳腺癌、50例癌旁正常组织中的表达情况，并探索WWOX、Caspase－9两因子在乳腺中是否有关系及可能存在的临床意义。

1　资料与方法

1.1标本来源

在佳木斯大学附属第一医院肿瘤科选取2014 －01～2015－05进行手术患者，并筹集术中切除的乳腺标本，通过病理科知深大夫给予冰冻切除术及术后免疫组化结果选定正常乳腺组织及正常良性组织13例、原位癌12例以及浸润癌45例共计70例均为女性，年龄25～66岁。并查询病理编号，在借用病理科存档蜡块，选取术前术后均未放疗以及化疗内分泌治疗靶向治疗等。

1.2主要试剂

从北京博奥森生物有限公司购买WWOX兔抗单克隆抗体以及Caspase－9兔抗单克隆抗体，通用Elivision法试剂盒以及DAB显色试剂都是从北京中衫金桥生物技术有限公司买入。

1.3免疫组化

通过(Elivision法)研究乳腺癌及正常组织中WWOX、Caspase－9是否有表达。

1.4结果判定

WWOX主要以细胞核表达，其表达阳性为内出现黄色或棕褐色颗粒、而Caspase－9在细胞浆内表达，其阳性为出现黄色或棕褐色颗粒。应用双盲法观察所有切片并计数，着色强度明显强于背景处计数。每张病理切片至少在高倍镜下(×200)观察不重复的视野10个，以每视野中有100细胞计算其中阳性细胞数。Elivision法结果根据阳性细胞所占百分比和染色强度分别计分，前者计分按0分为≤0% ～10%，1分为10%～25%，2分为26%～50%，3分为为51%～75%，4分为75%～100%。后者计分按0分为无色，1分为淡黄色，2分为黄色，3分为黄褐色，两者乘积: (－)为0～3分，(+ )为4～6分，()为7～9分，()为10～12分，其中“–”示为阴性表达，“+”以上示为阳性表达。

1.5统计学方法

采用SPSS19.0统计软件包进行数据分析，采用均数±标准差(±s)的方式对计量数据资料进行表示，采用t进行检验，蛋白表达的阳性表达等计数数据资料以率来表示，采用χ2检验或Fish检验，WWOX、Caspase－9蛋白表达的相关性分析采用Spearman等级相关性分析，以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2　结果

2.1 WWOX在正常乳腺组织、乳腺癌组织中的表达

正常乳腺组织、原位癌、浸润癌中WWOX、Caspase－9蛋白表达水平，见表1～2。

表1　三组间WWOX表达水平

表2　三组间Caspase－9表达水平

WWOX蛋白在13例正常乳腺组织中阳性表达为10例，阳性表达率为76.92%;在12例乳腺原位癌中阳性表达为8例，阳性表达率为66.67%;在45例乳腺浸润癌中阳性表达为18例，阳性表达率为40.00%。Caspase－9蛋白在13例正常乳腺组织中阳性表达为7例，阳性表达率为53.85%;在12例乳腺原位癌中阳性表达为7例，阳性表达率为58.33%;在45例乳腺浸润癌中阳性表达为34例，阳性表达率为75.56%。通过秩和检验我们可看出(表1，2) WWOX和Caspase－9分别在正常乳腺组织、原位癌、浸润癌中两两比较，具有统计学意义(P＜0.05)。

2.2浸润癌中WWOX与Caspase－9蛋白表达水平见表3～4。

表3　浸润癌中WWOX表达水平

表4　浸润癌Caspase－9表达水平

WWOX蛋白在16例浸润癌I期乳腺组织中阳性表达为10例，阳性表达率为62.50%;在14例浸润癌II期乳腺组织中阳性表达为5例，阳性表达率为35.71%;在15例浸润癌III期乳腺组织中阳性表达为3例，阳性表达率为20.00%。Caspase－9蛋白在16例浸润癌I期乳腺组织中阳性表达为9例，阳性表达率为56.25%;在14例浸润癌II期乳腺组织中阳性表达为11例，阳性表达率为78.57%;在15例浸润癌III期乳腺组织中阳性表达为14例，阳性表达率为93.33%。通过秩和检验我们可看出(表3，4) WWOX和Caspase－9分别在浸润癌I期、润癌II期、浸润癌III期中两两比较，具有统计学意义(P＜0.05)。

2.3乳腺癌生发过程中WWOX与Caspase－9蛋

白的相关性

①正常乳腺组织、原位癌、浸润癌中WWOX与Caspase－9的相关性:在36例WWOX阳性表达的乳腺组织中Caspase－9阳性表达的例数为16例，在24例Caspase－9阴性表达的的乳腺组织中WWOX阴性表达的例数为4例，且两组数据差异比较具有统计学意义(χ2= 5，P＜0.05)，用统计学方法Spearman分析，结果为二者在正常乳腺组织、原位癌、浸润癌组织中表达呈负相关(rs=－0.336，P＜0.05)，提示二者在乳腺癌生发过程中起到了负相关作用，见表5。

表5　正常乳腺组织、原位癌、浸润癌中WWOX与Caspase－9的相关性

②乳腺癌中WWOX与Caspase－9的相关性: 在26例WWOX阳性表达的乳腺癌组织中Caspase －9阳性表达的例数为14例，在16例Caspase－9阴性表达的的乳腺癌组织中WWOX阴性表达的例数为4例，且两组数据差异比较具有统计学意义(χ2= 5.77，P＜0.05)，用统计学方法Spearman分析，结果为二者在乳腺癌组织中表达呈负相关(rs=－0.369，P = 0.005)，提示二者在乳腺癌中起到了负相关作用，并且随着病情加重负相关性加大，见表6。

表6　原位癌、浸润癌中WWOX与Caspase－9的相关性

3讨论

乳腺癌的发生与致癌基因的激活、抑癌基因的失活或缺失有密切关系。2000年Bednarek等人鉴定出的新基因WWOX可与多种肿瘤的发生有一定

关联，如在食管癌，胃癌，肺癌，乳腺癌，前列腺癌，卵巢癌等恶性肿瘤中都出现不同程度的WWOX基因外显子丢失、杂合性缺失及的表达降低等异常表达［5］。前人对WWOX、Caspase－9在各种恶性肿瘤的表达已经进行了初步研究，并且在乳腺癌中也有研究，有过相同的观点。WWOX在浸润癌中的阳性表达明显低于乳腺原位癌组织，两者比较(P＜0.05)差异均有统计学意义。Caspase－9在浸润癌中的阳性表达明显高于乳腺原位癌组织。根据本实验的WWOX和Caspase－9在乳腺癌组织中阳性表达数据，WWOX、Caspase－9同时阳性表达的例数为14例，WWOX、Caspase－9同时阴性表达的例数为4例，且两组数据差异比较具有统计学意义(χ2= 5.77，P＜0.05)，用统计学方法Spearman分析，结果为二者在乳腺癌组织中表达呈负相关(rs=－0.369，P＜0.05)。本实验希望通过WWOX、Caspase－9在乳腺癌生发过程中的表达以及在病理、临床分其中数据与结果，能为检测乳腺癌发生、发展、治疗等方面提供新的依据，为治疗提供新思路。

参考文献:

［1］王新，范立君，李壮，等.GRP78、GRP94在乳腺癌中的表达及其意义［J］.黑龙江医药科学，2014，37(6) : 89－91

［2］王博，王宇，李壮.双侧乳腺癌24例诊治分析［J］.黑龙江医药科学，2004，27(2) : 21

［3］Guler G，Uner A，Guler N，et al.The fragile genes FHIT and WWOX are inactivated coordinately in invasive breast carcinoma［J］.Cancer，2004，100(8) : 1605－1614

［4］Ried K，Finnis M，Hobson L，et al.Common chromosomal fragile site FRA16D sequence: Identification of the FOR gene spanning FRA16D and homozygous deletions and translocation breakpoints in cancer cells［J］.Hum Mol Genet，2010，9: 1651－1663

［5］Chang NS，Doherty J，Ensign A，et al.WOX1 is essential for tumor necrosis factor，UV light，staurosporine，and p53－mediated cell death，and its tyrosine 33－phosphorylated form binds and stabilizes serine 462 phosphorylated p53［J］.Biol Chem，2005，280(52) : 43－100，108

(收稿日期:2015－12－07)

通讯作者:周昱(1969～)男，黑龙江集贤人，学士，副主任医师，硕士研究生导师。E－mail: zhouyu731@126.com。

作者简介:王新(1962～)男，黑龙江佳木斯人，硕士，主任医师，硕士研究生导师。

基金项目:①黑龙江省卫生厅科研项目，编号: 2013244。

中图分类号:R737.9

文献标识码:B

文章编号:1008－0104(2016) 02－0016－02