Bmi1、EZH2在食管鳞癌中的表达及其临床价值

幸小均

618300 四川省广汉市人民医院



Bmi1、EZH2在食管鳞癌中的表达及其临床价值

幸小均

618300 四川省广汉市人民医院

【摘要】目的探讨Bmi1与EZH2共同高表达对食管鳞癌的影响。方法回顾性分析82例食管鳞癌患者的临床资料，考察Bmi1与EZH2在食管鳞癌组织中的表达情况及其对食管鳞癌患者生存率的影响，并进一步分析Bmi1与EZH2的表达情况对食管鳞癌的影响是否存在关联性。结果肿瘤组织Bmi1与EZH2的IS得分均明显高于癌旁组织(P<0.05)；Bmi1高表达组患者2～5年及5年生存率较Bmi1低表达组低(P<0.05)，EZH2高表达组患者各时间段生存率与低表达组比较差异无统计学意义(P>0.05)；Bmi1与EZH2共同高表达组与其他组的食管鳞癌患者的P16表达情况差异无统计学意义(P>0.05)。结论Bmi1与EZH2与食管鳞癌的发生和发展有密切联系，且影响食管鳞癌患者的预后，Bmi1与EZH2共同高表达是食管鳞癌发生的独立危险因素。

【关键词】Bmi1基因；EZH2基因；食管鳞癌；危险因素

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:537～540)

Bmi1与EZH2均属于多梳基家族的成员(PcG)，Bmi1为多梳基抑制复合体1(PRC1)的重要组成之一[1]，EZH2参与多梳基抑制复合体2(PRC)的组成[2]。多梳基家族(PcG)基因具有高度的保守性，在组织器官的发育中发挥重要作用，并且参与调控多种生理过程，包括调节靶基因的转录，干细胞的更新，细胞分化以及肿瘤发生等[3-5]。相关研究已经证实，Bmi1与EZH2在多种肿瘤组织中异常表达，表明其在肿瘤的发生和发展中发挥重要作用[6]，但是Bmi1和EZH2与食管鳞癌的发生和发展的相关性尚不完全清楚。本研究对我院确诊的82例食管鳞癌患者进行回顾性研究，现将相关内容报告如下。

1材料与方法

1.1一般资料

选取2006年4月-2010年4月期间我院确诊的82例食管癌患者，其中男性47例，女性35例，年龄43～78岁，平均年龄(58.3±5.4)岁。本研究82例食管鳞癌患者均符合以下入选标准：①所选标本经病理学确诊为食管鳞癌和癌旁组织；②均未经放化疗治疗；③患者随访资料完整。所有患者均于手术前获取患者的食管鳞癌组织和癌旁组织，并制作石蜡标本，用于进一步的免疫组化分析。

1.2研究方法

所有患者均于手术时切除标本进行10%福尔马林固定，石蜡包埋，然后进行(1)脱蜡水化：置于二甲苯Ⅰ~Ⅲ 各5 min，100%酒精Ⅰ~Ⅲ 各1 min，95%酒精 1 min， 75%酒精 1 min，双蒸水洗涤 2 min 共2次；(2)抗原修复：10 mM 枸橼酸缓冲液(pH6.0)，微波加热97 ℃12 min，室温自然冷却；(3)1×PBS洗涤2 min，2次；双蒸水洗涤 5 min 共3次，3% H2O2室温孵育10 min；(4)双蒸水洗涤 2 min，1次，1×PBS洗涤2～5 min，2次；(5)封闭：5% BSA-PBST 室温1 hr；(6) 一抗40 ℃孵育过夜(不超过16 hr)；(7)1×PBST洗涤8 min，2次；1×PBS洗涤8 min，2次；(8)二抗室温孵育 1 hr；(9)1×PBST洗涤8 min，2次；1×PBS洗涤8 min，2次；(10)ABC室温孵育 10 min；(11)1×PBS洗涤8 min，3次；(12)DAB 染色出现阳性结果后用双蒸水冲洗终止染色过程；(13)苏木精复染1 min；后用双蒸水洗涤5 min。(14)脱水保存：系列75%乙醇30 s；100%乙醇30 s；二甲苯30 s；中性树胶封闭后盖上玻片，避免气泡产生[7]。

本研究的免疫组织化学染色评分标准为：根据切片中上皮细胞的免疫组织化学着色深浅的比例分为弱阳性、阳性、强阳性，分别记1分、2分、3分。样本中Bmi1或EZH2阳性表达细胞所占总细胞的比例分为5级：<5%(0分)，5%~25%(1分)，26%~50%(2分)，51%~75%(3分)和>75%(4分)。根据着色深浅与阳性细胞比例计算免疫反应得分(immunoreactivity score，IS)，IS=样本着色程度得分×阳性细胞比例得分[8]。

Bmi1高表达是指Bmi1免疫反应得分≥6分，EZH2高表达是指EZH2免疫反应得分≥10分，P16高表达是指P16免疫反应得分≥3分[9]。

1.3统计学方法

使用SPSS 16.0软件比较各组间差异，计量资料采用均数±标准差表示，计数资料以绝对数和百分率表示，组间比较采用q检验加方差F分析，P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1Bmi1与EZH2在食管鳞癌组织及癌旁组织中的表达差异

肿瘤组织Bmi1与EZH2的IS得分较癌旁组织高，差异具有统计学意义(P<0.05)；在2种组织中P16的表达差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1　Bmi1、EZH2与P16在食管鳞癌患者组织中的表达情况

注：*为与癌旁组织比较，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2食管鳞癌患者Bmi1与EZH2表达与其临床资料的关系

根据患者肿瘤组织Bmi1的IS得分分成Bmi1高表达组(Bmi1 H)和低表达组(Bmi1 L)。其中Bmi1高表达组19例，占23.17%;Bmi1低表达组63例，占76.83%。患者性别、肿瘤大小、肿瘤分化程度、临床分期、以及是否发生远处转移在Bmi1高表达组和低表达组比较差异有统计学意义(P<0.05)。

根据患者肿瘤组织EZH2的IS得分分成EZH2高表达组(EZH1 H)和EZH2低表达组(EZH2 L)。其中EZH2高表达组49例，所占比例为59.75%；EZH2低表达组33例，所占比例为40.25%。患者临床分期、以及是否发生远处转移在EZH2高表达组和低表达组比较差异有统计学意义(P<0.05)。,见表2。

表2　食管鳞癌患者Bmi1与EZH2表达与其临床

Bmi1与EZH2共同高表达组与其他组的食管鳞癌一般临床资料比较差异均无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3　Bmi1与EZH2的不同表达组与食管鳞癌患者的一般临床资料分析(例，%)

2.3Bmi1与EZH2的表达与食管鳞癌患者生存率的关系

通过比较各组0~2年、2~5年及5年以上生存率发现，Bmi1 H组的2～5年以及5年生存率低于Bmi1 L组，差异具有统计学意义(P<0.05)；而EZH2 H组与EZH2 L组的各时间段生存率差异均无统计学意义(P>0.05)，见表4。

表4　不同Bmi1与EZH2的表达组患者食管鳞癌患者

进一步分析Bmi1与EZH2共同高表达组Bmi1(H)EZH1(H)与其他各组患者生存率发现，Bmi1与EZH2共同高表达并不缩短患者生存期，(P>0.05)，见表5。

表5　Bmi1与EZH2共同高表达食管鳞癌患者与其他

2.4P16在Bmi1与EZH2高表达食管鳞癌患者中的表达情况

对不同组别患者的P16表达情况进行分析，发现Bmi1与EZH2共同高表达组与其他组的食管鳞癌患者的P16表达情况差异无统计学意义(P>0.05)，见表6。

表6　不同Bmi1与EZH2表达组患者的P16表达

3讨论

原癌基因Bmi1和EZH2同属于多梳基因家族，其具有高度的保守性，相关研究表明Bmi1和EZH2在细胞的生长、增殖中均发挥重要调节作用[10-12]。研究表现Bmi1在胃癌组织中的高表达患者的存活期较短，能够作为胃癌诊断和治疗的一个有价值的标志物[13]。最新的研究提出Bmi1和EZH2可以作为某些癌症治疗的分子靶点[14]。

本研究发现，食管鳞癌组织的Bmi1和EZH2免疫反应得分明显高于癌旁组织，表明食管鳞癌组织高表达Bmi1和EZH2可能在食管鳞癌的发生和发展过程中起到促进作用。相关研究已经证实，Bmi1与多种肿瘤包括白血病、乳腺癌、胃癌、肺癌、膀胱癌、大肠癌及食管癌等的发生和发展有密切关系[15-16]。通过分析Bmi1的不同表达程度与患者临床资料的结果表明Bmi1的表达与食管鳞癌生长、远处转移和TNM分期具有相关性，而EZH2高水平表达也可能参与食管鳞癌的发生和发展。随访发现，Bmi1表达高的患者2～5年以及5年以上生存率明显低于Bmi1低表达组，表明Bmi1高水平表达影响了食管鳞癌患者手术的预后。

本研究进一步对Bmi1和EZH2共同高表达对食管鳞癌患者的影响， 结果显示Bmi1和EZH2共同高表达组食管鳞癌患者的一般临床资料、生存率以及抑癌基因P16的表达情况与其他组比较差异均无统计学意义。本研究主要从食管鳞癌患者的肿瘤组织标本的免疫组化方面着手，并没有深入到细胞分子水平，有一定的局限性。Bmi1与EZH2的表达与食管鳞癌的更深层次的联系，还有待进一步的研究证实。

综上所述，Bmi1与EZH2与食管鳞癌发生和发展有密切联系，且影响食管鳞癌患者的预后。

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(编辑：甘艳)

Expression of Bmi-1 and EZH-2 in Esophageal Squamous Cell Carcinoma and Its Clinical Value

XINGXiaojun.People’sHospitalofGuanghan，Guanghan,618300

【Abstract】ObjectiveTo explore co-overexpression of Bmi1 and EZH2 on esophageal squamous cell carcinoma.MethodsRetrospective analysis of the clinical data of 82 patients with esophageal squamous cell carcinoma was conducted.Expression of of Bmi1 and EZH2 in esophageal squamous cell carcinoma and its influence on survival rate were detected,and further analysis of the association of Bmi1 and EZH2 expression in esophageal squamous cell carcinoma and its impact was conducted.ResultsThe IS scores of Bmi1 and EZH2 in tumor tissues were significantly higher than adjacent tissues (P<0.05);2~5 and 5-year survival rates of the patients with high expression of Bmi1 were lower than patients with low expression of Bmi1(P<0.05),there had no significant difference in the survival rates at different time between patients with high EZH2 expression and patients with low EZH2 expression (P>0.05);there had no significant difference in P16 expression between patients with co-overexpression of Bmi1 and EZH2 group and other group (P>0.05).ConclusionBmi1 and EZH2 are closely related with the occurrence and development of esophageal squamous cell cancer,and it influence the prognosis of patients,and co-overexpression of Bmi1 and EZH2 is an independent risk factor for esophageal squamous cell carcinoma.

【Key words】Bmi1gene;EZH2 gene;Esophageal squamous cell carcinoma;High risk factor

(收稿日期2015-06-02修回日期 2015-11-20)

中图分类号：R735.1

文献标识码：A

文章编号：1001-5930(2016)04-0537-04

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.04.005