Th17/Treg细胞因子在乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者中的表达及意义

施文娟　贾瑾堂　李彩东　王慧芬

730046　甘肃　兰州市第二人民医院传染科(施文娟，贾瑾堂，李彩东)；解放军第三○二医院(王慧芬)



·论著·

Th17/Treg细胞因子在乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者中的表达及意义

施文娟贾瑾堂李彩东王慧芬

730046甘肃兰州市第二人民医院传染科(施文娟，贾瑾堂，李彩东)；解放军第三○二医院(王慧芬)

【摘要】目的探讨乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者(HBV-ACLF)血清中Th17/Treg细胞因子(IL-17/IL-35)的表达及其临床意义。方法收集兰州市第二人民医院2010年12月至2013年12月收治的HBV-ACLF患者共33例 (HBV-ACLF 组)，选取同期住院的慢性乙型肝炎(CHB)患者42 例(CHB组)和20 例健康体检者(健康对照组)。采用ELISA 法检测3组病例血清中IL-17与IL-35水平，同时检测各项肝功能指标。结果HBV-ACLF组与CHB组患者IL-17、IL-35水平分别为(137.47±60.81)、(242.39±81.80)、(121.63±57.25)、(212.05±123.98) pg/mL，均高于健康对照组(16.37±8.47)、(33.6±24.63) pg/mL，(t=6.496、6.136、5.857、5.441，P<0.01)；HBV-ACLF组与CHB组IL-17、IL-35水平差异无统计学意义(t=0.987、1.034，P>0.05)。结论IL-17、IL-35的高水平表达可能与乙型肝炎慢加急性肝功能衰竭的发生有关。

【关键词】慢加急性肝衰竭；慢性乙型肝炎；Th17/Treg细胞因子

在慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)基础上发生的慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure，ACLF)是我国传染病死亡的重要原因之一。目前很多研究证实Th17参与到急性或慢性肝损害的炎性反应中，其分泌的IL-17能够调控粒细胞的生成，阻断细胞外病原体的入侵，同时和自身免疫性疾病关系密切，IL-17还能刺激细胞因子IL-6、TNF-α、IL-1β的表达，因此，IL-17在HBV感染过程中能够促进肝脏炎性反应，导致肝功能衰竭[1]。调节性T细胞(Treg)是一组自然存在或来自于诱导性T细胞的细胞亚群，可以通过控制炎性反应(如暴发性肝炎、自身免疫性肝炎)来减轻肝损伤，IL-35作为唯一由Treg细胞特异性分泌的抑制性细胞因子，在机体抗感染、维持自身免疫耐受及避免自身免疫性疾病的发生等方面均有重要作用[2]。为进一步研究HBV-ACLF患者中Th17与Treg细胞因子的变化，研究比较了HBV-ACLF患者和CHB患者血清IL-17与IL-35的水平，现报道如下。

资料和方法

一、研究对象

选择2010年12月至2013年12月兰州市第二人民医院的HBV-ACLF患者33例，其中男性28例，女性5例，年龄18～63岁，平均年龄(35.1±12.3)岁；选取同期住院的CHB患者42例，其中男性36例，女性6例，年龄19～61岁，平均年龄(35.7±10.1)岁；健康对照组为健康体检者20名，其中男性16名，女性4名，年龄29～48岁，平均年龄(32.6±4.8)岁。CHB诊断标准参照《慢性乙型肝炎防治指南》[3]。HBV-ACLF 诊断标准参照《肝衰竭诊疗指南》[4]。排除其他病毒感染、免疫相关性疾病和免疫调节剂使用者导致的肝功能衰竭。

二、标本采集与检测

收集患者和健康对照人群清晨空腹静脉血5 mL, 分离血清, -80℃冰箱保存备用。细胞因子IL-17、IL-35检测采用双抗体夹心ELISA法, 试剂盒由美国R&D公司生产，上海尚乐生物技术有限公司分装，具体操作按说明书进行。

三、统计学方法

结果

一、临床资料

3组研究对象性别构成比与年龄均值经统计学分析差异无统计学意义(χ2=0.035，P=0.983；F=0.523，P=0.596)；HBV-ACLF组与CHB组ALT、AST差异无统计学意义(P>0.05)，TBil、Alb、PTA、INR、TC差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

HBV-ACLF组33例患者最终有26例完成随访，治愈好转14例(早期5例，中期7例，晚期2例)，12例患者死亡，7例因病情加重放弃治疗出院，9例患者住院期间合并细菌、真菌等感染。CHB组患者42例均临床治愈或好转出院。

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注：HBV-ACLF为乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭；CHB为慢性乙型肝炎；ALT为丙氨酸氨基转移酶；AST为天冬氨酸氨基转移酶；TBil为总胆红素；Alb为白蛋白；PTA为凝血酶原活动度；INR为国际标准化比值；TC为总胆固醇

二、HBV-ACLF组、CHB组患者与HC 组IL-17、IL-35水平比较

3组研究对象IL-17、IL-35水平经单因素方差分析，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表2；3组研究对象组间进行LSD-t检验分析，结果显示，ACLF组与CHB组患者IL-17、IL-35水平均高于健康对照组(P<0.05)，ACLF组与CHB组患者IL-17、IL-35水平差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表2　3组研究对象IL-17、IL-35水平比较的

三、HBV-ACLF患者治愈好转组与无效死亡组IL-17、IL-35水平比较

HBV-ACLF患者中治愈好转组与无效死亡组血清中IL-17、IL-35水平经t检验，差异无统计学意义(P>0.05)，见表4。

表3　3组研究对象IL-17、IL-35检测结果的LSD-t检验分析

表4　HBV-ACLF 患者治愈好转组与

讨论

Th17是一类在分化、生物学作用等方面都不同于Th1和Th2细胞的辅助性T淋巴细胞，以分泌IL-17为主要特征，IL-17作为一种强致炎因子可能参与了ACLF免疫反应，通过诱导中性粒细胞、NK细胞等至肝脏炎性部位，加重肝脏损伤。目前很多研究证实，IL-l7参与急性或慢性肝损害的炎性反应。Lemmers等[5]研究发现，与健康对照组相比，酒精性肝病患者血浆IL-17水平明显升高，外周血分泌IL-17的CD4+T淋巴细胞比例明显升高，PBMC经PHA刺激后IL-17分泌细胞的比例也明显增加。Yasumi等[6]发现，IL-17的水平在急性肝损害患者和暴发性肝衰竭患者显著升高，而且IL-17水平与凝血酶原时间有关，并指出IL-17可以作为急性肝损伤程度的一项指标。

Treg和Th17来源于同一原始CD4+T细胞，发挥与Th17相反的作用，防止机体发生免疫过激反应， IL-35是2007年底由Lauren等[7]研究发现并命名，它是目前唯一发现的由Treg分泌的抑制性细胞因子，与多种自身免疫性疾病如类风湿性关节炎等密切相关[8]，IL-35在感染性疾病中亦具有重要的作用。在急性感染时，IL-35可以通过诱导Th1细胞的增殖来清除病原体，另一方面也可以通过抑制Th17细胞的分化从而阻止过度的免疫反应对机体的免疫损伤[9]；慢性感染时，IL-35可刺激调节性T细胞的增殖，抑制效应性T细胞对机体的免疫损伤，但同时也造成感染的慢性化如慢性HBV感染等[10]。Stoop等检测23例健康对照和9例HBV急性感染恢复期患者外周血中的Treg数量和功能，发现慢性HBV感染患者外周血中Treg数量明显高于非感染人群。

目前已知，人类感染HBV后预后差异性很大，患者病情的进展与机体特异性T细胞反应强弱密切相关。超强的免疫应答被认为是慢加急性肝衰竭的重要发病机制之一。为进一步研究Th17/Treg细胞因在HBV-ACLF中的免疫作用机制，本研究观察了IL-17与IL-35在例患者血清中的表达，并与CHB患者和健康人群进行了比较，结果发现：HBV-ACLF与CHB患者血清中IL-17与IL-35水平明显高于健康对照组，由此可推断IL-l7与IL-35参与到慢性肝损害的炎性反应中，与目前的相关研究结论相符合[11-14]，但是HBV-ACLF与CHB两组患者之间未见明显差异，与陈丽等[2]的研究结果不符，可能与样本量少有关。

总之，以上对IL-17与IL-35的研究提示Th17/Treg细胞因子与HBV-ACLF的发病有一定相关性，对IL-17与IL-35的研究有助于进一步了解Th17细胞与Treg细胞在慢性乙型肝炎以及慢加急性肝衰竭中的作用机制，并将为HBV-ACLF的免疫调控治疗提供一定的理论基础。

参考文献

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3 中华医学会肝病学分会，中华医学会感染病学分会. 慢性乙型肝炎防治指南(2010年版). 肝脏，2011，16: 2-16.

4 中华医学会感染病学会分会肝衰竭与人工肝学组，中华医学会肝病学分会重型肝病与人工肝学组. 肝衰竭诊疗指南. 中华肝脏病杂志，2006，14:643- 646.

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6 Yasumi Y, Takikawa Y, Eedo R, el al.Interleukin-1 7 as a new marker of severity of acute hepatic injury ．Hepatol Res，2007，37：248-254.

7 Lauren WC，Creg JW，Timothy TK，et al. The inhibitory cytokine IL-35 contributes to regulatory T-cell function. Nature，2007，229: 566-569.

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9 Seyerl M，Kirchberger S，Majdic O，et al. Human rhinoviruses induce IL-35-producing Treg via induction of B7-H1(CD274)and sialoadhesin (CD169)on DC. Eur J Immunol，2010,40：321-329.

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11李晨，王慧芬，万谟彬. HBV相关慢加急性肝衰竭患者体内细胞因子表达及动态变化的研究.传染病信息，2011,24：151-155.

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13徐燕，杜文军，秦来英，等. 白细胞介素17在乙型肝炎肝纤维化中的表达及意义.细胞与分子免疫学杂志，2009，12：279-280.

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(本文编辑：钱燕)

Study on serum levels of Th17/ Treg cytokines in HBV-related acute-on-chronic liver failure patientsSHIWen-juan，JIAJin-tang，LICai-dong，WANGHui-fen.DepartmentofInfectiousDiseases,theSecondPeople'sHospitalofLanzhou,Gansu730046,China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression levels of Th17/Treg cytokines in HBV-related acute-on-chronic liver failure (HBV-ACLF) patients and its clinical significance. MethodsNinety-five patients admitted in Lanzhou Second People's Hospital from December 2010 to December 2013 were enrolled, including 33 HBV-ACLF patients (HBV-ACLF group), 42 chronic hepatitis B patients (CHB group) and 20 healthy people (HC group). Enzyme-linked immune-sorbent assay (ELISA) was applied to detect the levels of IL-17 and IL-35 among groups, respectively. Meanwhile, measurement of liver function parameters was carried out. ResultsLevels of IL-17 and IL-35 in both HBV-ACLF group (137.47±60.81 and 242.39±81.80 pg/mL) and CHB group (121.63±57.25 and 212.05±123.98 pg/mL) were higher than those in HC group (16.37±8.47 and 33.6±24.63 pg/mL) (t=6.496, 6.136, 5.857 and 5.441, P<0.01), respectively. There were no significant differences in IL-17 and IL-35 levels between HBV-ACLF group and CHB group (t=0.987 and 1.034, P>0.05). ConclusionHigh expression levels of IL-17 and IL-35 might be associated with occurrence of HBV-ACLF.

【Key words】Acute-on-chronic liver failure；Chronic hepatitis B；Th17/Treg cytokines

(收稿日期：2015-09-18)