速胰康片剂对急性胰腺炎小鼠血清白细胞介素-6的影响①

李　思，王　歆，沈德凤

(佳木斯大学药学院，黑龙江省生物药制剂重点实验室，黑龙江 佳木斯 154007)



速胰康片剂对急性胰腺炎小鼠血清白细胞介素-6的影响①

李思，王歆，沈德凤

(佳木斯大学药学院，黑龙江省生物药制剂重点实验室，黑龙江 佳木斯 154007)

摘要：目的：探讨速胰康片剂对急性胰腺炎(AP)小鼠血清白细胞介素-6(IL-6)的影响，为其临床应用提供理论性基础和实验性数据。方法：采用腹腔注入20%中性L-精氨酸溶液制备AP模型，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各实验组的小鼠血清IL-6水平。结果：通过腹腔注入20%中性L-精氨酸溶液造模成功。高剂量治疗组和中剂量治疗组在各时间段的血清IL-6水平与AP模型组的相比显著减少(P<0.05，P<0.01)。低剂量治疗组和阳性对照组在72h时的血清IL-6水平相比于AP模型组也明显降低(P<0.05)。除此之外，治疗组在其他时间段的血清IL-6水平相比于AP模型组也均有所降低。结论：速胰康片剂能显著降低急性胰腺炎小鼠血清IL-6含量，减缓急性炎症。在治疗AP，缓解病情，减轻痛苦等方面具有积极作用。

关键词：速胰康片剂；急性胰腺炎；白细胞介素-6

急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)是临床常见的急症，具有起病急、进展快、病情危重、并发症多、病死率高等特点[1]。传统医学对AP的治疗具有较深入的研究基础和悠久的使用历史，中药复方制剂治疗AP不仅价格低廉、不良反应少，而且可通过多途径、多靶点发挥作用，避免严重并发症的出现，治疗效果显著[2,3]。速胰康片剂是采用临床医生经验处方，设计的中药复方制剂，成分主要为大黄、栀子、厚朴、半夏等中药及其提取物等，具有毒副作用小，治疗费用较低等特点。从之前的研究工作中可知[4]，速胰康片剂能够有效地降低小鼠的血清淀粉酶(AMS)活性及肠组织肿瘤坏死因子(TNF-α)水平。本研究在之前的工作基础上进一步探讨速胰康片剂对小鼠急性胰腺炎白细胞介素-6的影响，为其临床应用提供理论性基础和实验性数据。

1实验材料

1.1实验动物及分组

1.1.1实验动物：挑选符合标准的雄性昆明种小鼠180只(动物号：黑动字99102001；来源地：佳木斯大学实验动物中心)，每只小鼠重为19~23g。

1.1.2分组：运用统计学将288只小鼠按随机原则分为6组，分别为正常对照组、AP模型组、阳性对照组、速胰康片剂高剂量治疗组、中剂量治疗组、低剂量治疗组，每组48只小鼠。

1.2药品

实验室自制的速胰康片剂，成分主要为大黄、栀子、厚朴、半夏等中药及其提取物等。

1.3试剂及仪器

L-精氨酸(森弗生物技术有限公司)；IL-6检测试剂盒(Sigma公司)；AMS试剂盒(南京建成生物工程研究所)；超速冷冻离心机(北京中西泰安技术服务有限公司)。

2实验方法

2.1AP模型的制备

将小鼠组禁食(不禁水)12h后腹腔注入20%的中性L-精氨酸溶液3g/kg体重，间隔1h后再注入一次，诱导急性胰腺炎小鼠模型[5]。

2.2各实验组准备

①AP模型组(阴性对照组)处理如上；②正常对照组：腹腔注入等量无菌生理盐水；③治疗组：采用等容积不同浓度药液灌胃给药10mL/kg体重(每10mL药液中药物的含量分别为1.71g(高剂量)、0.86g(中剂量)、0.43g(低剂量))，每6小时一次，3d预处理后给以L-精氨酸溶液(方法同AP模型组)，注入后继续按预处理方式给药直至处死；④阳性对照组： 10%大黄溶液浸膏0.11g/kg体重灌胃给药，每6小时一次，3d预处理后给以L-精氨酸溶液(方法同AP模型组)，注入后继续按预处理方式给药直至处死。

2.3指标检测

2.3.1AMS活性检测:注入L-精氨酸溶液后，对小鼠在0、6、12、24h时选取眼眶取血，并将血液置于超速冷冻离心机中离心15min(10000r/min)，取出血清部分，并保存在-20℃冰箱内备用。采取碘-淀粉比色法检测AMS活性，依照AMS试剂盒使用规范认真操作并详细记录数据。

2.3.2小鼠存活率:各实验组准备完毕后，分别于6、12、24h观察各实验组动物的存活情况和死亡情况并进行记录，计算各实验组的总存活率。

2.3.3白细胞介素-6含量的检测:各实验组处理完后，对各组小鼠在12、24、48、72h选取眼眶取血，并将血液置于超速冷冻离心机中离心15min(10000r/min)，取出血清部分，并保存在-20℃冰箱内备用。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-6水平，严格按规范要求进行操作并详细记录数据，单位为ng/L。

2.4统计学方法

3结果

3.1AMS活性

AMS的活性变化见表1。使用L-精氨酸溶液诱导小鼠AP模型后， AP模型组在6、12、24h的AMS活性相比于正常对照组显著上升(P<0.01)，而且随着时间的延长，AMS活性逐渐升高，在12h时达到最高值，AP小鼠建模成功。

表1　小鼠血清淀粉酶(AMS)测定±s)

与正常对照组比较，##P<0.01。

3.2各实验组小鼠存活率及及死亡率

各实验组小鼠在处理完毕后6、12、24h时的存活状态如表2所示。高剂量治疗组的小鼠在6h、12h、24h的存活率分别为94.4%、77.6%、73.0%，总生存率为83.33%，相比于AP模型组的72.92%，小鼠生存率有明显的提高。中剂量治疗组、低剂量治疗组以及阳性对照组除了在6h时死亡率较高外，其余各时间小鼠的累计生存率都高于AP模型组，分别达到79.17%、77.08%、77.08%，正常对照组全部存活。而且随着治疗量的增加，小鼠总生存率逐渐升高，生存时间也有所增加。

3.3血清IL-6水平

血清IL-6水平变化见表3。高剂量治疗组和中剂量治疗组在各时间段的血清IL-6水平与AP模型组的相比显著减少(P<0.05，P<0.01)。低剂量治疗组和阳性对照组在72h时的血清IL-6水平相比于AP模型组也明显降低(P<0.05)。除此之外，治疗组在其他时间段的血清IL-6水平相比于AP模型组也有所降低，说明通过服用速胰康片剂能明显抑制血清IL-6水平的升高。

表2　小鼠存活情况

表3　小鼠血清IL-6水平检测

括号内为各组进行实验小鼠数目，与正常对照组比较，##P<0.01，#P<0.05，与AP模型组比较，**P<0.01，*P<0.05。

4讨论

IL-6是一种重要的急性反应期炎症递质，主要由活化的单核巨噬细胞产生，血清IL-6水平能很好地评估急性胰腺炎的严重程度，可作为预测急性胰腺炎疾病程度的重要指标[6]。在本实验研究中，相比于正常对照组，AP模型组的小鼠血清IL-6水平明显升高，且有部分小鼠死亡，小鼠存活时间明显降低，但通过速胰康片剂灌胃给药之后可以发现小鼠血清IL-6水平明显下降或者被抑制，存活率以及存活时间明显提高，这说明通过服用速胰康片剂有助于抑制血清IL-6水平的升高，可有效抑制释放炎症介质，阻断其发病环节，对防治AP有积极作用，在缓解病情，提高存活时间以及存活率有较大帮助。同时速胰康片剂是采用临床医生经验处方，设计的中药复方制剂，成分主要为大黄、栀子、厚朴、半夏等中药及其提取物等，具有毒副作用小，治疗费用较低等特点，而且已知能够有效地降低小鼠的血清淀粉酶(AMS)活性及肠组织肿瘤坏死因子(TNF-α)水平。因此，使用速胰康片剂治疗AP能够有效地抑制AP病情的恶化，减轻痛苦，降低治疗费用，有助于AP患者早日康复。

参考文献:

[1]耿佳颖,李美玲,韩桂华,等.急性胰腺炎的临床护理体会[J]. 黑龙江医药科学, 2015, 38(2): 106-107

[2]中华中医药学会脾胃病分会.急性胰腺炎中医诊疗专家共识意见[J]. 中华中医药杂志,2013,28(6):1826-1831

[3]王小全,艾迎春.丹参注入液对于急性胰腺炎大鼠血清中NF-κB、TNF-α、IL-6的影响[J]. 黑龙江医药科学, 2015, 38(2):58-60

[4]沈德凤,张浩,周海瑞,等. 速胰康颗粒对小鼠急性胰腺炎的作用研究[J]. 中国民康医学, 2012, 24(1): 16-20

[5]白金霞,白金运,石秀菊,等. IL-22介导的STAT3信号通路对急性重症胰腺炎小鼠的保护作用[J]. 山东大学学报, 2015, 53(6):1-6

[6]聂军. 血清促炎细胞因子白介素-6与急性胰腺炎严重程度的相关性[J]. 世界华人消化杂志, 2015, 23(17): 2816-2819

The research on the influence of SYK on serum IL-6 levels in mices with acute pancreatitis

LISi,WANGXin,SHENDe-feng

(The Medicine College of Jiamusi University, Key Laboratory of Biological Medicine Preparations, Heilongjiang Province, Jiamusi 154007, China)

Abstract:Objective: To study the influence of SYK on serum IL-6 levels in mices with acute pancreatitis on the basis of previous researches; to provide theoretical basis and experimental data for clinical application. Methods: AP model was made by injecting 20% neutral L-arginine, the serum IL-6 levels of the experimental group and the control group was determined by ELISA. Results: Successful AP model was made by injecting 20% neutral L-arginine. Each dose of SYK could reduce the serum IL-6 levels in mice. Compared with AP model group, the serum IL-6 levels of high dose group and medium dose group were significantly reduced each time (P<0.05,P<0.01). The serum IL-6 levels of low dose group and positive control group at 72h were also significantly reduced. In addition, the serum IL-6 level of treatment group in other periods were also decreased. Conclusions: SYK could effectively reduce the serum IL-6 levels in mice with acute pancreatitis, and have a positive effect in the treatment of AP, remission of disease, relieving the pain and so on.

Key words:SYK; acute pancreatitis; IL-6

(收稿日期：2015-07-30)

中图分类号：R576

文献标识码：A

文章编号：1008-0104(2016)01-0047-02

作者简介：李思(1991~)男，黑龙江伊春人，在读硕士研究生。通讯作者：沈德凤(1960~)女，黑龙江佳木斯人，学士，教授，硕士研究生导师。E-mail：shenjms@163.com。

基金项目：1.佳木斯大学研究生科技创新项目，编号：ML2014_061；2.黑龙江省科技厅科技攻关项目，编号：GC12C114。