高效液相色谱法测定瑞格列奈中左旋异构体

2016-04-11福安药业集团重庆礼邦药物开发有限公司重庆401121

中国新技术新产品 2016年2期

沈　渝（福安药业集团重庆礼邦药物开发有限公司，重庆　401121）

高效液相色谱法测定瑞格列奈中左旋异构体

沈渝
（福安药业集团重庆礼邦药物开发有限公司，重庆401121）

摘要：采用手性色谱柱（填料为α-酸性糖蛋白，100mm×4.0mm×5μm），进行高效液相色谱法测定。建立了液相色谱法测定瑞格列奈中左旋异构体的方法。左旋异构体和瑞格列奈完全分离，在所考察的浓度范围内相关系数均大于0.99，方法准确定度回收率均在95.0%～105.0%。由此可知该方法操作高效简便，结果准确可靠，可用于瑞格列奈中左旋异构体的测定。

关键词：高效液相色谱法；瑞格列奈；左旋异构体

1 主要仪器与试剂

Agilent1100液相色谱仪及工作站。对照品：瑞格列奈消旋体、瑞格列奈左旋异构体、瑞格列奈。试剂：磷酸二氢钾、氢氧化钠、乙腈（色谱纯）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：手性色谱柱（填料为α-酸性糖蛋白，100mm×4.0mm×5μm）。检测波长：240nm；流速：1.0mL/min。以磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾2.72g，加水800mL使溶解，用氢氧化钠试液调节pH值至7.0，加水稀释至1000mL，即得）为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱。

2.2 溶液制备

供试品溶液：取本品约10mg，置50mL量瓶中，加甲醇15mL使溶解，用水稀释至刻度，摇匀。对照溶液：精密量取供试品溶液1mL，置100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。对照品溶液：取瑞格列奈消旋体对照品适量，用甲醇溶解并稀释制成每1mL中含0.1mg的溶液。

2.3 测定方法

精密量取对照溶液20μL注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的25%，再精密量取供试品溶液与对照溶液各20μL分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。

2.4 系统适应性试验

取对照品溶液20μL注入液相色谱仪，瑞格列奈与左旋异构体依次出峰，其分离度大于1.5。

2.5 检测限及定量限测定

称取左旋异构体及瑞格列奈适量，配制其标准品溶液，逐级稀释该溶液，注入色谱仪，记录色谱图，其信噪比（S/ N＝10±1）的样品浓度即为定量限浓度，其比（S/N＝3±1）的样品浓度即为检测限浓度，在得到检测限溶液的基础上，用该溶液配制异构体样品检测溶液，进行了检测限加入试验。结果见表1。

2.6 线性测定

①瑞格列奈左旋异构体线性考察。精密量取200%标准浓度的瑞格列奈左旋异构体对照品母液适量至10mL的容量瓶中，稀释配制成相当于标准浓度的25%、60%、80%、100%、120%、140%、200%浓度的对照品溶液，分别精密量取上述对照品溶液各20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以样品进样量为X轴，以峰面积为Y轴做回归曲线，计算回归方程及相应的线性回归系数，实验结果表明，瑞格列奈左旋异构体在0.55μg/mL～4.40μg/mL浓度范围，峰面积与浓度之间的线性关系良好，相关系数达0.9997。②瑞格列奈线性考察。精密量取200%标准浓度的瑞格列奈对照品母液适量至10mL的容量瓶中，稀释配制成相当于标准浓度的25%、60%、80%、100%、120%、140%、200%浓度的对照品溶液，分别精密量取上述对照品溶液各20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以样品进样量为X轴，以峰面积为Y轴做回归曲线，计算回归方程及相应的线性回归系数，试验表明，瑞格列奈在0.052μg/mL ～3.720μg/mL浓度范围，浓度之间的线性关系良好，相关系数达0.9991。通过校正因子计算，左旋异构体相对于瑞格列奈的校正因子为0.93，因此测定左旋异构体以相对校正因子为1带入计算。

2.7 精密度实验

①重复性试验。精密称取本品六份，每份约10mg，分别置50mL量瓶中，加甲醇15mL使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，作为六份供试品溶液；精密量取供试品溶液各1mL，分别置100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为六份对照溶液；按上述色谱条件，分别精密量取供试品溶液和对照溶液各20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，计算左旋异构体的量。试验结果表明，六份瑞格列奈样品均未检出左旋异构体，六份对照液峰面积RSD% 为0.9%，小于5.0%，用本方法测定瑞格列奈左旋异构体重复性好。②中间精密度试验。更换不同的分析人员，于不同时间不同仪器检测同批样品的左旋异构体含量，试验结果表明：更换不同的分析人员，于不同时间不同仪器检测同批样品的左旋异构体，12份结果均未检出瑞格列奈左旋异构体，用本方法测定瑞格列奈左旋异构体的方法中间精密度好。