IL-17在高危型HPV阳性宫颈癌中的表达

薛纪森，陈骋，朱华，章圣辉，吕杰强，胡燕

（1.温州医科大学附属第一医院 妇科，浙江 温州 325015；2.温州医科大学附属第二医院 妇科，浙江温州 325027；3.温州医科大学附属第一医院 血液内科，浙江 温州 325015）



IL-17在高危型HPV阳性宫颈癌中的表达

薛纪森1，陈骋2，朱华1，章圣辉3，吕杰强2，胡燕1

（1.温州医科大学附属第一医院 妇科，浙江 温州 325015；2.温州医科大学附属第二医院 妇科，浙江温州 325027；3.温州医科大学附属第一医院 血液内科，浙江 温州 325015）

[摘 要]目的：通过检测高危型人乳头瘤病毒（HPV）阳性宫颈癌患者体内IL-17的表达水平，探讨IL-17所介导的特异性免疫反应在高危型HPV感染的宫颈癌发生、发展中可能发挥的作用。方法：选取高危型HPV阳性的宫颈浸润性鳞癌患者（宫颈癌组）28例、宫颈高危型HPV感染者（HPV感染组）25例以及对照组30例。采用ELISA法检测各组患者外周血清及宫颈局部组织匀浆上清液中IL-17的表达水平。结果：①宫颈癌组患者外周血清中IL-17水平较对照组明显升高（P＜0.05），与HPV感染组比差异无统计学意义（均P＞0.05），HPV感染组与对照组间差异无统计学意义（P＞0.05）；②各组宫颈局部组织匀浆上清液中IL-17的表达水平均明显高于外周血清表达水平，差异均有统计学意义（均P＜0.05）；③宫颈局部组织匀浆上清液中IL-17表达水平各组间的差异均有统计学意义（均P＜0.05），且宫颈癌组局部组织匀浆上清液中IL-17的表达水平高于HPV感染组，HPV感染组高于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论：IL-17所介导的免疫反应可能参与并促进了高危型HPV的持续性感染，与宫颈癌的发生、发展进程相关。

[关键词]白细胞介素17；宫颈肿瘤；人乳头瘤病毒

宫颈癌是引起女性死亡的第二大癌症[1]，高危型人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）的持续性感染已被证实是发生宫颈病变的致病因素[2-3]。临床上HPV感染多数呈一过性，只有10%～15%的高危型HPV呈慢性持续感染状态，进而引发宫颈癌变[4]。近来研究[5-7]发现，一类独特的效应性CD4+T细胞-辅助性T细胞l7（T helper 17 cells，Thl7）亚群，其分泌的特异性效应因子白细胞介素17（interleukin-17，IL-17）在多种疾病的发生和发展中均发挥了重要的作用。本研究对高危型HPV阳性的宫颈癌患者体内IL-17表达水平进行检测，并与高危型HPV感染以及无HPV感染患者相比较，以探讨IL-17介导的特异性免疫应答在与高危型HPV感染相关的宫颈癌发生、发展中的作用。

1　对象和方法

1.1研究对象 选取2010年12月至2011年7月赴温州医学院附属第一医院与附属第二医院妇科就诊的宫颈鳞状上皮细胞癌（squamous cell carcinoma，SCC）患者共28例作为宫颈癌组，均经病理组织学证实，且高危型HPV均为阳性。另选取25例宫颈高危型HPV感染患者为HPV感染组，该组患者宫颈高危型HPV检测均为阳性，而宫颈液基细胞学筛查结果均提示“未见上皮内病变及恶性病变”。选择同期因子宫肌瘤在我院收治拟行子宫全切除术的30例患者作为对照组，术前经宫颈液基细胞学及宫颈脱落细胞HPV筛查无异常。入选标准：①年龄为30～60岁女性；②非经期；③近3 d无性生活。排除标准：①糖尿病、高血压、冠心病、妊娠、生殖道及全身其他部位急、慢性感染性疾病、结缔组织病、免疫性疾病或其他系统恶性肿瘤；②本次患病前曾接受过化疗、放疗或免疫抑制药物治疗；③乙型肝炎标记物检测表面抗原、e抗原、核心抗体三项中任何一项阳性；④梅毒特异性抗体、丙型肝炎特异性抗体及HIV特异性抗体筛查阳性。所有纳入本研究的患者均行HPV基因分型检测（凯普公司HPV基因分型检测试剂盒）确定感染的高危型HPV型别。

1.2实验标本采集 采集前告知患者标本用途，表示同意并签署知情同意书。①血清样本采集：采集患者外周血2 mL，分离出血清后置-20 ℃保存待测；②组织标本采集：宫颈涂抹卢戈氏液，在宫颈不着色区以活检钳钳取宫颈病变组织，量约50 mg，标记后置液氮罐中保存。主要试剂：人IL-17A ELISA检测试剂盒、人IL-17A 标准品购于杭州联科生物技术有限公司；主要仪器：酶标仪Thermo Multiskan MK3。

1.3实验方法 ELISA法检测血清及宫颈组织匀浆中IL-17的表达水平：取出组织块，置于冰0.9%氯化钠溶液中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重，放入5 mL的小烧杯内。以9倍于组织块体积量取预冷的匀浆介质PBS，用移液器取匀浆介质PBS总量的2/3加入烧杯，置于冰水中使用眼科小剪快速将组织块剪碎。将剪碎的组织倒入1 mL玻璃匀浆管中；用剩余的1/3匀浆介质PBS冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆；左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数10次（6～8 min），充分研碎，使组织匀浆化。将制备好的10%组织匀浆在4 ℃，3 000 r/min离心10～15 min，取上清液，根据IL-17A ELISA试剂盒方法进行检测，根据标准曲线查出血清及宫颈组织匀浆样本中IL-17浓度。

1.4统计学处理方法 采用SPSS13.0统计软件分析实验数据。计量资料均符合正态分布用±s描述；正态性和方差齐性检验后行方差分析，各组间两两比较采用Bonferroni法检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.13组临床资料比较 各参数在3组间比较差异均无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1　3组临床资料比较

2.22研究组宫颈高危型HPV感染型别分布情况HPV感染组与宫颈癌组的HPV感染情况，单一型别感染为多数，HPV感染组为72%（18/25），宫颈癌组为78.57%（22/28），2组间差异无统计意义（P＞0.05）；混合型别感染，HPV感染组为28%（7/25），宫颈癌组为21.43%（6/28），2组间差异无统计学意义（P＞0.05）。全部HPV感染型别的分布中HPV16亚型最多见，占47.17%（25/53），其他较多见依次为HPV58亚型（20.75%，11/53）、HPV52亚型（16.98%，9/53）和HPV18亚型（11.32%，6/53）。见表2。

表2　2研究组中宫颈高危型HPV感染型别分布（例）

2.33组外周血清中IL-17水平比较 3组间外周血清中IL-17水平差异有统计学意义（F=5.206，P＜0.05）。宫颈癌组患者外周血清中IL-17水平与对照组比较有升高，差异有统计学意义（P＜0.05），但HPV感染组与宫颈癌组及对照组间比较IL-17水平差异无统计学意义（P＞0.05）。见图1。

图1　3组间外周血清中IL-17水平比较

2.43组宫颈组织匀浆上清液中IL-17水平比较

每组宫颈局部组织匀浆上清液中IL-17的表达水平均明显高于外周血清表达水平，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见图2。宫颈局部组织匀浆上清液中IL-17水平在对照组、HPV感染组及宫颈癌组中呈逐渐升高的变化趋势，3组间IL-17表达水平的差异具有统计学意义（P＜0.05）。宫颈癌组与HPV感染组比较IL-17表达水平明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）；宫颈癌组与对照组比较IL-17水平明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）；HPV感染组与对照组比较IL-17表达水平升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见图3。

与血清比：aP＜0.05图2　3组间宫颈组织匀浆上清液与外周血清中IL-17水平比较

3　讨论

IL-17是近年来发现的一种促炎症性细胞因子，主要由辅助性T细胞17（T helper 17 cells，Th17）亚群分泌，是机体适应性免疫应答的主要参与者，在免疫调节中发挥关键作用[5-6]。随着近年来研究的进一步深入，IL-17细胞在许多疾病中的作用已受到广泛关注。大量的实验结果显示，IL-17细胞在各种感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤、移植物抗宿主等疾病的发生和发展中均发挥了重要作用[8-12]。IL-17具有强大的招募、激活中性粒细胞的功能，是宿主抵御一些特殊病原体感染的重要细胞因子，参与了针对胞内、外菌、真菌、寄生虫及病毒感染的免疫应答过程。多数研究[8，13-14]提示，IL-17在病毒感染中发挥致病作用而不是保护性作用。而IL-17在病毒持续感染中发挥的作用机制，国内外相关研究较少。在澳大利亚最近的一项实验研究中，研究者们认为IL-17促进了HPV的持续感染并引起宫颈上皮肉瘤变，IL-17可抑制宿主清除病毒感染细胞，延长其生存时间，从而导致病毒的复制和持续性感染，引起宫颈病变[15]。

宫颈癌作为临床最常见的妇科恶性肿瘤，其发生、发展的过程与生殖道高危型HPV的持续性感染有着密不可分的关系，高危型HPV感染清除的失败将导致病毒的持续性感染和宫颈癌的发生、发展。HPV感染可激发机体的细胞免疫和体液免疫应答。一般认为，对HPV感染的有效免疫应答主要是局部特异性的细胞免疫应答。目前有关该方面的研究结果尚不统一，且少有涉及IL-17和宫颈癌的相关性研究，IL-17是否参与了宫颈癌的发生、发展进程，其在宫颈高危型HPV持续性感染中发挥了什么样的作用，值得深入探究。

为明确IL-17介导的免疫反应与宫颈癌发生、发展的关系，本研究采用ELISA法检测了外周血与宫颈组织匀浆上清液中IL-17的表达水平，结果显示，宫颈癌组患者外周血清中IL-17表达水平与对照组比较有升高，差异有统计学意义（P＜0.05），宫颈癌组IL-17表达水平虽高于HPV感染组、HPV感染组高于对照组，但差异无统计学意义（P＞0.05）。各组宫颈组织匀浆上清液中IL-17的表达水平均明显高于外周血清水平，且宫颈癌组高于HPV感染组，HPV感染组高于对照组，各组间差异有统计学意义（P ＜0.05）。由此提示，局部组织匀浆上清液中IL-17的表达水平与外周血中IL-17的变化趋势基本一致，证实了IL-17所介导的免疫反应可能参与并促进了高危型HPV的持续性感染，与宫颈癌的发生、发展进程相关，据本研究结果提示，宫颈局部组织中IL-17表达水平明显高于外周血清，提示IL-17所介导的免疫反应变化可能在宫颈局部微环境中较为明显。

IL-17所介导的免疫反应可能参与并促进了高危型HPV的持续性感染，与宫颈癌的发生、发展进程相关，为寻找有效阻断宫颈高危型HPV慢性及持续性感染的免疫治疗措施提供了新的理论依据，值得进一步深入研究和探讨。

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（本文编辑：吴彬）

·论 著·

·论 著·

The expression of IL-17 in the cervical cancer with high-risk human papillomavirus infection

XUE Jisen1,CHEN Cheng2,ZHU Hua1,ZHANG Shenghui3,LYU Jieqiang2,HU Yan1.1.Department of Gynecology,the First Affi liated Hospital of Wenzhou Medical University,Wenzhou,325015; 2.Department of Gynecology,the Second Affi liated Hospital of Wenzhou Medical University,Wenzhou,325027; 3.Department of Hematology,the First Affi liated Hospital of Wenzhou Medical University,Wenzhou,325015

Abstract:Objective:To investigate the expression of IL-17 in patients diagnosed as cervical squamous cell carcinoma (SCC) with high-risk human papillomavirus (HPV) infection,with the aim to explore the potential role of specifi c immune response mediated by IL-17 in the disease progression and carcinogenesis of cervical cancer which is closely associated with high-risk HPV infection.Methods:The study groups included 28 cervical SCC patients with high-risk HPV infection and 25 high-risk HPV infected women with normal cervical cytology.Thirty patients diagnosed as uterine myoma with normal cervical cytology and negative HPV testing were enrolled as the control group.The concentration of IL-17 in serum and supernatant of cervical tissue homogenate were examined with ELISA method.Results:①The serum concentrations of IL-17 in patients with cervical SCC were signifi cantly higher than those in the control group (P＜0.05),but there was no signifi cant difference observed between SCC group vs the high-risk HPV infection group (P＞0.05) and the high-risk HPV infection group vs the control group (P＞0.05); ②The average concentrations of IL-17 in supernatant of cervical tissue homogenate of all groups were obviously higher than those in serum respectively (P＜0.05); ③The concentrations of IL-17 in supernatant of cervical tissue homogenate differed signifi cantly among the study groups and the control group (P＜0.05).The concentrations in the cervical SCC group were higher than those in the high-risk HPV infected group,which were much higher than the control group (P＜0.05).Conclusion:These results indicate that the immune reaction mediated by IL-17 may participate in and promote the persistent infection of high-risk HPV,which is closely associated with the disease progression and carcinogenesis of cervical cancer cervical cancer.

Key words:IL-17; uterine cervical neoplasms; human papillomavirus

通信作者：胡燕，主任医师，医学博士，硕士生导师，Email：627830566@qq.com。

作者简介：薛纪森（1987-），男，浙江苍南人，住院医师，硕士。

基金项目：浙江省卫生厅科研基金资助项目（2011KYA107）。

收稿日期：2015-03-31

[中图分类号]R737.33

[文献标志码]A

DOI:10.3969/j.issn.2095-9400.2016.01.005