晚期糖基化终末产物受体基因p．82G＞S多态性与炎症性肠病易感性的关系

毕云天，金捷，闫峻（温州医科大学，浙江温州505；温州市中心医院；温州医科大学第二附属医院）



晚期糖基化终末产物受体基因p．82G＞S多态性与炎症性肠病易感性的关系

毕云天1，金捷2，闫峻3
（1温州医科大学，浙江温州325035；2温州市中心医院；3温州医科大学第二附属医院）

摘要：目的 探讨晚期糖基化终末产物受体（RAGE）基因p．82G＞S多态性与炎症性肠病（IBD）易感性的关系。方法 选择IBD患者211例（IBD组），其中溃疡性结肠炎（UC）160例、克罗恩病（CD）51例，另选择健康查体者177例作为对照组。采集患者静脉血，采用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性方法检测RAGE基因p．82G ＞S等位基因频率和基因型频率。结果 IBD组RAGE S等位基因频率为22．51%，高于对照组的16．95%；GS基因型频率为29．86%，高于对照组的16．95%（P均＜0．05）。IBD组中，UC患者S等位基因频率为23．44%，GS基因型频率为34．38%，均较对照组显著升高（P均＜0．05）。CD患者与对照组的等位基因和基因型频率比较差异均无统计学意义（P均＞0．05）。结论 RAGE基因p．82G＞S多态性与IBD中UC的易感性有一定相关性，携带GS基因型者更易患UC。

关键词：炎症性肠病；溃疡性结肠炎；克罗恩病；晚期糖基化终末产物受体；单核苷酸多态性

晚期糖基化终末产物受体（RAGE）属于细胞表面免疫球蛋白超家族一员［1］，RAGE基因的启动子、外显子和内含子区域内存在多处多态位点，包括374T／A、429T／C、p．82G＞S、1704G／T和2184A／G等［2，3］。其中p．82G＞S多态性与糖尿病、类风湿关节炎等免疫炎症反应密切相关［4］。研究显示，正常肠道上皮细胞中RAGE表达较低，而炎症状态下RAGE表达显著升高［5］，提示RAGE可能对炎症性肠病（IBD）的发生起重要作用。本研究通过检测IBD患者RAGE基因p．82G＞S多态性，探讨其与IBD易感性的关系。

1　资料与方法

1．1临床资料 选择2004年1月～2012年12月温州医学院附属医院收治的211例IBD患者（IBD组），男112例、女116例，年龄（38．6±14．3）岁。其中溃疡性结肠炎（UC）160例，克罗恩病（CD）51例。另择177例健康体检者作为对照组，男、女各80例，年龄（39．4±9．8）岁。两组性别、年龄具有可比性。

1．2RAGE基因多态性检测 采用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性方法。采集受试者静脉血1 mL，应用GFX小量血液基因组DNA抽提试剂盒提取DNA，紫外分光光度计检测DNA表达。正向引物5′-GTAAGCGGGGCTCCTGTTGCA-3′；反向引物5′-GGCCAAGGCTGGGGTTGAAGG-3′；扩增目的基因片段为含p．82G＞S多态位点的397 bp片段。PCR反应体系：50 ng基因组DNA，1×NH4缓冲液，1 mmol／L MgCl2，0．2 mmol／L dNTPs，6．3 pmol／L引物，0．5 U Taq酶，1 mmol／L甜菜碱。反应条件：95 ℃2 min，95℃30 s、52℃30 s、72℃30 s，35个循环；最后72℃延伸5 min。用5 U内切酶AluI切割扩增片段，琼脂糖凝胶电泳分离，溴化乙锭染色，等位基因82G酶切片断为248、123、26 bp；等位基因82S酶切片断为181、123、67、26 bp。

1．3统计学方法 采用SPSS11．5统计软件。基因型频率分布的比较采用χ2检验，并进行Hardy-Weinberg平衡检测，应用OR以及95%可信区间（CI）计算和评估相对风险。P＜0．05为差异有统计学意义。

2　结果

两组RAGE G82S等位基因频率和基因型频率分布达到Hardy-Weinberg平衡。两组等位基因频率比较差异有统计学意义（χ2＝4．086，P＝0．043，OR ＝1．439，95%CI为1．010～2．049），基因型频率比较亦有统计学差异（χ2＝9．404，P＝0．003，OR＝1．960，95%CI为1．271～3．021）。IBD组中，UC患者的S等位基因频率高于对照组（χ2＝4．417，P＝0．036，OR＝1．500，95%CI为1．026～2．192），GS基因型频率高于对照组（χ2＝8．832，P＝0．002，OR ＝2．007，95%CI为1．264～3．188）。CD患者的等位基因和基因型频率与对照组比较差异均无统计学意义（P均＞0．05）。见表1。

表1　IBD组与对照组RAGE　G82S等位基因和基因型分布比较［例（%）］

3　讨论

RAGE属于细胞表面免疫球蛋白超家族成员，其分子结构分为细胞膜外区、一个跨膜结构域和一个细胞内结构域。细胞膜外区有3个免疫球蛋白样结构，即一个Vd区和两个C区，RAGE与配体的结合主要发生在Vd区［1，3］。RAGE基因的启动子、外显子和内含子区域内存在多处多态位点，包括374T／A、429T／C、p．82G＞S、1704G／T和2184A／G等。p．82G＞S是位于RAGE配体结合域Vd区的功能性氨基酸变异［4］。RAGE基因p．82G＞S多态性与糖尿病、类风湿关节炎等免疫炎症反应密切相关。肠道免疫反应异常所致的炎症反应在IBD发病中起重要作用，炎症因子表达升高是肠黏膜出现炎症反应的重要特征［6］。RAGE能与多种配体结合，激活胞内多条信号转导途径，产生炎症因子，导致持久的炎症反应发生［7～9］。研究发现，配体S100A12与RAGE的结合介导了肠道的促炎反应过程［10］，诱发了核转录因子-κB依赖性的细胞因子的分泌［11］。RAGE基因p．82G＞S多态是影响血液中可溶性RAGE（sRAGE）水平的重要遗传因素，与82G等位基因携带者相比，82S等位基因携带者会出现血液sRAGE显著降低的现象［12］。我们的前期研究也发现，携带RAGE 82S等位基因的个体会出现血液sRAGE表达水平显著下降的现象，而且这种基因型依赖的sRAGE表达下降在病理条件下（如多发性硬化）更加突出。较低的sRAGE水平可导致患者中和RAGE有害配体（如S100A12）能力的下降，增加与RAGE受体结合的配体数量，最终导致RAGE介导作用增强，产生更多炎症因子。

近年研究发现，RAGE基因变异会放大配体与RAGE结合后下游炎症因子的表达。体外实验显示，在中国仓鼠卵巢细胞和人类单核细胞中，RAGE p．82G＞S多态可以显著影响RAGE与配体结合的亲和力，表现为82S等位基因编码的RAGE受体与S100／calgranulin的亲和力强于82G等位基因编码的RAGE受体蛋白，且RAGE受体被配体激活后产生的TNF-α、IL-6、MMP-9表达增加，具有放大免疫、炎症反应的作用［2］。韩国的一项大样本人群研究发现，RAGE基因p．82G＞S多态性对人体TNF-α表达、氧化应激及胰岛素抵抗等均有显著影响［12］。本研究结果显示，IBD组RAGE S等位基因频率和GS基因型频率均高于对照组；IBD组中，UC患者S等位基因频率和GS基因型频率均高于对照组，CD患者各等位基因和基因型频率与对照组比较差异均无统计学意义。表明RAGE基因p．82G＞S多态性与UC的易感性有一定相关性，携带GS基因型者更易患UC。

综上所述，RAGE基因p．82G＞S多态性与IBD易感性有关。这将为IBD的治疗策略和方法提供帮助，为IBD的治疗提供新的靶点，并有助于指导IBD个体化的抗炎治疗。

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Correlation between p．82G＞S polymorphisms of receptor for advanced glycation end-product gene and susceptibility to inflammatory bowel diseases

BI Yuntian1，JIN Jie，YAN Jun
（1 Wenzhou Medical University，Wenzhou 325035，China）

Abstract：Objective To investigate the correlations between p．82G＞S polymorphisms of receptor for advanced glycation end-product（RAGE）gene and susceptibility to inflammatory bowel diseases（IBD）．Methods Genomic DNA from IBD patients（n＝211）with Crohn′s disease（CD，n＝51）and with ulcerative colitis（UC，n＝160）and from healthy controls（control group）（n＝177）was extracted to detect the allele frequencies and genotype frequencies of RAGE gene p．82G＞S polymorphisms by restriction fragment length polymorphism assay（PCR-RFLP）．Results The RAGE S allele frequencies（22．51%）of the IBD group was higher than that of the control group（16．95%），P＜0．05．The GS genotype frequencies（29．86%）of the IBD group was higher than that of the control group（16．95%），P＜0．05．In the IBD group，UC patients also had higher S allele frequencies（23．44%）and GS genotype frequencies（34．38%）than those of the control group（all P＜0．05）．However，no significant differences were found in the allele frequencies and genotype frequencies between CD patients and healthy controls（all P＞0．05）．Conclusion RAGE gene p．82G＞S polymorphism has certain association with susceptibility to UC，and patients with GS genotype are more susceptible to UC．

Key words：inflammatory bowel disease；ulcerative colitis；Crohn′s disease；receptor for advanced glycation endproduct；single nucleotide polymorphism

收稿日期：（2015-09-30）

作者简介：第一毕云天（1969-），女，副教授，主要研究方向为疾病的遗传分析。E-mail：642274912＠qq．com

基金项目：浙江省自然科学基金资助项目（LY12H03004）。

中图分类号：R394．3

文献标志码：A

文章编号：1002-266X（2016）02-0008-03

doi：10．3969／j．issn．1002-266X．2016．02．003