HPLC法测定注射用盐酸苯达莫司汀含量

吴淑萍，赵华勇，戴国彪（.杭州领业医药科技有限公司，浙江　杭州　3008；.聚光科技（杭州）股份有限公司，浙江　杭州300）



HPLC法测定注射用盐酸苯达莫司汀含量

吴淑萍1，赵华勇2，戴国彪2
（1.杭州领业医药科技有限公司，浙江杭州310018；2.聚光科技（杭州）股份有限公司，浙江杭州310012）

摘要：目的：建立注射用盐酸苯达莫司汀中盐酸苯达莫司汀含量测定方法。方法：高效液相色谱法测定，以十八烷基键合硅胶为色谱柱，以甲醇-0.01 mol/L硫酸钠（用稀硫酸调pH 至3.40）（40∶60）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为230 nm，外标法定量。结果：盐酸苯达莫司汀在溶液浓度为82.88～124.32 μg/mL之间时，线性关系良好（γ＝0.9995）。低、中、高浓度的平均回收率99.71%，RSD为0.52%（n=9）。结论：该方法快速简便，准确，重复性好，可用于注射用盐酸苯达莫司汀的含量测定。

关键词：盐酸苯达莫司汀；高效液相色谱法；含量测定

盐酸苯达莫司汀（bendamustine hydrochloride）是由Merckle公司开发的烷化抗肿瘤药物，于2003年l0月在德国上市，商品名为Ribomustin[1]。Salme-dix公司得到授权在美国和加拿大开发，商品名为Treanda（SDX-105），目前正处于Ⅲ期临床。临床用于乳腺癌、慢性淋巴细胞性白血病、非霍奇金淋巴瘤（Ⅱ～Ⅳ期）、霍奇金病、浆细胞瘤的单独治疗或联合用药。临床应用表明：其单独治疗或联合用药治疗乳腺癌，疗效确切，能明显降低复发率与死亡率，且不良反应小，安全性好[2]。至今未见其含量测定的报道。本文参考其类似物的测定方法建立了HPLC法测定其含量，方法准确可靠，操作简便[3]。

1　仪器与试药

仪器：岛津UV-2450可见紫外分光光度仪；岛津LC-10ATVP液相色谱仪（紫外检测器），工作站为CLASS-VP Ver. 5.0。

试药及试剂：注射用盐酸苯达莫司汀（批号20070612、20070615、20070618），自制；盐酸苯达莫司汀对照品（批号20070302-1，含量：99.6%），自制；甲醇（色谱纯，SK Chemicals）；三乙胺（杭州高晶精细化工有限公司，20071025）；硫酸（杭州大方化学试剂厂，070905）；硫酸钠（上海化学试剂有限公司，021020）；磷酸（杭州化学试剂有限公司，20030902）；磷酸二氢钠（上海三鹰化学试剂有限公司，040319）；娃哈哈纯净水。

2　方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-CN（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.01 mol/L硫酸钠（用稀硫酸调pH 3.40）（40:60）；检测波长：230 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL。

2.2溶液配制

对照品溶液的制备：取对照品约10 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备：取装量差异项的内容物适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每1 mL中约含0.1 mg的溶液，作为供试品溶液。

2.3空白试验

取甘露醇，精密称定，加甲醇稀释成每1 mL中含甘露醇0.12 mg的溶液，作为空白试液。取10 μL，注入高效液相色谱仪。结果表明，空白试液对盐酸苯达莫司汀的HPLC测定无干扰，见图1。

2.4标准曲线

取盐酸苯达莫司汀对照品（20070320-1）适量，加甲醇溶解并定量稀释制成每1 mL中约含0.50 mg的溶液，精密吸取适量，分别用甲醇稀释制成每1 mL约含80、90、95、100、105、110、120 μg的系列浓度的标准溶液。

精密量取标准溶液各10 μL，分别注入高效液相色谱仪，测量盐酸苯达莫司汀色谱峰面积。以盐酸苯达莫司汀的峰面积（A）对浓度（C）进行线性回归，结果见表1。

表1　盐酸苯达莫司汀含量测定线性试验结果

盐酸苯达莫司汀含量测定线性图

回归方程：

A＝47411×C（μg/mL）+277344

γ＝0.9995

结果表明：浓度在82.88～124.32 μg/mL的范围内，盐酸苯达莫司汀峰面积与浓度线性关系良好。

2.5仪器精密度

精密量取供试品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪，见图2，记录盐酸苯达莫司汀色谱峰面积。连续测定六次，计算精密度。以峰面积计算RSD为0.83%。结果表明本法精密度良好。

图1　

图2　

2.6日内和日间精密度

取供试品溶液和对照品溶液，精密量取10 μL，注入高效液相色谱仪，以外标法计算含量。一日内分别测定6次，计算日内偏差，日内偏差为0.42%。测定多日，计算日间偏差，日间偏差为0.29%。

2.7稳定性试验

取供试品溶液，分别在0 h、1 h、2 h、4 h、6 h、8 h注入液相谱仪10 μL，测定盐酸苯达莫司汀峰面积。以峰面积计算RSD为1.00%。表明本品在8 h内稳定，能够满足检测条件。

2.8回收率试验

精密称取盐酸苯达莫司汀对照品（批号：20070320-1）适量，加入处方量辅料，用甲醇定量稀释制成每1 mL中约含盐酸苯达莫司汀0.08 mg/mL、0.1 mg/mL、0.12 mg/mL的溶液各三份，精密量取10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸苯达莫司汀对照品适量，加甲醇稀释成每1 mL约含盐酸苯达莫司汀0.1 mg的溶液，同法测定，计算回收率为99.71%，RSD为0.52%。结果见表2。

表2　注射用盐酸苯达莫司汀含量测定回收率测定

2.9供试品含量测定

分别取对照品溶液与供试品溶液进样测定，按外标法以峰面积计算盐酸苯达莫司汀的含量，结果见表3。

表3　注射用盐酸苯达莫司汀含量结果

3　讨论

3.1检测波长的选择

取对照品，加甲醇稀释成每1 mL中约含5 μg的溶液，在200～400 nm的波长范围内扫描，结果注射用盐酸苯达莫司汀最大吸收波长为232 nm，见图3，确定检测波长为230 nm。

图3　

3.2流动相的选择

流动相①：以甲醇-0.02 mol/L磷酸二氢钠（含0.3%三乙胺，用磷酸调pH 3.0）（40:60）为流动相，流速为1.0 mL/min，测定结果表明盐酸苯达莫司汀在10 min左右出峰，峰形不对称。

流动相②：以甲醇-0.01 mol/L硫酸钠（用稀硫酸调pH至3.40）（40:60）为流动相，流速为1.0 mL/min，测定结果表明盐酸苯达莫司汀在12 min左右出峰，峰形对称。

采用文献1的色谱条件测定盐酸苯达莫司汀含量。

3.3色谱柱的选择

分别选用依利特HYPERSIL ODS2（4.6 mm× 250 mm，5 μm），Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm× 250 mm，5 μm），Agilent ZORBAX SB-CN（4.6 mm× 250 mm，5 μm）色谱柱，同法进行测定，其结果基本一致，表明十八烷基键合硅胶对盐酸苯达莫司汀含量测定具有较好的通用性。

3.4溶剂的选择

盐酸苯达莫司汀易水解，在甲醇中，在室温下8 h内溶液稳定性良好；而在水溶液中，在室温下2 h内溶液稳定性良好。根据其易水解性质，且参考文献1，所以用甲醇作为溶剂。

4　结论

本法测盐酸苯达莫司汀，以十八烷基键合硅胶为色谱柱，以甲醇-0.01 mol/L硫酸钠（用稀硫酸调pH至3.40）（40:60）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为230 nm，外标法定量。在溶液浓度为82.88～124.32 μg/mL之间时，线性关系良好（γ＝0.9995）。低、中、高浓度的平均回收率99.71%，RSD为0.52%（n=9）。建立了高效液相色谱法测定盐酸苯达莫司汀含量及有关物质，取得了较好的结果，可用于盐酸苯达莫司汀原料药的质量控制。

参考文献：

[1]高丽梅，汪燕翔，宋丹青.盐酸苯达莫司汀的合成[J]．中国新药杂志，2007，16（23）：1960-1961,1970．

[2]任健．盐酸苯达莫司汀（bendamustine hydrochloride）[J]．中国药物化学杂志，2008，18（5）：399．

[3]汤浩，吴晓明，彭苏. HPLC法测定盐酸苯达莫司汀含量及有关物质．药学与临床研究，2009，17（4）:303-305．

中科院青岛能源所开发出石墨烯基锂离子电容器

随着能源危机以及环境问题的日趋严重，社会对基于能源互联网的近零碳排放区推广非常期待，这对分布式储能技术提出更高要求。同时，新能源电动汽车、高铁/城市轨道交通制动能量回收等领域也迫切需求高能量密度、高功率密度兼顾的电化学储能器件。锂离子电容器是一种兼具双电层超级电容器高功率特性与较高能量密度特点的电化学储能器件，具有非常好的发展前景。因此，国家工业和信息化部《中国制造2025》把高能量密度（大于20 Wh/kg）动力型电容列为重点支持领域。然而，由于相关技术被国外公司垄断，国内相关企业还未掌握核心技术。近年来，中国科学院青岛生物能源与过程研究所青岛储能产业技术研究院研究团队围绕高能量密度锂离子电容器关键材料与核心技术，开展了一系列原创性研发工作。12月22日，青岛储能院研发出的新型石墨烯基高能量度锂离子电容器技术在北京通过了由中国石油和化学工业联合会组织的专家鉴定和评价。鉴定委员会专家认真听取了工作报告、研究报告、第三方测试报告、应用报告及查新报告，审查了有关技术资料，通过质询、答辩和讨论，一致认为该项成果创新性强，总体达到国际先进水平，具有较好的推广价值，并建议尽快推进产业化进程，满足国家需求。该技术突破了石墨烯复合电极设计与批量制备、可控均匀预嵌锂、充放电胀气抑制及特殊集流极片涂布等技术难题，在实践中总结出石墨烯基锂离子电容器制备技术和工艺，并自力更生设计建设了国内第一条锂离子电容器的中试生产线，研发出了最高容量3500 F/4V型锂离子电容器单体，器件的能量密度高达55 Wh/L（20.5 Wh/kg）、功率密度高达5 kW/L，循环性能好（10 000次循环容量保持率95%以上），低温性能良好（-30℃容量为常温的72%以上）的锂离子电容器，相关器件已通过原轻工业部苏州电源所的第三方权威检测。围绕该储能器件的关键材料和核心技术，青岛储能院已获得授权发明专利9项，具有自主知识产权。值得说明的是，2015年初青岛储能院就已经利用该器件构建48 V系统在电动车电源等方面进行了示范应用，最近青岛储能院正争取把此技术尽快用于轨道交通领域。

(来源：http://www.cas.cn/syky/201512/t20151231_4509413.shtml)

Determination of Bendamustine Hydrochloride for Injection by HPLC

WU Shu-ping1，ZHAO Hua-yong2，DAI Guo-biao2
（1.Hangzhou Solipharma Pharmaceutical Solid State Science & Enabling Technology Co., Ltd., Hangzhou，Zhejiang 310018，China; 2.Focused Photonics（Hangzhou）Inc., Hangzhou，Zhejiang 310018，China）

Abstract:Objective: To establish a method for determination of bendamustine hydrochloride for injection by HPLC. Methods: HPLC was employed by using C18as the column and methol-0.01 mol/L sodium sulfate（pH was adjusted by dilute sulfuric acid 3.40）（40:60）as the mobile phase. Flow rate was 1.0 mL/min; the detection wavelength was 230 nm. Results: A good linearity for determination of bendamustine was obtained in the range from 82.88～124.32 μg/mL（γ＝0.9995）.The average recoveries of low，medium and high concentrations was 99.71%，with RSD 0.52%（n=9）. Conclusion: The method is simple and fast，the results are accurate and reproducible for the determination of bendamustine hydrochloride for injection.

Keywords:bendamustine hydrochloride；HPLC；content determination

作者简介：吴淑萍（1984-），女，工程师，从事新药质量管理和资料申报工作。E-mail:804381792@qq.com。

收稿日期：2015-08-23

文章编号：1006-4184（2016）1-0048-04