高效液相色谱法测定进口鱼柳中的吊白块方法研究

刘瑞芳，廖和菁，胡礼渊，梁东军（东兴出入境检验检疫局，广西东兴538100）



高效液相色谱法测定进口鱼柳中的吊白块方法研究

刘瑞芳，廖和菁，胡礼渊，梁东军
（东兴出入境检验检疫局，广西东兴538100）

摘要：样品中加入盐酸-氯化钠溶液酸化，超声波辅助提取。提取液中加入乙酸钠缓冲液和2，4-二硝基苯肼衍生液，于50℃水浴衍生化后过滤膜上机。同时对鱼柳中的甲醛含量进行检测，以评估鱼柳中的本底甲醛。最终甲醛次硫酸氢钠的含量为甲醛次硫酸氢钠的测定值与甲醛的测定值之差。结果表明，此方法线性良好，r2=0.999 97；样品加标回收率在92.3%~102%之间。

关键词：鱼柳；高效液相色谱法；甲醛合次硫酸氢钠

“吊白块”又称雕白块、雕白粉，为甲醛合次硫酸氢钠的俗称，是印染、造纸工业常用的漂白剂。近年来常有不法商贩将其添加在面粉、腐竹、鱼柳等食品中，以增加食品的感官性状和口感。但研究表明，高温下吊白块具有极强的还原性，60℃时，吊白块水溶液即开始分解出甲醛、二氧化硫等有毒物质。这些都对人体产生巨大的危害，特别是甲醛进入人体后，即可被人体吸收，引起肺水肿，肝、肾充血及血管周围水肿等，是一种潜在的致癌物质[1]，故我国是禁止在食品中添加吊白块的。越南进口的鱼柳干多为海产鱼肉制成。根据相关研究，海产鱼类在加工储存过程中，由于鱼类自身的生物化学变化而形成甲醛[2]。我国针对水产品及其制品中吊白块的检测，还未出相关检测标准。本文参照国家标准《小麦粉与大米粉及其制品中甲醛次硫酸氢钠含量的测定》（GB/T 21126-2007），根据甲醛次硫酸氢钠以及海产制品的性质，采用高效液相色谱法对鱼柳中的吊白块进行测定研究。

1材料与方法

1.1主要仪器和试剂

Agilent 1200高效液相色谱仪（配二极管阵列检测器）：美国安捷伦公司；Integral 10纯水/超纯水系统：密理博公司；yamatoSA300多功能振荡器：日本大和科学株式会社；Sigma 3-30K高速冷冻离心机：德国SIGIGMA公司；恒湿水浴锅；微孔滤膜0.45 μm有机系：美国PALL公司。

1.2试剂

乙腈：色谱纯；盐酸-氯化钠溶液：称取20 g氯化钠于1 000 mL容量瓶中，用少量水溶解，加60 mL 37 %盐酸，加水定容至刻度；缓冲溶液：称取2.64 g乙酸钠，以适量水溶解，加入1.0mL冰乙酸，加水定容至500mL；2，4-二硝基苯肼溶液（0.6 g/L）：称取2，4-二硝基苯肼300 mg，用乙腈溶解定容至500 mL；甲醛标准溶液：100 μg/mL，环境保护部标准样品研究所研制。其他试剂均为分析纯。所用水为GB/T 6682规定的一级水。

1.3色谱条件

色谱柱：C18柱，250 mm×4.6 mm，5 μm不锈钢柱；流动相：甲醇-水（70∶30，体积比）；流速：1 mL/min；柱温：40℃；检测波长：365 nm；进样量：20 μL。

1.4方法

1.4.1样品测定

酸性溶液中，样品中残留的甲醛次硫酸氢钠分解，释放出甲醛被水提取，提取后的甲醛与2，4-二硝基苯肼发生加成反应，生成甲醛衍生物。液液萃取净化后，在365 nm波长处，高效液相色谱法测定，外标法定量。

甲醛次硫酸氢钠的测定：称取粉碎混匀后的样品2.00 g于50 mL塑料离心管中，准确加入20 mL盐酸-氯化钠溶液，超声辅助提取30min，于25℃、10000r/min离心15 min。取上清液2 mL于10 mL塑料离心管中，加缓冲液到5.0 mL，再用2，4-二硝基苯肼溶液定容至10.0 mL，盖上盖子混匀，50℃水浴加热45 min，取出冷却至室温，过0.45 μm微孔滤膜装瓶待测。

甲醛的测定：称取粉碎混匀后的样品2.00 g于50 mL塑料离心管中，首先准确加入2，4-二硝基苯肼溶液10 mL，然后再加入缓冲液10 mL，旋紧盖子混匀后，置于50℃水浴加热45 min，取出冷却至室温，于25℃、10 000 r/min离心15 min，上清液过0.45 μm微孔滤膜装瓶待测。

1.4.2标准溶液的配制

移取20、50、100、200、500 μL甲醛标准溶液，置于10 mL带盖离心管中，加缓冲液到5.0 mL，再用2，4-二硝基苯肼溶液定容至10.0 mL，盖上盖子混匀，50℃水浴加热1 h，取出冷却至室温，过0.45 μm微孔滤膜。

2试验结果

2.1标准曲线

甲醛标准溶液浓度与峰面积成正比，并在一定的浓度范围内成线性关系，具体数据见表1，线性关系见图1。

从图中可知，标准曲线相关系数为r2=999 97。

表1甲醛标准溶液浓度与峰面积Table 1 Formaldehyde standard solution concentration and peak area

图1甲醛不同浓度标准溶液与峰面积线性关系Fig.1 Formaldehyde concentration standard solution and the linear relationship between peak area

2.2检测结果

由于鱼柳本身含有一定量的本底甲醛[3]，故鱼柳样品中最终甲醛次硫酸氢钠的含量为甲醛次硫酸氢钠的测定值与甲醛的测定值之差。测定结果见表2。

表2试验检测结果Table 2 The experimental test results

判定标准：两个测量结果的绝对差值不超过算术平均值的15 %时，为未发现显著性差异[5]。表2中5组数据的绝对差值均未超过算术平均值的15 %，故5组数据均为未发现显著性差异。

2.3方法的检出限

由于样品本底的存在，无法找到空白样品，故采用全程序空白值确定法计算检出限[4]，经20次空白平行测定标准偏差为1.087，检出限为5.0 mg/kg。

2.4精密度

取2份样品，相同条件下平行测定8次，结果见表3。

2.5准确度

通过对样品在不同浓度水平上加标，回收率在92.3 %~102 %之间，详见表4。

表3精密度试验结果Table 3 The precision of the result of the experiment

表4准确度试验结果Table 4 The accuracy of the result of the experiment

2.6色谱图

经对标准溶液以及样品上机测试，样品的出峰时间与标准品的出峰时间一致，且峰形标准，无杂峰干扰，详见图2、图3。

图3样品色谱图Fig.3 The sample chromatograms

3结论及讨论

1）《小麦粉与大米粉及其制品中甲醛次硫酸氢钠含量的测定》（GB/T 21126-2007）中，缓冲溶液采用磷酸氢二钠，衍生液为经过纯化后的2，4-二硝基苯肼溶液。本方法采用乙酸钠缓冲溶液和2，4-二硝基苯肼溶液作为衍生液。改进后，同一缓冲液能同时进行甲醛合次硫酸氢钠和甲醛的检测，保证了检测本底的一致，而衍生液的配制更简便，更节省时间。经过试验测试，未经纯化的衍生液进行衍生化，未对结果产生影响。

2）衍生化采取50℃水浴45 min。甲醛合次硫酸氢钠水溶液于60℃即开始分解出甲醛、二氧化硫等。如采用60℃水浴进行衍生化，则甲醛合次硫酸氢钠转化为甲醛，使得甲醛测定值升高，影响甲醛合次硫酸氢钠结果的最终判定。

3）与《小麦粉与大米粉及其制品中甲醛次硫酸氢钠含量的测定》（GB/T 21126-2007）相比，本文所用方法以盐酸-氯化钠作为提取液，进行超声波辅助提取，缩短了样品提取时间，提升了提取效果。提取后，转移2 mL提取液，直接加衍生剂，50℃水浴45 min衍生化，避免了加正乙烷萃取的过程，简化了操作步骤，缩短了前处理时间，通过对样品进行加标，测精密度以及检出限，充分证明此方法能满足检测要求。

参考文献：

[1]张秀芝,辛雨家,何鑫巍,等.甲醛的危害及检测[J].山西建筑, 2013,39(7):208-209

[2]马敬军,周德庆,张双灵.水产品中甲醛本底含量与产生机理的研究进展[J].渔业科学进展, 2004, 25(4): 85-89

[3]韩宏伟.水产品中甲醛本底含量及生成机制研究进展[J].国外医学:卫生学分册, 2008,35(4):5

[4]王婷,郭晋君.分析化学中检出限的分类及计算方法[J].广东化工,2013,40(17):189

[5]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局,中国国家标准化管理委员会. GB/T 21126-2007小麦粉与大米粉及其制品中甲醛次硫酸氢钠含量的测定[S].北京:中国标准出版社:2007

Study on the Determination Method of the Sodium Formaldehyde Fulfoxylate in Imported Fish Fillet by HPLC

LIU Rui-fang，LIAO He-jing，HU Li-yuan，LIANG Dong-jun
（Dongxing Import and Export Inspection and Quarantine Bureau，Dongxing 538100，Guangxi，China）

Abstract：The sample was acidified after adding hydrochloric acid-sodium chloride solution，then extracted by Ultrasound-assisted. The sodium acetate buffer and 2，4-dinitrobenzene hydrazine derivative liquid were added in extraction solution，had derivatization by water bath at 50℃，it was detected after filtered. At the same time，the formaldehyde content in the fish fillets was detected. The content of hydroxymethanesulfinic acid monosodium salt dihydrate was the difference between the measured value of hydroxymethanesulfinic acid monosodium salt dihydrate and formaldehyde. The result showed that the method was a good linear，r2=0.999 97. The recoveries was between 92.3 % and 102 %.

Key words：fish fillet；HPLC；sodium formaldehyde sulphoxylate

收稿日期：2014-08-06

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2016.01.039

作者简介：刘瑞芳（1980—），女（汉），工程师，本科，从事食品检验工作。