银杏叶提取物对运动大鼠抗氧化效果的影响

张美霞，叶志成（重庆文理学院林学与生命科学学院，重庆402160）



银杏叶提取物对运动大鼠抗氧化效果的影响

张美霞，叶志成
（重庆文理学院林学与生命科学学院，重庆402160）

摘要：以56只老年大鼠为实验对象，随机平均分为2大组，给药组和对照组。建立不同运动强度的老年大鼠跑台运动模型，每大组随机分为4小组，分别处于小强度运动（5 m/min），中强度运动（10 m/min），大强度运动（20 m/min）以及制动状态。探讨银杏叶提取物GBE对不同运动强度老年大鼠抗氧化效果的影响。通过检测脾脏，胸腺中相应MDA（丙二醛）的含量，SOD（超氧化物歧化酶）、CAT（过氧化氢酶）、GSH-Px（谷胱甘肽过氧化物酶）等酶活性，分析银杏叶提取物（GBE）对不同强度运动过程中对机体抗氧化效果的影响。结果表明：银杏叶提取物具有较好清除氧自由基的能力，能有效提高机体组织的抗氧化能力；适当的小强度和中强度的运动可有提高机体组织的抗氧化性，而在高强度状态下运动，机体组织的抗氧化性反而会降低。

关键词：银杏叶提取物；老年大鼠；抗氧化效果

银杏，属于银杏科，中生代孑遗的稀有物种，为华夏特产，生长在海拔500 m～1 000 m、略微偏酸性（pH 值5~5.5）的土壤、排水状况良好地区的自然树林中，在东亚、北美、澳洲、等国家和地区均有大量分布。

在临床医学上，银杏叶为使用较为频繁的中药材之一，银杏叶提取物成分种类繁多，主要包括活性成分黄酮类化合物、萜内酯（银杏内酯和白果内酯）等，还包括部分含量较低的组分，如烯醇类、酚类、酸类、糖类等。由于这些组分的的作用机理，银杏叶提取物对人体中可有多重生理作用，如抗氧化清除自由基、保护心血管及神经系统等作用[1-3]。

根据曹春玲等的研究可以了解到机体内自由基的存在有可能会导致多种疾病的产生，而对于自由基，在生物体中，可简单分为内源性自由基和外源性自由基，而生物体内过量的自由基会经过一系列变化最后导致细胞发生功能障碍、细胞损伤或者死亡。在人体中有着许多种可以清除或者抑制自由基的活性酶，如SOD、CAT、GSH-Px等。黄酮类化合物的清除自由基机理与部分人工合成氧化剂相同，可以和氧自由基作用产生共振稳定的半醌试自由基，抑制过氧化反应[4-5]。

本研究选取一批健康的老年大鼠进行分组标记，在不同运动强度下喂食银杏叶提取物，培养四星期后宰杀取血，检测脾脏，胸腺中相应MDA的含量，SOD、CAT、GSH-Px等酶的生物活性，分析银杏叶提取物对不同强度运动过程中对机体抗氧化效果的影响[6]，为中老年机体提供更适宜的运动形式。建议他们在运动过程中适当摄入抗氧化补剂如银杏叶提取物，可有效减少运动损伤、增强机能运动能力和提高机体的抗氧化效果而达到提高免疫力的作用；该研究也可为今后银杏叶抗疲劳功能饮料的开发和应用提供理论参考。

1材料与方法

1.1材料与试剂

1.1.1实验动物

实验动物选取20月龄的雌性SD大鼠（清洁级）56只，体重（350±50）g，购自第三军医大学实验动物中心，实验动物许可证号：SYXK（军）2012-0031。

1.1.2主要试剂

银杏叶提取物（GBE，德国DAB10版标准制剂，含银杏总黄酮24 %，银杏内酯6 %）：由西安源森生物科技有限公司提供；CAT试剂盒、MDA试剂盒、GSH-Px试剂盒、SOD试剂盒：购自南京建成科技有限公司；考马斯亮蓝G-250：购自国药集团化学试剂有限公司；冰醋酸、磷酸、乙醇、氯化钠（均为分析纯）：购自成都市科龙化工试剂厂。

1.2主要仪器与设备

ZH-PT型动物跑台：安徽省淮北正华生物仪器设备有限公司；XP105DR电子天平：梅勒特-托利多仪器上海有限公司；754型紫外分光光度计：上海舜宇恒平科学仪器有限公司；DK-98-Ⅱ电子调温万用电炉：天津市泰斯特有限公司；Z160M高速台式微量离心机：Hermlelabortechnik；DNM-9602A酶标仪（波长：450nm）：美国伯乐仪器有限公司。

1.3试验方法

1.3.1动物分组及运动模型建立

所有大鼠自实验动物中心购回后进入实验室环境进行适应性饲养，同时进行跑台适应性运动，一周后选取环境适应良好的56只大鼠，随机均分成8组，分别标记为A、B、C、D、A1、B1、C1、D1，每组为7只，AD组为给药组，A1-D1组为对照组，按照字母顺序分别为小强度运动组（5 m/min），中强度运动组（10 m/min），大强度运动组（20 m/min）和制动组[7-9]。

按照设定的运动强度，每天下午进行跑台训练，每周运动5 d，1次/d；药物组每周相应5次饲喂GBE悬液（浓度为20 mg/mL），实验开始后，给药组大鼠在每周的前5天，每天上午9点进行灌胃，每次灌胃前称重，银杏叶提取物悬浮液灌胃的量按100 mg/kg体重的量进行，其余组饲喂相应体积生理盐水，喂养时间为4周。在实验过程中严格遵守《关于善待实验动物的指导性意见》规定对待实验动物，采用国家标准啃齿类动物的饲料喂养。

1.3.2样品收集

实验大鼠在宰杀前12 h禁食，宰杀及时解剖取其脾脏、胸腺，取出后装在离心管中，做好相应标记后放于样品袋置于-80℃冰箱保存，待检测。

1.3.3样本前处理

将样品从-80℃冰箱中取出解冻，准确称取组织重量0.1 g，按照重量（g）∶体积（mL）=1∶9，按照此比例的分配加入9倍体积生理盐水，碎化组织，冰水浴制备匀浆，2 500 r/min～3 000 r/min，离心10 min，取上清液待用[10-15]。

1.3.4指标检测

CAT、MDA、GSH-Px、SOD检测：均采用南京建成相关试剂盒检测，分别按说明书操作。

1.4数据分析

使用SPSS16.0软件对所得各数据进行统计分析。

2结果与分析

2.1银杏叶提取物（GBE）对不同运动强度大鼠组织中MDA含量影响

机体内胸腺MDA的产生是体内的氧自由基进攻生物膜中的多不饱和脂肪酸，形成的脂质过氧化物，MDA会使DNA、膜蛋白、酶发生一定程度的交联反应，从而导致膜通透性增加，以及细胞膜的各种结构、功能和代谢发生改变，最终对机体造成伤害甚至死亡，检测机体MDA的量可反映机体内脂质过氧化的程度。

2.1.1银杏叶提取物（GBE）对不同运动强度大鼠胸腺MDA含量影响

银杏叶提取物对在不同运动强度下大鼠胸腺MDA含量的影响如表1所示。

给药组中，大强度运动组大鼠胸腺MDA含量与制动组相比具有显著性差异（P<0.05），其它运动强度之间胸腺MDA无显著性差异；对照组中，大强度运动组大鼠胸腺MDA含量与制动组相比具有显著性差异

（P<0.05），其它运动强度组无显著性差异。

表1银杏叶提取物对不同运动强度大鼠胸腺MDA平均含量的影响Table 1 The effect of GBE on the content of thymus MDA in rats with different exercise intensitynmol/mgprot

由表1数据可知给药组与对照组在不同运动强度下的MDA含量相比较，给药组的MDA含量均略低于对照组，且在不同运动强度下，两组的MDA含量均大于制动组，说明运动过程会促进大鼠胸腺中MDA的产生，而GBE可降低MDA的合成；大强度运动下的大鼠胸腺MDA含量最高，说明大强度运动会明显促进大鼠胸腺中MDA的产生，从而说明在大强度运动下，机体细胞的损伤程度较其它运动强度更为严重，在小、中、大3种运动强度中，中强度运动组产生的MDA含量最低。

2.1.2银杏叶提取物（GBE）对不同运动强度大鼠脾脏MDA含量影响

银杏叶提取物对在不同运动强度下大鼠脾脏MDA含量的影响如表2所示。

表2银杏叶提取物对不同运动强度大鼠脾脏MDA平均含量的影响Table 2 The effect of GBE on the content of spleen MDA in rats with diffetrent exercise intensity　nmol/mgprot

从表可知，不同强度运动组的大鼠脾脏MDA含量在给药组与对照组分别间进行两两比较分析，均无显著性差异。

从表2中数据可以看出，给药组与对照组在不同运动强度下的脾脏MDA含量相比较，给药组的MDA含量均略低于对照组；在不同运动强度下，各组的MDA含量没有明显的变化规律。

2.2银杏叶提取物（GBE）对不同运动强度大鼠组织中SOD活性影响

SOD是体内重要的抗氧化酶，能清除超氧负离子自由基，从而保护机体细胞和组织不受自由基的损害，延缓机体衰老过程。

2.2.1银杏叶提取物（GBE）对不同运动强度大鼠胸腺中SOD活性影响

银杏叶提取物对在不同运动强度下大鼠胸腺SOD活性的影响如表3所示。

表3银杏叶提取物对不同运动强度大鼠胸腺SOD活性的影响Table 3 The effect of GBE on SOD activity of thymus in rats with different exercise intensityU/mgprot

结果表明，对照组，不同运动强度与制动组相比，中强度运动组大鼠胸腺SOD活性具有显著性差异（P< 0.05），对照组中其它运动强度之间均无显著性差异；在给药组中，各组运动强度组相互比较均无显著性差异。

分析表3数据可知，给药组不同运动强度下大鼠胸腺SOD活性普遍高于对照组；对照组中，中强度运动状态大鼠的SOD活性明显高于其他运动强度。综上所述，中强度运动会明显促进大鼠胸腺SOD的活性，减少机体的运动损伤；银杏叶提取物针对大鼠胸腺SOD活性有较为明显的促进作用，在运动过程中服用相关的银杏叶提取物，可有效减少运动损伤，提高机体的抗氧化能力。

2.2.2银杏叶提取物（GBE）对不同运动强度大鼠脾脏中SOD活性影响

银杏叶提取物对在不同运动强度下大鼠脾脏SOD活性的影响如表4所示。

表4银杏叶提取物对不同运动强度大鼠脾脏SOD活性的影响Table 4 The effect of GBE on SOD activity of spleen in rats with different exercise intensityU/mgprot

表中表明，给药组，不同运动强度与制动组相比，中强度运动组大鼠脾脏SOD活性具有显著性差异（P< 0.05），而给药组中其它运动强度之间均无显著性差异；在对照组中，各运动强度大鼠脾脏SOD活性相互比较均无显著性差异。

根据表4实验数据分析看出，给药组与对照组在不同运动强度下的SOD活性含量相比较，给药组的SOD活性均高于对照组，可见银杏叶提取物对大鼠胸腺SOD活性有较为明显的促进作用，且在中强度运动时对于大鼠脾脏SOD活性有更为明显的促进作用。

2.3银杏叶提取物（GBE）对不同运动强度大鼠组织中GSH-Px活性影响

GSH-Px在许多机体内广泛存在，可以在一定程度上有效地抑制机体内过氧化物的产生，它主要针对催化还原型谷胱甘肽（GSH）对氢过氧化物的还原性反应，研究普遍认为它对于机体细胞自身产生的一些有害过氧化物有一定的清除效果，可以有效地抑制脂质过氧化连锁反应过程，从而保护细胞膜的完整结构与功能。

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2.3.1银杏叶提取物（GBE）对不同运动强度大鼠胸腺中GSH-Px活性影响

银杏叶提取物对不同运动强度下大鼠胸腺GSHPx活性影响如表5所示。

表5银杏叶提取物对不同运动强度大鼠胸腺GSH-Px活性的影响Table 5 The effect of GBE on GSH-Px activity of thymus in rats with different exercise intensity　U/mgprot

对照组与给药组中，不同运动强度与制动组相比，大鼠胸腺中GSH-Px活性没有有显著性差异；但是在小强度和中强度运动中，给药组与对照组相比具有显著性差异（P<0.05），给药组胸腺中GSH-Px活性明显高于对照组。

从表5还可以看出，给药组不同运动强度下的GSH-Px活性均高于对照组，由此可推测银杏叶提取物对大鼠胸腺GSH-Px活性也有明显的促进作用，而小强度以及中强度运动会明显促进大鼠胸腺GSH-Px的活性。

2.3.2银杏叶提取物（GBE）对不同运动强度大鼠脾脏活性影响

银杏叶提取物对在不同运动强度下大鼠脾脏GSH-Px活性影响如表6所示。

对照组，不同运动强度与制动组相比，大强度运动组大鼠脾脏GSH-Px活性具有显著性差异（P< 0.05），GSH-Px活性明显低于其他组别；给药组中，各组运动强度组相互比较均无显著性差异。

表6银杏叶提取物对不同运动强度大鼠脾脏GSH-Px活性影响Table 6 The effect of GBE on GSH-Px activity of spleen in rats with different exercise intensity　U/mgprot

2.4银杏叶提取物（GBE）对不同运动强度大鼠组织中CAT活性影响

在生物体中的活性氧和自由基的产生和积累，会使得膜脂发生一系列的过氧化反应，最后导致机体自身新陈代谢的紊乱。机体内的部分生化反应，例如多数酶促反应和非酶促反应都会产生H2O2，H2O2是有毒害作用的活性氧的前体。CAT的功能主要有两个方面：一是催化H2O2，使其分解为水和氧气，清除体内的过氧自由基，从而使细胞免于遭受H2O2的损害，二是催化分解过氧化乙醇、甲酸盐、亚硝酸等有害物质，维持机体的正常代谢。CAT活性的大小可反应机体的抗氧化能力。

2.4.1银杏叶提取物（GBE）对不同运动强度大鼠胸腺CAT活性影响

银杏叶提取物对在不同运动强度下对大鼠胸腺CAT活性影响如表7所示。

表7银杏叶提取物对不同运动强度大鼠胸腺CAT活性的影响Table 7 The effect of GBE on CAT activity of thymus in rats with different exercise intensityU/mgprot

给药组和对照组中不同运动强度与制动组相比，中强度运动组大鼠胸腺CAT活性具有显著性差异（P< 0.05），其它运动强度之间均无显著性差异。

从表7数据，我们可以看出不同运动强度中给药组大鼠胸腺CAT活性都高于相应的对照组，说明银杏叶提取物可以有效促进CAT活性，中强度运动也可有效促进CAT活性的提高，从而提高机体的抗氧化性。

2.4.2银杏叶提取物（GBE）对不同运动强度大鼠脾脏CAT活性影响

银杏叶提取物对在不同运动强度下大鼠脾脏CAT活力的影响如表8所示。

表8银杏叶提取物对不同运动强度大鼠脾脏CAT活性的影响Table 8 The effect of GBE on CAT activity of spleen in rats with different intensity of exercise　U/mgprot

不同强度运动组的大鼠脾脏CAT活性在给药与对照的组别内和组别间分别进行比较分析，均无显著性差异。

从表8数据我们可看出虽然各组大鼠脾脏CAT活性没有显著性区别，但是不同运动强度中给药组大鼠脾脏CAT活性都高于相应的对照组，说明银杏叶提取物还是可以有效促进CAT活性，其中在小强度和中强度运动状态下，给药组和对照组的CAT活性最强，说明适当的运动，可提高机体CAT活性，同时在运动过程中补充银杏叶提取物制剂对清除机体内过氧化氢等过氧自由基有一定的促进作用。

3　结论

综合上述研究结果可以看出银杏叶提取物可以有效提高大鼠机体胸腺和脾脏组织中SOD、GSH-Px、CAT等酶的活性并降低MDA的含量，说明银杏叶提取物具有较好清除氧自由基的能力，能有效提高机体的抗氧化能力；通过给药组和对照组的大鼠在不同运动强度下组织SOD、GSH-Px、CAT和MDA等指标的测定，发现适当的小强度和中强度的运动可有提高机体的抗氧化性，而在高强度状态下运动，机体的抗氧化性反而会降低。

参考文献：

[1]汤国宇.银杏黄酮类化合物对大鼠抗氧化效果的影响[J].山西体育科技,2013,33(3):20-23

[2]李文建,杨则宜,曹远林,等．银杏叶提取物抗运动性疲劳自由基机制初探[J]．食品工业科技,2009,30(3):307-309

[3] FENG X, ZHANG L, ZHU H. Comparative anticancer and antioxidant activities of different ingredients of Ginkgo biloba extract (EGb761)[J].Planta Med,2009,75(8):792-796

[4]曹春玲,朱建伟,任宁,等.银杏叶提取物对自然衰老大鼠脑组织和心肌组织的抗氧化作用[J].中国医疗前沿,2009,4(2):7,25

[5]雷红松,沈程文,徐超富,等.银杏叶提取物药理作用研究进展[J].茶叶通讯,2004(1):21-24

[6]李文建,杨则宜,陈宗道.银杏叶提取物对训练大鼠不同类型肌纤维抗氧化活性的影响[J].营养学报,2009,31(6):564-568

[7]刘卫国,王刚.黄酮类化合物对大强度耐力训练大鼠的影响试验[J].西北农业学报,2010,19(9):12-15

[8]中华人民共和国科学技术部关于善待实验动物的指导性见. 2006-09-30.http://www.most.gov.cn

[9]翁锡全.衰老大鼠跑台抗阻训练模型的实验研究[J].中国运动医学杂志,2013(3):226-231

[10]周琪,梁运祥.动物肝组织中丙二醛含量测定方法的改进[J].时珍国医国药,2010,21(1):224-225

[11]邵邻相.灵芝对小鼠SOD活性、丙二醛和脂褐素含量的影响[J].现代中药研究与实践,2003,17(4):42-43

[12]庞艳青,龚一萍.疏肝活血法对室性心律失常大鼠血清超氧化物歧化酶、丙二醛影响的实验研究[J].浙江中医药大学学报,2013, 37(1):66-73

[13]林彦玮,毕占英,杨锋,等.小儿肺炎时超氧化物歧化酶及丙二醛与免疫功能的探讨[J].中国冶金工业医学杂志,1997,14(3):140-142

[14]赵继学.过氧化氢酶的测定方法与临床应用价值[J].西部医学, 2009,21(12):2164-2165

[15]王华芳,展海军.过氧化氢酶活性测定方法的研究进展[J].科技创新导报,2009(19):7-8

Effect of Antioxidant on Rats during Exercise of Ginkgo Biloba L. Leaves Extract（GBE）

ZHANG Mei-xia，YE Zhi-cheng
（College of Forestry and Life Science，Chongqing University of Arts and Sciences，Chongqing 402160，China）

Abstract：Through the establishment of different exercise intensity treadmill exercise in aged rats model to explore the impact of GBE on antioxidant effect of different exercise intensity in aged rats tissue in this article. 56 aged rats had been divided into the drug group and the control group by random grouping method in two large groups. Rats in drug group and control group were divided into low intensity exercise group，the moderate intensity exercise group，the large intensity exercise group and quiet group respectively. The malondialdehyde （MDA）content，CAT（catalase），SOD（superoxide dismutase enzyme）and GSH-Px（glutathione peroxidase）enzyme activity had been detected in spleen and thymus to verify antioxidant effect of GBE in aged rats tissue. The results showed that GBE could effectively improve the body's antioxidant capacity and appropriate intensity and moderate intensity exercise could improve the body's antioxidant activity，but in the high strength state，the body's antioxidant activity would been decreased.

Key words：Ginkgo Biloba L. leaves extract；aged rats；antioxidant effect

收稿日期：2015-09-11

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2016.01.005

作者简介：张美霞（1978—），女（汉），副教授，博士，研究方向：食品化学与营养学。

基金项目：重庆市教委科研项目（KJ121202）；重庆市渝中区科委科研项目（20120229）