中药显微鉴别的实习带教探讨

廖 娴，黄月纯

（广州中医药大学第一附属医院，广东 广州 510405）

中药显微鉴别的实习带教探讨

廖 娴，黄月纯

（广州中医药大学第一附属医院，广东 广州 510405）

中药；显微鉴别；实习带教

中药学或药学专业学生在实习之前，经过几年紧张的基础理论、实验教学的学习后进入医院、药厂等单位实习，通过实习既可将课堂上所学的理论、技能应用于实践，又可巩固所学的基础知识，培养学生的操作技能，为毕业后独立工作打下坚实的基础。我院是一所综合性的教学医院，药剂科在每年的实习生带教工作中都肩负着重要任务，药检室是药剂科的实习班组之一，对于毕业实习生，在药检室安排的实习时间大多为1～2周，时间较短，但涉及的专业知识面较广[1]。近年来国家有关部门对医院制剂的质量控制要求不断提高，要求制剂用的中药饮片必须检验合格，《中国药典》收载的中药饮片大多有显微鉴别项目，药监部门对医院制剂质量标准也有了更明确的要求，制剂成品中有关显微鉴别的项目也越来越多。因此，操作简便、经济实用的中药显微鉴定项目亦成了医院制剂药检室的重要工作之一。本文根据学生的实习时间及以往带教中遇到的问题，对显微鉴别实习带教模式进行探讨。

1 岗前加强制度和安全教育

组织学生学习医院和药检室相关的规章制度及实习期间的纪律要求。由于药检工作每天都涉及多种试剂、仪器的使用，显微鉴别涉及一些易燃易爆的溶剂，如酒精灯的使用。因此要求实习学生必须有很好的安全意识，带教教师必须给学生讲解实验室的一般安全知识及一般事故的处理方法，确保自身安全和实验室的安全[2]。

2 显微鉴别技术的介绍

显微鉴别是利用显微镜对药材或饮片的切片、粉末、解离组织或表面制片及含饮片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等进行鉴别的一种方法。该方法使用的仪器、试剂较少，操作简便、易行，判断准确，在实验室中应用较为广泛。另外，在新版《中国药典》中应用显微鉴别方法的中药材和中成药也特别多。

根据对近年来中药或药学专业实习生的了解，他们大多数只是曾经在实验室进行中药材的显微简单操作，手工描绘显微图谱，较少涉及中药复方制剂的显微鉴别项目，亦缺乏采用专用摄像系统的显微鉴别规范化操作。因此，在实验前就显微鉴别操作技术方面的一些共性问题对学生进行介绍非常有必要。

3 显微鉴别实验操作技术的掌握

3.1 试液的合理使用

要做好显微检定，制作良好的切片是关键，而各种试液的合理使用显得尤为重要。为了能够清楚地观察药材组织构造的细胞及其内含物的形状，必须把切片或粉末标准片用适当的试液进行处理和封藏，试液的选择必须具有合理性[3]。学生开始操作时，对观察不同组织、细胞等所使用的试液比较模糊，所选择的试液有时也不合适，在一定程度上影响了制片的效果。

制片常用的试液主要有：（1）水合氯醛，此液为常用封藏液，也是透化剂，可使干缩的细胞膨胀而透明，并能溶解淀粉粒、树脂、蛋白质、叶绿素及挥发油等。此法加入试液后需适当加热，使切片清净、透明，适用于观察组织构造和细胞形状及叶片、花和花粉粒，尤其适于观察草酸钙结晶。（2）水或稀甘油，切片直接加水或稀甘油封藏，适用于观察细胞壁颜色及淀粉粒、油滴、树脂等。（3）甘油醋酸试液（斯氏液），此液为常用封藏液，专用于观察淀粉粒形态，可使淀粉粒保持原形，便于测量其大小。（4）甘油乙醇试液，此液为封藏液，也是软化剂，常用于保存植物性材料及临时切片，有软化组织的作用。中药的显微鉴定中除应用以上几种透化试剂外，还有以下几种常用的显色试剂：间苯三酚试液与盐酸合用可使木化细胞壁染成红色或紫红色；苏丹Ⅲ试液可使木栓化、角质化细胞壁及脂肪油、挥发油、树脂等染成棕色或黄棕色；碘试液使淀粉粒染成蓝色或紫色。

3.2 药材和饮片显微制片

选好了所需要的试液后，就要将样品制成适于镜检的标本，这个步骤是显微鉴别的关键，学生只有掌握好制片的方法，才能更好地观察到所需要的目标物。对于完整的药材或饮片可制成各种切面的切片；对于粉末药材或饮片（包括丸、散等成方制剂）可直接装片或适当处理后制片。药材或饮片切片标本的制作方法较多，在日常的检验中，经常用到的就是徒手切片或滑走切片法、表面制片、花粉粒与孢子制片、磨片法制片、粉末制片等，其中最常用到且制片较简单的就是粉末制片。粉末制片主要用于粉末状的药材和饮片的观察。学生在实习期间显微鉴别主要用到的也是粉末制片。

在药材或饮片粉末制备时，首先是取干燥药材或饮片，用打粉机粉碎，粉末过四号或五号筛，装瓶，贴上标签。学生在制备粉末时，要注意取样的代表性，因为取样的代表性直接影响到结果的准确性。例如根类药材要切取根头、根中段及根尾等部位，要全部磨粉，不得丢弃渣子，过筛，混合均匀。如果药材要干燥，一般温度不能超过60℃，以免淀粉粒糊化。

制片时，先用解剖针挑取样品粉末少许，置载玻片的中央，加适宜的试液1～2滴，用针搅匀（如为酸或碱时应用细玻棒代替针），待液体渗入粉末后，用左手食指与拇指夹持盖玻片的边缘，使其左侧与药液层左侧接触，再用右手持小镊子或解剖针托住盖玻片的右侧，缓缓放下，使液体逐渐充满盖玻片下方。如果液体未充满盖玻片，应该从边缘滴加液体，以防产生气泡；若液体过多，用滤纸片吸去溢出的液体。学生在开始制片时，往往加入的粉末太多，如取量多，显微特征重叠轮廓不清，反而费时，不易找到所需要的目标物。

为了便于观察某些组织等，经常需要透化。如需透化，可在载玻片上放有粉末处滴加水合氯醛试液1～2滴，将载玻片于酒精灯火焰上方约1～2 cm处往返摆动加热，至边缘起小泡即停止加热，补充试液后再加热，直至切片透化完全为止。加热温度不宜过高，以防水合氯醛试液沸腾，使组织内带入气泡。加热时应将载玻片不断移动，以免受热不均而炸裂。透化后放冷，加甘油乙醇溶液1～2滴，盖上盖玻片。

3.3 显微镜的使用

学生在中学的时候就已经开始接触显微镜，对显微镜的操作比较熟悉，但是在操作过程中还是有几点需要注意。（1）下降镜筒时，一定要用双眼从侧边注视目镜，使之接近装片，但又要防止镜头触及装片，否则会压碎装片和损坏物镜。（2）有必要使用高倍物镜时，必须先在低倍物镜下将目标移到视野的中心，然后换用高倍物镜。因为在低倍物镜下看到的物像放大倍数小，但看到的标本实际面积大，容易找到目标，而与低倍物镜相比，高倍物镜下看到的物像大，同样的视野面积看到的标本的实际面积小，在装片不动的情况下，高倍物镜看到的只是低倍物镜视野的中心部分。（3）换高倍物镜时，千万不可将镜筒升高，正确的做法是直接转动转换器，换上高倍物镜即可。（4）使用高倍物镜之后，透镜与装片之间的距离很近，使用粗准焦螺旋容易压碎玻片和损坏透镜，或者由于物像一闪而过，找不到要观察的目标，因此，必须用细准焦螺旋调焦，细准焦螺旋只在调节图像清晰度时使用。

3.4 图像处理

显微镜的放大倍数是物镜的放大倍数与目镜的放大倍数的乘积，如物镜为10×，目镜为10×，其放大倍数就为10×10= 100。放大的是物体的直线长度和宽度而不是面积。现在的显微镜大部分都安装了拍照软件，便于图片的真实保存。本药检室所应用的是明美图像软件，首先应先把玻片移至空白处，做白平衡。采集图像时，首先将图像调节清晰，然后可以点击更多参数进一步调节图像，如亮度、对比度、色调、饱和度、锐度和曝光度等。保存好的图片可以通过静态测量软件标记所需要的长度、面积等参数，但学生在使用静态测量软件的过程中，有时会忘记在对话框中选择所拍摄图像物镜的倍数。

4 选择有代表性的中药让学生参与检验全过程

大黄是常用中药，《中国药典》大黄的显微鉴别方法[4]涉及显微鉴别的多个方面，可作为学生带教的典型实例。大黄草酸钙簇晶直径大小范围为20～160 μm，部分较大，直径能达190 μm，是大黄的主要显微特点。而中药复方制剂特别是散剂、膏剂，由多味中药组成，如本院制剂中的疗筋膏含有大黄、赤芍等两味中药，且两味中药均具有草酸钙簇晶，在拟订标准时，只有直径能达50 μm，才是大黄的显微特征。因此，在带教过程中要让学生了解制剂显微标准制订的依据以及与中药（饮片）的区别。

在粉末制片中，取大黄粉末分别制透化片和水装片。透化片的制作方法：取大黄粉末少许放于载玻片上，滴加1～2滴水合氯醛，搅匀，在酒精灯上加热透化，避免蒸干，反复透化2～3次，稍冷却后滴加1滴稀甘油，盖上盖玻片，镜检，观察草酸钙簇晶。水装片的制作方法：取大黄粉末滴加纯化水1～2滴搅拌均匀，盖上盖玻片，镜检淀粉粒。另取疗筋膏透化片，观察草酸钙簇晶。按照显微镜的操作规程使用显微镜，双击打开明美图像软件采集图像，保存好的图片再利用静态测量软件标记即完成。

[1]黄月纯.中药薄层色谱鉴别的实习带教探讨[J].中国中医药现代远程教育，2012，10（18）：65-66.

[2]许锐鑫.浅谈化学实验的安全教学[J].卫生职业教育，2003，21（9）：129.

[3]袁汀.在中药检验中应用显微鉴定的几点体会[J].实用药物与临床，2002（S1）：87.

[4]国家药典委员会.中国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015．

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1671-1246（2016）24-0069-02