细胞块并免疫细胞化学染色技术在胸水脱落细胞学中的诊断价值

曹莉 吴倩 张赟 谢青梅 林永顺 黄平 曹颖△

(1.水城矿业集团总医院病理科，贵州 六盘水 553001；2.贵州省人民医院病理科，贵州 贵阳 550002)



△通信作者

细胞块并免疫细胞化学染色技术在胸水脱落细胞学中的诊断价值

曹莉1吴倩2张赟2谢青梅2林永顺2黄平2曹颖2△

(1.水城矿业集团总医院病理科，贵州 六盘水 553001；2.贵州省人民医院病理科，贵州 贵阳 550002)

胸水； 细胞块； 免疫细胞化学； 诊断

临床病理细胞学诊断中，常常会遇到各种体液找癌细胞的送检标本，其中较多见的是胸水标本。胸水脱落细胞学常规方法为离心后取沉渣涂片并瑞姬染色下光镜诊断。但常规制作的涂片细胞容易堆积，染色后细胞结构不清，确诊困难，导致癌细胞检出率低[1]。我们对贵州省人民医院病理科2015年1-7月收到的60例胸水标本制作胸水沉渣细胞块、HE染色并做波形蛋白(Vim)、广谱细胞角蛋白(CK)、CK5/6、Wilm’s Tumor(WT-1)、D2-40、Calretinin、癌胚抗原(CEA)、甲状腺转录因子-1(TTF-1)及NapsinA免疫细胞化学染色，并与常规制作涂片瑞姬染色比较，报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 收集贵州省人民医院病理科2015年1-7月胸水标本60例。其中男35例，女25例,平均年龄(62±13)岁。

1.2 方法 (1)常规涂片瑞氏-姬姆莎(瑞姬)染色：取50 mL胸水以2 000 r/min离心15 min，倒去上清液，取沉渣涂片，瑞姬染色，光镜下观察；(2)细胞块制备及HE染色：取50 mL胸水以2 000 r/min离心15 min，倒去上清液，取沉渣用擦镜纸包裹固定，放入脱水机，脱水、包埋、切片后HE染色；(3)免疫细胞化学染色：采用EnVision二步法，按照说明书进行操作。一抗Vim、CK广、CK5/6、WT-1、D2-40、Calretinin、CEA、TTF-1及NapsinA工作液购于北京中杉金桥生物技术有限公司。用已知阳性的人肺腺癌组织和胸膜间皮组织作阳性对照，PBS液替代一抗作阴性对照；(4)免疫细胞化学染色结果判定：参照组织学原则，Vim、CK广、CK5/6、D2-40、Calretinin、CEA及NapsinA以胞膜/胞质着棕黄色判定为阳性，胞膜或胞质未见棕黄色判定为阴性；WT-1、TTF-1以胞核着棕黄色判定为阳性，胞核未见棕黄色判定为阴性。

2 结 果

2.1 常规涂片瑞姬染色结果 本组60例胸水中43例出现细胞堆积，结构不清晰。在常规涂片下9例报告为未查见癌细胞，10例报告为查见癌细胞，35例报告为查见可疑癌细胞，6例报告为查见核异质细胞。

2.2 细胞块HE染色结果 本组60例胸水细胞块HE染色中，35例能明显分辩出癌细胞呈腺泡、腺管和实性细胞团等排列方式，具细胞异型性和结构异型性。

2.3 免疫细胞化学染色结果 本组60例胸水中，查见腺癌细胞49例，癌细胞CK广、CEA、TTF-1、NapsinA阳性，Vim、CK5/6、WT-1、D2-40、Calretinin阴性。11例胸水未查见癌细胞，胸水见增生的间皮细胞，间皮细胞Vim、CK广、CK5/6、WT-1、D2-40、Calretinin阳性，CEA、TTF-1、NapsinA阴性。

3 讨 论

正常胸腔内有少许浆液，起到润滑作用。在病理状态下浆液可明显增多后出现胸水。随着恶性肿瘤发病率的不断升高，恶性胸水不断增多。脱落细胞学检查一直是恶性胸水的主要诊断手段，但常规离心后涂片细胞容易堆积，染色后结构不清，影响诊断准确性；此外，腺癌细胞与增生或变性的间皮细胞在形态学上有交叉，也造成部分病例确诊困难[2]。本组60例常规涂片瑞姬染色中，仅10例可明确诊断为癌细胞，35例查见可疑癌细胞，6例查见核异质细胞。上述结果显示常规诊断方法难以做出十分准确的判断，从而影响患者的诊断及治疗。我们对本组60例胸水沉渣制作细胞块，切片后HE染色，光镜下部分病例可分辩出异型癌细胞，呈腺泡、腺管和实性细胞团等方式排列。我们分别采用腺癌细胞标记物(CK广、CEA)和间皮细胞标记物(Vim、CK5/6、WT-1、D2-40、Calretinin)进行免疫标记，可很好的将胸水中的间皮与腺癌细胞区分开，此外再选用肺组织标记物TTF-1、NapainA帮助明确腺癌细胞可能来源于肺组织。本组35例常规涂片瑞姬染色查见可疑癌细胞病例，经细胞块并免疫细胞化学染色均明确为腺癌细胞；6例查见核异质细胞病例，经细胞块并免疫细胞化学染色4例明确为腺癌细胞，2例明确为增生的间皮细胞。本组49例胸水查见腺癌细胞患者中有15例患者做支纤镜检测或经皮肺穿刺后病理证实为腺癌，5例患者由于自身原因出院未做进一步的检查及治疗，另外29例患者由于临床分期较晚，临床未做支纤镜检测或肺部包块切除，根据胸水结果做了相应的化疗；11例胸水未查见癌细胞患者有5例患者做支纤镜检测未见异常，经抗炎治疗后胸水减少，复查胸部CT未见明显肿块。本组常规胸水涂片瑞姬染色9例未查见癌细胞，经细胞块并免疫细胞化学染色明确为间皮细胞，10例常规胸水涂片瑞姬染色查见癌细胞，经细胞块并免疫细胞化学染色明确为腺癌细胞。对胸水脱落细胞制作细胞块，制作方法简单，设备要求低，同时以免疫细胞化学染色标记进行辅助诊断，可以明显提高癌性胸腹水的阳性诊断率，具有较好的临床应用价值。

[1] 郭智俊.胸腹水沉淀物琼脂石蜡双包埋切片法与常规涂片法的对比[J]. 临床与实验病理学杂志, 2012, 18(4): 437.

[2] 谢深科，舒千玉，姚军．细胞块免疫标记在胸腹水细胞病理诊断与鉴别诊断中的价值[J]. 中国医疗前沿, 2011, 6(4):73-74.

R392.12

B

1000-744X(2016)07-0715-02

2016-03-19)