液基细胞学在膀胱肿瘤诊断中的进展

唐金琦，谭万龙

(南方医科大学南方医院泌尿外科，广东广州　510515)



·综述·

液基细胞学在膀胱肿瘤诊断中的进展

唐金琦，谭万龙

(南方医科大学南方医院泌尿外科，广东广州510515)

摘要：膀胱肿瘤是泌尿系统最常见的一类肿瘤，尿细胞学是其主要诊断方法之一。液基细胞学是一种新的细胞学制片技术，可提高脱落细胞学诊断恶性肿瘤的敏感性，目前主要应用于宫颈疾病、肺肿瘤及消化道肿瘤等的诊治，但较少应用于膀胱肿瘤的诊断。本文主要阐述液基细胞学在膀胱肿瘤诊断中的应用及前景。

关键词:液基细胞学; 膀胱肿瘤;脱落细胞学

膀胱肿瘤是我国泌尿外科最常见的肿瘤，诊断方法主要有膀胱镜和尿脱落细胞学检查。膀胱镜检查和活检是诊断膀胱肿瘤的“金标准”，但其为侵入性有创的检查手段且价格较为昂贵，患者不易接受。尿细胞学检查是膀胱肿瘤诊断和术后随访的主要方法之一，传统的尿脱落细胞学检查因其取材方便、制片简单及特异性高等优点，已广泛应用于临床实践中，但受传统尿脱落细胞学的制片染色技术等因素的影响，使得其敏感性较低。液基细胞学检查是采用液基薄层细胞检测系统检测脱落细胞并进行细胞学分类诊断的技术，20世纪90年代末出现以来，应用越来越广泛[1-2]。目前该技术主要应用于妇科宫颈疾病的诊断与筛查[3-4]，在其他诸如肺癌等诊断中，也证实了其可提高诊断结果的准确性及可靠性[5]，在膀胱肿瘤诊断方面报道较少，但现有的液基细胞学膀胱肿瘤诊断的相关研究中，从不同层面证实了其可提高膀胱肿瘤的诊断率。

1目前常见的几种液基细胞学检查技术

1.1新柏氏液基细胞学技术(Thin-Prepcytologictest，TCT) 美国Cytyc公司Thin-Prep膜式过滤技术使用Thin-Prep2000自动制片，机轴和顶端由带过滤膜的圆柱型中空过滤器相连, 使得过滤器在标本瓶内自转进而带动液体旋动，分散黏液同时混匀细胞。当过滤装置停止转动后，通过相连的负压管的抽吸，细胞粘附在过滤膜上，同时液体通过滤膜上的微孔进入过滤装置；然后过滤器翻转180°接触并转移细胞至玻片上，细胞薄层玻片就形成了。由于使用由数万个直径8μm的孔隙构成的高精密度过滤膜，因而能有效排除炎性细胞、血细胞及黏液等干扰物。

1.2超柏氏液基薄层细胞学技术(autoCyteprepliquid-basedcytologictest，LCT)美国Tripath公司的离心沉淀方法制作液基薄片技术首先用涡旋震荡标本瓶使采集器上的细胞进入瓶内液体中,然后用自动化移液器进行梯度离心，由于试管中的比重液，使标本中那些无诊断意义的的细胞及黏液等浮在离心液的上部。试管底部的有诊断意义的细胞再重新悬浮、混匀并转移到细胞沉降管中，通过自然重力作用，细胞便沉降并附着于下方的载玻片上，形成薄层细胞玻片后便在操作台上自动染色。

1.3利普液基细胞学技术(Liquid-Preptest,LPT)美国LPT是由机器离心加上人工涂片的半自动制片技术，关键在于其细胞粘附包裹技术，通过梯度离心及特有的细胞基液将坏死物、黏液与有诊断意义的细胞相分离并形成均匀的悬浮液，再通过人工涂片制成单层薄片。该技术简单、无需昂贵的仪器设备，形成的细胞薄层背景均匀、干净，缺点在于难于去除红细胞的干扰,血性标本要多次检验。

2液基细胞学与传统脱落细胞学在诊断膀胱肿瘤中的比较

2.1液基细胞学与传统脱落细胞学涂片质量的比较传统的脱落细胞学因制片技术使得标本中收集的有效细胞成分较少，涂片中混有较多的黏液、血性成分等，涂片厚薄不一，不易观察，涂片质量较差。相反液基细胞学因其自动化及标准化的技术使得涂片均匀，细胞平铺，厚薄一致，有意义的细胞保存良好，结构清晰，减少干扰的炎性成分、血性成分及黏液等，进而获得更高的涂片质量。根据文献报道液基细胞学较传统脱落细胞学有更多细胞量、更清楚的背景和更好的细胞形态学特征，可以获得更好的涂片质量[6-10]，而细胞学涂片质量是影响病理医生做出诊断的重要因素。

2.2液基细胞学与传统脱落细胞学诊断膀胱肿瘤特异性的比较尿细胞学诊断膀胱肿瘤的特异性高，据文献报道特异性可达85%～100%[11]，可以说是膀胱肿瘤诊断的“金标准”，而液基细胞学保留了细胞学的高特异性的优点：叶见波等[10]通过对208例疑似膀胱癌患者尿液标本进行传统细胞学及液基细胞学检查比较，发现传统细胞学及液基细胞学检测膀胱癌患者的特异度均为99.3%；张珂[12]的研究表明液基细胞学检测膀胱肿瘤的特异性为98.2%，传统脱落细胞学特异性为95.9%，差异无统计学意义；有的研究表明传统脱落细胞学与液基细胞学诊断膀胱肿瘤的特异性为100%[6]。综合国内外研究表明液基细胞学技术保持了细胞学检查高度特异性的特点。

2.3液基细胞学与传统脱落细胞学诊断膀胱肿瘤敏感性的比较作为肿瘤筛查与诊断的检查方法，除了具备高特异性，还应具有较高的敏感性：有研究通过收集78例确诊膀胱癌患者的尿液，同时进行液基细胞学及传统尿液脱落细胞学的检测，发现传统脱落细胞学诊断的敏感性为77.36%，低于液基细胞学的敏感性88.46%，两者的差异有统计学意义[14]；研究证实传统细胞学的敏感性(37.5%)低于液基细胞学的敏感性(50%)，两者差异同样有统计学意义[6]；此外一些研究也同样证明了液基细胞学诊断膀胱肿瘤的敏感性高于传统的细胞学[10、12-13]。综合国内外的研究报道，虽然各个研究报道的敏感性数值存在差异，可能跟每个研究采用的方法、标本量、检测人员经验等因素有关，但在各个研究的结果均表明液基细胞学的敏感性要高于传统脱落细胞学，且差异具有统计学意义。

2.4液基细胞学与传统细胞学对不同分期分级膀胱肿瘤诊断的敏感性比较肿瘤的分期分级是影响膀胱肿瘤预后的重要因素，根据文献报道膀胱肿瘤的5年生存率呈分别从Ta～T1的91.9%到T4的10.2%，G1级的91.4%到G3的62.6%[15]，可见早期诊断、早期治疗是治疗膀胱肿瘤的关键。有研究通过收集305例疑似膀胱肿瘤患者的尿液标本，分别进行液基细胞学及传统脱落细胞学检查，检查结果根据最终的病理结果进行验证，研究发现在不同分期的膀胱肿瘤中，液基细胞学的敏感性均较传统脱落细胞学高，但仅在T1期敏感性差异有统计学意义；在不同级别膀胱癌中，液基细胞学对尿路上皮癌Ⅱ级的敏感性较传统细胞学提升且差异有统计学意义[12]。研究发现液基细胞学与传统细胞学在低级别尿路上皮癌的敏感性分别为29.4%、11.1%，高级别尿路上皮癌中为60.6%、51.6%[6]；另一些相关的研究也表明在早期的膀胱肿瘤中液基细胞学的敏感性较传统细胞学的敏感性有显著提高[14]；可见液基细胞学较传统细胞学在膀胱肿瘤的早期诊断方面更加具有优势。

3液基细胞学联合膀胱肿瘤尿液标志物提高诊断膀胱肿瘤的敏感性

近年来，尿液中膀胱肿瘤标志物因其对膀胱肿瘤有较高的敏感性受到了广泛的关注，美国食品药品监督管理局(FoodandDrugAdministration，FDA)已批准核基质蛋白-22(nuclearmatrixprotein，NMP22)、膀胱肿瘤抗原(bladdertumorantigen，BTA)、免疫荧光细胞学(ImmunoCyt)等用于膀胱肿瘤的检测，然而因尿液肿瘤标志物易受到炎症、结石、其他恶性肿瘤等影响导致较高的假阳性率，降低其诊断膀胱肿瘤的特异性[16-17]。故单独行上述检查诊断膀胱肿瘤的作用受到了限制，而液基细胞学具有较高的特异性，可以说是膀胱肿瘤诊断的“金标准”，将液基细胞学与尿液肿瘤标志物联合起来可以提高临床应用价值，另外液基细胞学标本可进一步用于免疫组织化学等检测[18-19]的优点，避免重复取材人力物力的浪费。

3.1液基细胞学联合NMP22提高诊断膀胱肿瘤的敏感性NMP22是一种与有丝分裂相关的蛋白质，在尿路上皮肿瘤中存在高表达，有研究通过对疑似膀胱癌患者尿液进行液基细胞学与NMP22检测，发现液基细胞学诊断膀胱肿瘤的敏感性为71.7%，两者联合后可提高敏感性至86.7%[20]。类似的研究也证明NMP22联合液基细胞学检测可以提高膀胱肿瘤诊断的敏感性[16、22-23]。

3.2液基细胞学联合BTA提高膀胱肿瘤诊断的敏感性BTA是一种膀胱肿瘤抗原，是膀胱肿瘤生长过程中释放出的蛋白水解酶。李红全等[16]通过研究发现液基细胞学诊断膀胱肿瘤敏感性是72.9%，与BTA联合后提高敏感性至87.5%。其他相关研究也表明BTA结合液基细胞学检查可以提高膀胱肿瘤敏感性[21]。

3.3液基细胞学联合细胞角蛋白20(cytokeratin-20，CK20)提高膀胱肿瘤诊断的敏感性CK20是构成细胞骨架的重要成分，是上皮细胞中间丝组成成分，当上皮细胞恶变时，CK20合成增多，尿液中CK20含量相应就增加，被证明是潜在的膀胱肿瘤标志物。SOYUER等[23]报道液基细胞学与CK20联合检测可将单用液基细胞学诊断膀胱肿瘤的敏感性从75.9%提高至88.9%，其他一些研究也同样证实了CK20联合液基细胞学可提高膀胱肿瘤诊断的敏感性[24-26]。

3.4液基细胞学联合ImmunoCyt提高膀胱肿瘤诊断的敏感性ImmunoCyt是利用抗体与膀胱肿瘤细胞表面抗原结合的检测方法。MIAN等[27]研究得出液基细胞学与ImmunoCyt检测诊断膀胱肿瘤敏感性分别为38.9%、84.9%，两者联合后可提高敏感性至89.3%，证实了液基细胞学联合ImmunoCyt可提高膀胱肿瘤诊断的敏感性。

综上所述，液基细胞学检查可再进一步通过NMP22、BTA、CK20及ImmunoCyt等免疫组织化学检测提高膀胱肿瘤诊断的敏感性，同时液基细胞学高特异性的及两者无创性检查等优点，使联合检测具有广泛的应用前景。

4应用前景及展望

同传统的脱落细胞学相比较，液基细胞学保留了细胞学检查高特异性的优点，同时又具有标准化的制片程序，更好地保存了细胞标本，减少对细胞形态的破坏，避免重复取材，能得到相对更完整的细胞信息，避免了传统脱落细胞学的涂片厚薄不一、背景干扰、细胞相互重叠的缺点，获得更好的涂片质量，最终提高膀胱肿瘤诊断的敏感性；同时液基细胞学标本还可以用于后续的免疫组织化学检查，避免重复取材人力物力的浪费，而且液基细胞学联合免疫细胞化学检测能进一步提高诊断膀胱肿瘤的敏感性，提高膀胱肿瘤无创检测水平。但目前液基细胞学在膀胱肿瘤诊断的相关研究相对较少，缺乏大样本多中心的前瞻性随机对照试验研究，而且相关研究对于液基细胞学检测次数及尿液标本留取的时机等均未涉及，得出的研究结果差异较大，需要进一步研究明确检测次数及尿液标本留取时机等，进而为临床工作提供指导。

综上，液基细胞学诊断膀胱肿瘤有较高的敏感性，能较早地发现膀胱肿瘤，在膀胱肿瘤的诊断，尤其早期诊断中有较高的临床应用价值；此外相对简便性(患者只需留取尿液标本)、无创性的优点，使其在膀胱肿瘤患者术后随访中也将具有广泛的应用前景。

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(编辑何宏灵)

收稿日期：2015-09-13修回日期：2015-11-30

通讯作者：谭万龙，教授，博士生导师.E-mail：tanwanlong@gmail.com

作者简介:唐金琦(1989-),男(汉族),硕士研究生.研究方向：膀胱肿瘤.E-mail：740601236@qq.com

中图分类号:R737.14

文献标志码:A

DOI：10.3969/j.issn.1009-8291.2016.04.023