甲状腺乳头状癌组织中血管内皮生长因子-C和PTEN蛋白的表达及其与临床病理参数的关系

陈政华

(滨州医学院烟台附属医院甲状腺乳腺外科，山东　烟台　264100)



甲状腺乳头状癌组织中血管内皮生长因子-C和PTEN蛋白的表达及其与临床病理参数的关系

陈政华

(滨州医学院烟台附属医院甲状腺乳腺外科，山东烟台264100)

〔摘要〕目的探讨淋巴管生成因子血管内皮生长因子(VEGF)-C和PTEN蛋白在甲状腺乳头状癌(PTC)的表达及其与患者病理参数之间的相关性。方法采用免疫组织化学SP法检测VEGF-C与PTEN蛋白在PTC组织75例及75例甲状腺瘤患者组织中的表达情况；分析VEGF-C和PTEN蛋白之间的相关性及其与患者病理参数之间的关系。结果实验组VEGF-C蛋白阳性表达水平显著高于对照组，PTEN蛋白阳性表达水平显著低于对照组(P<0.05)；PTC中VEGF-C、PTEN蛋白表达在TNM分期、淋巴结转移间差异具有统计学意义(P<0.05)，VEGF-C、PTEN蛋白两者在PTC中的表达呈负相关(r=-0.260，P<0.05)。结论PTC患者VEGF-C及PTEN蛋白的表达与淋巴转移存在密切相关，检测PTC患者VEGF-C及PTEN蛋白的表达可作为判断PTC转移和预后的参考指标。

〔关键词〕甲状腺乳头状癌；血管内皮因子-C；PTEN蛋白

甲状腺癌(TC)为机体常见恶性肿瘤之一，约占全身恶性肿瘤的1%〔1〕，其中，甲状腺乳头状癌(PTC)在TC中所占比例高达80%〔2〕。研究报道〔2〕，PCT中有30%~80%患者可发生淋巴转移，预后效果一般较差。对PTC患者发生淋巴转移的机制尚不完全清楚，且缺乏评价PTC患者发生淋巴转移、复发及其预后的特异性指标。研究显示〔3〕，作为血管内皮生长因子(VEGF)家族最新发现的成员，VEGF-C可特异性作用于机体淋巴管内皮细胞，不仅能够诱导肿瘤周边组织发生淋巴管增生，且在促进肿瘤生长和转移中具有举足轻重的作用〔4〕。PTEN是一种与肿瘤发生、发展存在密切关系的抑癌基因，研究发现〔5〕，PTEN参与多种肿瘤的发生、发展及转移浸润。本研究旨在探讨VEGF-C和PTEN的表达情况与PTC临床病理特征的关系。

1对象与方法

1.1研究对象选取2010年6月至2015年1月我院行手术治疗确诊为原发肿瘤的150例患者，所有切除标本术后均经病理确诊，患者临床资料完整，均未合并甲状腺其他疾病，均为初次手术且未经过任何治疗，排除合并心、肝、肾功能不全及其他恶性肿瘤患者。PTC患者切除标本75例作为观察组，其中男25例，女50例；年龄28~74〔平均(42.83±7.38)〕岁，淋巴转移患者42例，未发生转移患者33例，TNM分期：T1/T2 期患者38例，T3 /T4期37例。选取甲状腺瘤患者切除标本75例作为对照组，男28例，女47例；年龄26~71〔平均(43.23±8.37)〕岁。两组患者年龄、性别比较，均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2研究方法采用免疫组织化学SP法检测患者癌旁组织与PTC组织中VEGF-C和PTEN表达情况，DAB显色试剂盒和SP法试剂盒购于北京国贸生物技术公司，兔抗人VEGF-C多克隆抗体购于北京栗康生物公司，浓缩型兔抗人PTEN蛋白多克隆抗体(1∶800)购自北京科达生物技术公司。使用中性10%甲醛对150例标本进行固定，石蜡包埋，制取4 μm厚度标准切片后，采用免疫组化法进行染色。用阳性乳腺癌切片为阳性对照，用磷酸盐缓冲液(PBS)取代一抗为阴性对照，所有实验操作均严格按照实验说明书进行。

1.3结果判定标准染色组织细胞出现棕色颗粒表示阳性表达。VEGF-C蛋白阳性表达主要于细胞胞质。由3名病理医师采用双盲方法对150例例切片进行阅片。每张切片至少选取10个不同视野于高倍镜下(×400)观察，以此来判断组织细胞着色率与染色强度〔6〕。采用半定量十三点评分法对结果进行判定；阳性细胞百分比0分为无阳性细胞；阳性细胞百分比≤10%计为1分；10%<阳性细胞百分比≤50%计为2分；50%<阳性细胞百分比≤80%计为3分；染色强度按阴性、弱、中等、强染色分别计为0~3分。着色强度：未着色计为0分，浅棕色计为1分，棕色计为2分，深棕色计为3分。两个指标乘积为最终评价结果：0~1分为阴性表达，2~3分为阳性表达。

1.4统计学方法采用SPSS19.0软件进行χ2检验和Spearman检验。

2结果

2.1两组患者VEGF-C与PTEN蛋白的表达情况实验组VEGF-C及PTEN蛋白的阳性表达率分别为58.14%(43/75)和33.33%(25/75)，两组比较差异显著(P<0.05)。

2.2PTC临床病理特征与VEGF-C和PTEN蛋白表达水平之间的关系不同TNM分期、淋巴结转移患者间VEGF-C、PTEN蛋白表达水平比较差异显著(P<0.05)，不同年龄、性别间的EGF-C、PTEN蛋白表达水平间比较无统计学意义(P>0.05)。相关性分析显示PTC患者中VEGF-C与PTEN蛋白的表达水平呈负相关(r=-0.301，P<0.05)。

3讨论

PTC是临床上常见的头颈部恶性肿瘤，好发于年轻女性，且发病率有逐年上升的趋势。淋巴道是PTC转移的主要方式，临床上常常有以颈部淋巴结转移灶为首发症状的PTC患者，且淋巴道转移是导致术后复发的主要原因。VEGF-C在肿瘤组织中表达水平较高，与恶性肿瘤的发生、发展及淋巴道转移均存在密切关系。研究报道，VEGF-C可激活淋巴内皮细胞上的VEGFR-3并与之结合，引起局部病灶组织淋巴管生成与增生，肿瘤细胞可通过基底膜不完整的新生淋巴管进入淋巴系统，发生淋巴转移；同时，VEGF-C能够促进肿瘤细胞分泌相应的细胞因子，改变局部组织微环境，使肿瘤细胞在淋巴系统中更易生存，促进肿瘤细胞经淋巴道转移〔7〕。此外，VEGF-C 也可激活血管内皮细胞的VEGF受体-2(VEGFR-2)并与其结合，促使血管新生TC组织中VEGF-C的表达，且在淋巴结转移肿瘤组织中VEGF-C表达水平更高〔8〕。本研究说明VEGF-C在CT的转移中扮演者重要的角色，与既往研究结果一致〔8〕。

PTEN是继P53后人类肿瘤中突变与缺失率最高的抑癌基因，研究表明〔9〕，PTEN突变和缺失源存在于大多数肿瘤中，其主要通过磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路发挥作用。PI3K/AKT信号通路能够参与调节机体细胞增殖、分化与凋亡等过程，其可被非受体酪氨酸激酶或受体酪氨酸激酶活化，活化AKT进一步激活下游因子，发挥调节血管生成、细胞增殖及凋亡的作用。PTEN可拮抗PI3K/AKT通路，可以调控细胞周期、灭活多种凋亡效应分子、促进血管生成、迁移相关程序、激活端粒酶活性等途径促进肿瘤细胞生长和侵袭〔9〕。此外，PTEN具有下调VEGF表达抑制血管生长的作用。当PTEN蛋白表达缺失或降低时会失去对PI3K/AKT的下调作用，促进VEGF-C合成，诱导血管内皮细胞增生、肿瘤微淋巴管及血管形成，引起肿瘤细胞的侵袭与转移〔10〕。本研究提示PTEN低表达与CT的发生发展具有良好的相关性，PTEN有可能成为甲状腺癌恶性程度的潜在标志物，可作为临床观察 PTC发展的重要检测指标。

4参考文献

1李传乐，张滨.血管内皮生长因子-C和血管内皮生长因子受体-3在侵袭性甲状腺乳头状癌中的表达及意义〔J〕.国际免疫学杂志，2012；35(2)：157-9.

2易文君，钟德玝，邹琼燕，等.BRAF及其细胞外信号调节激酶1/2信号通路蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及意义〔J〕.中南大学学报(医学版)，2012；37(9)：889-94.

3Feng W，Jia S.Rapamycin inhibits the invasive ability of thyroid cancer cells by down-regulating the expression of VEGF-C in vitro〔J〕.Cell Biochem Funct，2012；30(6)：487-91.

4赵亚萍，王鑫.甲状腺乳头状癌的超声图像特征与病理分析〔J〕.医学影像学杂志，2012；22(2)：274-5.

5杜培准，李宇，周岩冰，等.甲状腺乳头状癌组织与癌旁组织中长链非编码RNA表达谱分析〔J〕.中华实验外科杂志，2014；31(11)：2548-50.

6甘世新，任晋军，米玉录，等.血管内皮生长因子C和PTEN在口腔鳞状细胞癌中的表达及与颈淋巴结转移的关系〔J〕.山西医药杂志(下半月版)，2012；41(14)：679-80.

7于波洋，马步云，周洁宏，等.甲状腺乳头状癌合并桥本氏甲状腺炎的BRAF基因表达及侵袭性〔J〕.现代生物医学进展，2015；15(15)：2833-5，2828.

8刘柳，沈美萍，马晔.血管内皮生长因子-C 在分化型甲状腺癌的表达及意义〔J〕.南京医科大学学报：自然科学版，2012；32(5)：686.

9Padma S，Sundaram PS，Arun BR.Unusual presentation of Warthin variant of Papillary thyroid carcinoma with lymph nodal metastases in a patient of Graves′ disease〔J〕.J Cancer Res Ther，2015；11(3)：652.

10Liu B，Wu X，Liu B，etal.MiR-26a enhances metastasis potential of lung cancer cells via AKT pathway by targeting PTEN〔J〕.Biochim Biophys Acta，2012；1822(11)：1692-704.

〔2015-10-19修回〕

(编辑袁左鸣)

〔中图分类号〕R73

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2016)05-1124-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.05.047

第一作者：陈政华(1975-)，男，主治医师，主要从事甲状腺乳腺疾病方向的研究。