标本稀释对乙型肝炎病毒核心抗体检测结果的影响

康素花 陈俊伟 张春山

标本稀释对乙型肝炎病毒核心抗体检测结果的影响

康素花 陈俊伟 张春山

【摘要】目的 探讨标本稀释对乙型肝炎病毒核心抗体检测结果的影响。方法 收集ELISA初筛试验HBcAb结果阳性标本200例，其中HBsAg、HBeAg或HBeAb、HBcAb阳性标本94例设为乙肝携带组，HBsAb或HBeAb、HBcAb阳性标本106例设为健康组。分别将待测血清作1：30倍稀释，再用ELISA法进行HBcAb的检测。结果 94例乙肝携带组标本稀释后HBcAb结果与原倍结果一致，仍为阳性，P＞0.05，差异不具有统计学意义；106例健康组标本经稀释后21例结果阳性，85例结果阴性，P＜0.05，差异具有统计学意义。结论 用ELISA法直接稀释检测标本的核心抗体易造成低浓度的标本结果呈现假阴性，造成核心窗口期患者的漏检，不仅给临床诊断带来麻烦，也会对安全输血造成很大的隐患，建议在基层医疗机构开展两对半检测应采用原倍血清进行试验。

【关键词】乙型肝炎病毒；核心抗体；标本稀释；酶联免疫吸附试验；结果影响

作者单位：361000厦门市湖里区江头街道社区卫生服务中心检验科

To Explore the Effect of Specimen Dilution on Detection of Hepatitis B Virus Core Antibody

KANG Suhua CHEN Junwei ZHANG Chunshan Xiamen City Huli District Jiangtou Street Community Health Center Laboratory, Xiamen 361000, China

[Abstract]Objective To explore the effect of specimen dilution on the detection of hepatitis B virus core antibody. Methods Selected 200 cases with HBcAb positive specimens at the screening tests of the ELISA assay, Wherein the HBsAg, HBeAg or HBeAb, HBcAb positive specimens of 94 cases of design for hepatitis B virus carrying group, HBsAb or HBeAb, HBcAb positive specimens of 106 patients with design for the healthy group. Then make 1:30 times dilution of serum respectively, and detected the HBcAb by the ELISA assay. Results HBcAb in 94 cases of hepatitis B virus carrying group were consistent with the results of the original, and remained positive, P>0.05, had no difference statistically significance, HBcAb in 106 cases of healthy group, 21 cases were positive and 85 cases were negative, P<0.05, had difference statistically signifiance. Conclusion The low concentration of the specimens will present false negative results by use ELISA assay direct dilution to detect hepatitis B virus core antibody, it is easy to cause patients missing who just in the core window. The ending not only make trouble for clinical diagnosis, but also can cause a lot of hidden trouble to the safety of blood transfusion, suggest that in the primary medical institutions to carry out the hepatitis B virus antibody test should better use the original times serum.

[Key words]Hepatitis B virus, Core antibody, Specimen dilution, ELISA, Results effect

乙型肝炎病毒（HBV）是乙型肝炎的病原体。HBV在全世界范围内广泛流行，全世界半数以上人口被乙型肝炎病毒感染过。我国是乙肝的高发区，累计HBV感染人群达60%以上[1]。HBcAb检测是乙型肝炎流行病学调查的良好指标，而酶联免疫吸附试验（ELISA）竞争法是检测HBcAb的常用方法，因方法简便、速度快捷而在临床实验中普遍应用[2]。目前市场上常用的ELISA法检测HBcAb的试剂盒通常是建议将原倍血清检测结果用于流行病学的调查，而临床诊断则需要用1：30倍稀释的标本进行检测。但在实际的工作中，我们发现1：30倍稀释后的标本检测结果会导致许多低浓度的HBcAb标本呈假阴性。通过对200例原倍HBcAb阳性的标本进行1：30倍稀释后检测，比较200例标本稀释前后的结果差异，探讨临床工作中开展HBcAb检测是否需要稀释，具体报告如下。

1　材料与方法

1.1 标本来源

选取门诊用ELISA法检测HBcAb结果阳性的标本200例，其中HBsAg、HBeAg或HBeAb、HBcAb阳性标本94例设为乙肝携带组，年龄7～65岁，平均（42.3±1.8）岁；HBsAb、或HBeAb、HBcAb阳性标本106例设为健康组，年龄11～72岁，平均（36.8±2.1）岁。两组在年龄、性别上对比，P＞0.05，差异不具有统计学意义。

1.2 仪器与试剂

英科新创（厦门）科技有限公司HBcAb试剂盒，BIORAD 1 575自动微孔洗板机，BIORADiMark酶标仪，电热恒温水浴箱，移液器，定时器。

1.3 方法

将待测的200份血清分别用生理盐水作1：30倍稀释，按照试剂盒说明书进行检测，每板均设置阴阳性对照，显色后在酶标仪上进行结果判读。

1.4 统计学方法

采用SPSS13.0统计学软件进行数据分析，计数资料以（%）表示，用χ2检验，P＜0.05，差异具有统计学意义。

2　结果

94例乙肝携带组标本经稀释后HBcAb结果与原倍结果一致，均为阳性，P＞0.05，差异不具有统计学意义；106例健康组标本经稀释后21例结果阳性，85例结果阴性，P＜0.05，差异具有统计学意义。见表1。

3　讨论

血液中的HBcAb是HBcAg的相应抗体，由于HBcAg主要存在于病毒颗粒的核心，游离的HBcAg极少，所以血液中检测不到HBcAg，也造成HBcAb对乙肝没有保护作用[3]，但是HBcAg具有很强的免疫原性，HBV感染者几乎均可以检测出HBcAb。因此HBcAb的测定有助于诊断HBsAg阴性的轻型和亚临床型乙型肝炎患者，亦可有助于筛选献血员。它是HBV感染后血清中最早出现的抗体，继HBsAg和HBeAg之后就可以在血清中检出，早期以IgM为主，急性感染恢复期和慢性持续性感染以IgG型为主。其持续时间长，甚至终身存在。高浓度的HBcAb见于急、慢性肝炎和乙肝携带者，并表明HBV复制可能仍活跃，血清具有传染性。低浓的HBcAb则表示既往感染过HBV或处于感染的早期，不排除具有传染性[4]。临床上常遇到单项HBcAb阳性的情况，可见于：（1）既往感染、HBsAb浓度太低检出不出。（2）低水平的病毒携带，HBsAg因效价低而检测不出。（3）核心窗口期，血清中HBsAg 和HBeAg消失，HBsAb尚未出现，此时可出现单项的HBcAb阳性。（4）被动获得HBcAb，如经输血和胎盘获得。（5）HBcAb假阳性。所以HBcAb检测结果的可靠性显得尤为重要，但很多实验室的工作人员碰到单项HBcAb阳性的结果往往是直接将阳性改为阴性，这种做法是极其不负责任的。乙肝携带组标本经稀释后仍为阳性，即为急、慢性肝炎或乙肝携带者的标本，他们血液的HBcAb浓度比较高，经稀释后仍能在竞争中占优势，与包被在微孔上的抗原相结合，显示阳性结果。对照的健康组为既往感染者，HBcAb的效价随着时间延长不断降低，经1：30稀释后的浓度完全失去竞争优势，试验结果显示这部分标本多显示假性阴性。当然对于这部分既往感染者其检测出来的HBcAb结果对并不会临床的诊断造成严重的影响，但是对于那些单项HBcAb阳性的患者，如果只是一刀切地用1：30倍稀释来检测，则很可能导致处于核心窗口期的患者出现漏诊，对临床的确诊、对献血者的筛查以及院感的监控都会造成不良后果。因此对于基层医疗机构，在科室设备比较不完善的情况下采用一刀切稀释检测核心抗体的做法并不合适，对于单项HBcAb阳性的患者应建议一段时间后复查两对半或去大型医疗机构检测HBV-DNA来最后确诊。

表1　两组标本稀释前后的阳性率比较

参考文献

[1] 张卓然，倪语星. 临床微生物学和微生物检验[M]. 北京：人民卫生出版社，2003：374.

[2] 邹映东，林云，张兴宗，等. 不同稀释及洗板方式对竞争法检测乙肝核心抗体结果的影响[J]. 国际检验医学杂志，2013，34（12）：1569-1570.

[3] 邱豫新. 841人乙肝核心抗体（抗HBc）测定[J]. 广东卫生防疫资料，1985（4）：5-8.

[4] 张碧莹，邢延芳，王珍珠，等. 血清稀释与否对检测乙型肝炎核心抗体结果的影响[J]. 中国实验诊断学杂志，2014，18（3）：428-430.

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2015.19.022

【文章编号】1674-9308（2015）19-0031-02

【文献标识码】B

【中图分类号】R446.1