乙型肝炎病毒DNA定量检测与临床的关系

朱建奎

【摘要】 目的 探讨乙型肝炎（乙肝）病毒脱氧核糖核酸（HBV-DNA）定量检测与临床的关系。方法 100例乙型肝炎血清标志物阳性患者作为研究组， 22例正常健康人作为对照组， 通过微板核酸杂交技术对其进行HBV-DNA 聚合酶链式反应（PCR）的定量检测。结果 所有研究对象依据血清学标志物可分为五组， 乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝E抗原（HBeAg）、乙肝核心抗体（抗-HBc）阳性患者的HBV-DNA阳性率远高于其他组患者， 比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论 乙肝血清学标志物不能完全反映出患者机体中HBV病毒复制情况， 而HBV-DNA 的定量检测， 对于乙肝病毒感染病情进展的检测和抗HBV复制药物治疗有重要临床意义。

【关键词】 乙型肝炎病毒；脱氧核糖核酸；定量检测；血清学标志物

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.03.016

HBV是诱发病毒性感染的最主要病原， 而我国在世界范围内是一定肝炎病毒感染率相对较高的国家之一， 大约2亿左右人口感染乙型肝炎病毒， 因而其引发原发性肝癌的危险系数也大幅度增加。所以， 防治乙型肝炎病毒感染一向是我国控制传染病的首要问题[1]。但是， 乙型肝炎病毒血清学标志物无法满足医生判断患者病情和评估抗病毒药物的临床疗效[2]。因此本次研究中， 选取2014年1月～2015年1月本院收治的100例乙型肝炎血清标志物阳性患者作为研究组， 同期选取22例正常健康人作为对照组， 运用微板核酸杂交技术对其进行HBV-DNA PCR的定量检测， 分析乙型肝炎病毒DNA定量检测与临床的关系， 现报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取2014年1月～2015年1月本院收治的乙型肝炎血清标志物阳性患者100例作为研究组， 其中男55例， 女45例， 年龄26～74岁， 平均年龄（58.43±6.34）岁；同期选择22例正常健康人作为对照组， 其经检查均为肝功能正常、HBV血清学标志物阴性者， 其中男13例， 女9例， 年龄26～73例， 平均年龄（58.23±6.04）岁。两组年龄、性别等一般资料比较差异均无统计学意义（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 试剂与仪器 试剂：上海浩源生物科技有限公司所提供的HBV微板核酸杂交定量检查试剂盒， 上海科华公司所提供的HBV血清学标志物检测试剂盒；仪器：英国TECHNE-GEN IUS PCR扩增仪， 奥地利生产的SLT-SPECTRA型酶标仪。

1. 3 检测方法 试剂准备：将PCR主反应液、稀释液和裂解液进行分装处理；标本制备：在50 μl裂解液中混入50 μl标本， 并在37℃的保温箱中进行1 h的保温处理， 并置入100 μl中和液， 再使用样品稀释液A予以稀释， 使之成为样品原液， 再使用样品稀释液B对样品原液进行稀释， 并取稀释后样品15 μl， 将其置入主反应液中， 再加入50 μl的石蜡油。标本处理完毕后进行扩增与杂交， 并使用TMB系统对杂交后的标本进行显色处理， 使用酶标仪获取读数， 并予以定量计算。

1. 4 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数 ± 标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

所有研究对象依据血清学标志物可分为五组， HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性患者的HBV-DNA阳性率远高于其他组患者， 比较差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

3 讨论

HBV血清标志物检查是最早应用于临床的检测方法之一， 其在判断HBV复制和诊断HBV感染情况上曾发挥较大作用[3]。然而， 因为病毒变异以及集体对于免疫应答不同等原因， HBV血清标志物检查指标已经无法准确反映乙型肝炎病毒全貌[4]。而患者血清中HBV-DNA定量检测则能准确反映患者血清内HBV-DNA复制情况， 且逐渐成为HBV治疗的临床疗效检测指标[5]。因此， 分析HBV血清标志物与HBV-DNA的定量结果， 对于乙型肝炎诊断和抗HBV药物的疗效判定提供重要依据。

本组研究结果显示， HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性组为乙肝病毒感染期标志， 该组患者的HBV-DNA检出率为94.6%， 其DNA的拷贝数是（4.2±0.6）×107 copies/ml， 可见该组患者的乙肝病毒复制的活跃性最高， 此类型患者的传染性最强。HBsAg、抗-HBe、抗-HBc组是乙肝病毒长期携带标准， 其HBV-DNA含量拷贝数是（7.5±2.9）×105 copies/ml， 提示其病毒复制仍然比较活跃。HBsAg、抗-HBc阳性组患者的DNA拷贝数为（6.3±2.1）×105 copies/ml， 明显低于HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性组， 可见其病毒复制水平相对较低， 且传染性也比较弱。目前认为， 其为HBV感染恢复期。

综上所述， 乙肝血清学标志物作为是否存在乙肝病毒感染的检测无法正确反映患者机体中乙肝病毒复制情况， 但HBV-DNA定量检测， 对于评估乙型肝炎病毒感染进展和抗病毒药物疗效有重要的临床意义， 其在乙型肝炎治疗方案的选择与疗效判定方面有广泛应用前景。

参考文献

[1] 杨阳， 黄鑫， 崔智威， 等. 乙型肝炎病毒DNA定量检测室内质控品的制备及应用研究. 医学信息， 2015， 28（4）：330-331.

[2] 金怡， 魏飞力， 马丽娜， 等. 荧光定量聚合酶链反应和直接测序法检测乙型肝炎病毒逆转录区耐药变异的比较. 中华肝脏病杂志， 2010， 18（9）：641-642.

[3] 鞠莹， 高彦欣， 赵汝钦 . 核苷（酸）类似物治疗慢性乙型肝炎的全程优化策略. 国际流行病学传染病学杂志， 2012， 39（5）：339-341.

[4] 曹季军， 吕心路， 许爱萍， 等. 乙型肝炎病毒DNA定量检测临界室内质控品的制备与初步应用.检验医学与临床， 2011（22）： 2771-2772.

[5] 王泽， 唐景峰. 乙型肝炎病毒阿德福韦酯耐药多重荧光聚合酶链反应检测方法的建立及临床应用.实用医技杂志， 2015（3）： 240-245.

[收稿日期：2015-06-09]