弥漫大B细胞淋巴瘤MYD88 L265P突变研究进展

余思思综述， 黄建鸣， 张智慧，△审校

(1．西南医科大学， 四川 泸州 646000； 2．四川省肿瘤医院， 成都 610041)

弥漫大B细胞淋巴瘤MYD88 L265P突变研究进展

余思思1综述， 黄建鸣2， 张智慧1，2△审校

(1．西南医科大学， 四川 泸州 646000； 2．四川省肿瘤医院， 成都 610041)

髓样分化因子88(myeloid differentiation factor，MYD88) 是细胞质里一种可溶性衔接蛋白，属于Toll样受体(Toll-like receptors，TLR)/白介素-1受体(interleukin- 1 receptor，IL- 1R)家族和死亡结构域(death domain，DD)家族成员，介导大多数Toll样受体、白介素-1受体、白介素-18受体细胞信号传导。近年来在多种B细胞肿瘤中发现有功能活化的MYD88 L265P基因突变，这种突变导致下游细胞信号通路的异常激活，与肿瘤发生发展密切相关。本文对MYD88 L265P突变在弥漫大B细胞淋巴瘤的发生发展、预后及治疗的作用进行了综述。

MYD88 L265P突变； 信号通路； 弥漫大B细胞淋巴瘤； Toll样受体

弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma,NHL)最常见的一种类型，其发病率占NHL的31%～34%，在中国DLBCL占NHL的45.8%及所有淋巴瘤的40.1%[1]。好发于中老年男性，也可见于儿童，中位发病年龄>60岁。根据基因表达模式的不同将DLBCL分为生发中心B细胞样淋巴瘤(GCB)、活化B细胞样淋巴瘤(ABC)和原发纵隔弥漫大B细胞淋巴瘤(PMBL)[2]。目前临床上DLBCL的一线治疗主要采用以蒽环类化疗药物为基础的联合免疫化疗方案，但研究显示，同样使用R-CHOP方案治疗，GCB型DLBCL具有更长的总生存期，ABC型预后较差，临床总有效率不到40%[3]。因此，从肿瘤分子生物学及细胞遗传学街门主面进一步探寻肿瘤发生、发展、免疫逃逸及耐药的机制，寻找更能反映肿瘤预后的预测指标，指导临床决策，为DLBCL的治疗提供新的治疗靶点及思路已成为目前研究的重点。近年来，随着全外显子测序和深度测序等高通量技术的发展，人们对DLBCL的发病机制和疾病易感性的认识更加深入。有研究发现，在多种B细胞肿瘤中有功能活化的髓样分化因子88(myeloid differentiation factor，MYD88) L265P基因突变(即MYD88编码序列第794位碱基发生T向C突变，导致MYD88蛋白编码区第265位的亮氨酸错义突变为脯氨酸)，这种突变导致信号通路的异常激活，提示MYD88的异常可能与DLBCL的发生、发展及预后有关[4]。

1 MYD88的分子结构与功能

MYD88是细胞质里一种可溶性衔接蛋白，相对分子量为3.5×104，属于Toll样受体(Toll-like receptors，TLR)/白介素-1受体(interleukin-1 receptor，IL- 1R)家族和死亡结构域家族成员，介导多数TLR、IL- 1R、白介素-18受体(interleukin- 18 receptor， IL- 18R)细胞信号传导。MYD88包含三个功能区域，分别是两个特殊的结构域TIR区域(Toll/IL- 1 receptor，TIR)、DD(death domain，DD)和一个中间结构域(intermediate domain，ID)，C端带有与TLR分子胞内段相同的TIR结构域，约有130个氨基酸，通过同型相互作用与TLR/IL- 1R相接，激活核因子- κB(NF- κB)、丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivated protein kinases，MAPK)等信号通路，向胞内传递信号，N端是DD，约有90个氨基酸，带有DD的信号分子，参与凋亡相关的信号通路，通过DD招募、结合并活化其他带有DD的分子，启动相关信号传导[5-7]。ID可以与白细胞介素-1受体相关激酶(interleukin- 1 receptor-associated kinase，IRAK)相互作用。对MYD88进行缺失突变的研究显示，只有MYD88的DD序列和中间区同时被表达才能激活NF- κB[8]。

2 MYD88依赖的信号转导通路

MYD88能够承上启下地传导激活信号，导致下游多种转录因子的激活，从而促进炎性细胞因子和其他机体防御蛋白的转录，在人体免疫反应中发挥重要作用[9]。细胞中大多数MYD88通过与β肌动蛋白结合，以一种非活性形式存在于细胞骨架中。静息状态下，IRAK- 1与MYD88调节蛋白-Toll相关蛋白Tollip结合而保持一定的稳定性[10]。经配体刺激后，肌动蛋白重排，MYD88被释放至细胞质中，MYD88的C端TIR结构域与受体结合，N端的DD结构域募集IRAK- 4，并且促进IRAK- 4介导的IRAK- 1的磷酸化，从而降低IRAK- 1与Tollip的亲和力，转而同MYD88结合[11]。高磷酸化的IRAK- 1进入胞质募集可溶性TNF受体相关因子6(TNF-receptor-associated factor 6，TRAF- 6)后一起发生进一步磷酸化，并与MYD88解离，与此同时，Ubc13/UEVlA介导TRAF- 6自身第63位的赖氨酸发生泛素化。泛素化的TRAF- 6在TAK- 1结合蛋白- 1(TAK- 1 binding protein- 1，TAB- 1)和TAB- 2(TAK- 1 binding protein- 2)的介导下与MAP3K家族成员TGF-β激活激酶-1(TGF- β-activated kinase- 1，TAK- 1)结合并激活TAK- 1。活化的TAK- 1分别使MAPK和IKB激酶(IKB kinase，IKK)复合物磷酸化，导致两个不同信号途径的激活[12-14]。 一种途径：通过激活MAPKs，如p38和c-Jun氨基末端激酶(JNK)，从而活化转录因子激活蛋白-1(activator protein- 1，AP- 1)，激活MAPK信号通路[15]。另一途径：激活的TAK1/TAB复合物，增强IKK复合物的活性，进一步诱导NF-κB抑制蛋白(NF-κB inhibitor protein，IKB)的磷酸化及后续降解，最终导致转录因子NF-κB的激活[16]。也有研究发现，信号转导接头蛋白2(signal- transducing adaptor protein- 2，STAP- 2)可以与 MYD88 和IKK结合，不通过IRAK- 1和TRAF- 6就可以激活NF- κB[17]。MYD88除激活NF- κB及MAPK通路外，位于细胞浆内体样(endosome)结构中的TLR- 7和 TLR- 9还可通过MYD88经干扰素调节因子- 7(IFN regulatory factor- 7，IRF- 7)介导I型干扰素的产生[18-19]，导致NF- κB信号通路的持续激活及放大。激活的NF- κB和MAPK信号通路可促进炎性因子如IL- 6、IL- 10产生，导致机体免疫抑制，从而促进肿瘤细胞免疫逃逸。此外，IL- 6、IL- 10还将进一步导致Janus蛋白酪氨酸激酶- 信号转导和转录激活子3(JAK- STAT3)信号通路的激活，诱导细胞因子的自分泌和旁分泌信号促进肿瘤细胞的生长[20]。

3 MYD88 L265P突变与DLBCL

DLBCL是一组高度异质性疾病，其临床特征及预后不尽相同。同样使用R- CHOP方案治疗， ABC型预后较差，GCB型具有更长的总生存期。研究认为NF- κB信号通路的持续过度激活是ABC型弥漫大B细胞淋巴瘤的特征[21]。近年来有研究发现，在约90%的淋巴浆细胞淋巴瘤/华氏巨球蛋白血症和39%的ABC型弥漫大B细胞淋巴瘤患者中存在MYD88基因的获得性突变，其中位于TIR域的L265P突变发生率最高，约为29%[22]。进一步研究显示，此突变位点正好处于MYD88的TIR结构域。这种功能活化型突变可引发白介素- 1受体相关激酶介导的NF- κB、MAPK及JAK- STAT3信号途径的持续激活、放大，促进细胞恶性增殖，逃脱细胞周期抑制，阻滞细胞分化成熟，导致肿瘤形成。Ngo等通过功能研究证实携带MYD88 L265P突变的ABC型DLBCL在敲除IRAK- 4后，生长受限，而引入野生型IRAK- 4后生长受限得到纠正，但对失活型IRAK- 4无效，IRAK- 4抑制剂可致携带MYD88 L265P突变的 ABC 型DLBCL细胞株死亡，对携带野生型MYD88的GCB型DLBCL及多发性骨髓瘤细胞株无作用，提示MYD88 介导的促细胞生长作用有赖于IRAK- 4[16, 22]。此外，MYD88介导的TLR信号通路激活促炎细胞因子和Ⅰ型干扰素，不仅能控制先天性免疫反应，还可直接影响获得性免疫反应[23]。异常激活的信号通路导致肿瘤微环境中一系列炎性因子和细胞因子，如转化生长因子- β(transforming growth factor- β,TGF- β)、吲哚胺2,3双加氧酶(indoleamine2,3- dioxygenase，IDO)、白介素- 10(Interleukin- 10，IL- 10)的产生和释放，导致机体形成免疫抑制，促进肿瘤免疫逃逸[24]。弥漫大B细胞淋巴瘤患者使用标准方案R- CHOP治疗后仍有部分病人预后较差，分析其原因可能与肿瘤免疫逃逸及美罗华免疫耐受有关[25]。

MYD88与肿瘤的发生有着密切关系，因此，越来越多的学者开始着眼于研究MYD88 L265P突变与DLBCL发生、发展及预后的关系。Ngo等利用RNA干扰及高通量mRNA测序技术检测382例淋巴瘤患者标本，发现约9%的胃粘膜组织相关淋巴瘤、 5%的伯基特淋巴瘤以及约29%的ABC型和6%的GCB型弥漫大B细胞淋巴瘤存在MYD88 L265P突变，而在其他类型的淋巴瘤中却很少出现[22]。Staiger等人利用等位基因特异性PCR(allele- specific polymerase chain reaction AS- PCR)技术对104例DLBCL石蜡样本进行检测，发现有10例患者为MYD88 L265P突变，其中7例为ABC型，3例为GCB型[26]。值得注意的是，MYD88突变的发生情况根据肿瘤所在解剖位置的不同而有明显差异，Kraan等人检测了177例弥漫大B细胞淋巴瘤患者MYD88 L265P的突变情况，结果显示，ABC与GCB亚型突变率分别为32.5%与9.5%，且突变率与肿瘤原发部位的不同有着明显差异，在原发中枢神经系统及睾丸的DLBCL突变率较高，分别达75%及71%，而原发淋巴结内的DLBCL突变率仅17%[27]。Rossi等人的研究也得到了同样的结果，ABC型DLBCL在免疫特权的淋巴结外组织如中枢神经系统及睾丸，其突变率可高达50%～70%。以上研究表明，不同原发部位的弥漫大B细胞淋巴瘤其MYD88 L265P突变的差异性可能与淋巴瘤起源细胞保持组织特异性归巢的特性有关，免疫特权结外组织具有免疫屏障保护作用而有利于肿瘤免疫逃逸[28-29]。2011年，Manuel 等通过双相PCR技术及全外显子测序对14例原发中枢神经系统的DLBCL进行检测发现，7例存在MYD88基因突变，其中5例为功能活化性的L265P突变，突变率达71%，另外两例分别为无义的L103L突变及Q143E突变，对于Q143E突变对MYD88功能的影响目前尚不清楚[30]。2012年韩国研究者通过免疫组织化学对124例DLBCL标本进行检测，发现其中48例有MYD88 蛋白高表达，阳性率38.7%，且蛋白表达情况与年龄及肿瘤复发相关，单变量分析显示MYD88高表达与non- GCB型及较短的无疾病生存期DFS有关，是缩短DFS的独立影响因素。通过PCR及直接DNA测序发现在这124例中有8例携带有MYD88 L265P突变，突变率6.5%，且其中7例为ABC型，但MYD88蛋白的高表达与MYD88 L265P突变并无相关性[31]。此外，2014年另外两个研究也得出了类似结论，2014年，Leukemia的一项研究利用AS- PCR技术对175例DLBCL石蜡标本进行检测，发现175例中有17例MYD88 L265P突变，突变率10%，ABC型与GCB型DLBCL突变率分别为14%和6%，且在男性病人及原发结外组织病例中突变率较高，进一步分析显示MYD88突变与疾病无进展生存期及总生存期有相关性，是DLBCL免疫化疗独立的不良预后因素[32]。Pham- Ledard等利用实时定量等位基因特异性PCR及Sanger 测序对58例原发皮肤的弥漫大B细胞淋巴瘤腿型(PCLBCL- LT)进行检测，结果在58例中34例携带MYD88 L265P突变，突变率59%，结合临床及随访资料亦显示MYD88 L265P突变是此类淋巴瘤独立的不良预后因素[29]。众多研究表明，MYD88L265P突变与DLBCL的发生、发展有关，可作为评估疾病预后的指标。

4 MYD88在DLBCL治疗中的价值

MYD88作为TLR信号传导通路的关键分子， MYD88 L265P突变导致下游细胞信号通路的异常激活，与肿瘤发生发展密切相关。因而以MYD88为靶标可能成为B细胞肿瘤治疗的新途径。通过基因技术或者药理作用敲除MYD88本身或者其下游的IRAK1、IRAK4和TAK1等分子靶标以抑制NF- κB等下游信号通路传导，达到肿瘤治疗的目的[33]。目前直接针对MYD88的研究还较少，现有的研究主要是采用基因敲除技术研究其在信号途径中的作用。以MYD88分子TLR结构域BB环七肽为模板进行设计合成的MYD88抑制剂ST2825，能特异性抑制MYD88分子TIR域的同源二聚作用, 从而干扰IRAK- 1和IRAK- 4的募集，阻断IL- 1R/TLR信号，抑制NF- κB的转录激活和IL- 6的分泌，另外，ST2825能通过抑制B细胞的增殖及分化从而阻断TLR- 9信号途径[34-35]。其他合成肽的小分子抑制剂，例如苯丙- 1- 缬氨酰基吡咯烷(化合物4a)和Pephinh- MYD88，可靶向MYD88二聚体，阻断TLR同MYD88之间的作用，用于MYD88突变的淋巴瘤患者的治疗，但这些药物目前还未在大型临床试验中得到验证[20, 36]。IRAK- 1和IRAK- 4激酶抑制剂能明显抑制MYD88突变细胞系的活性，导致细胞株死亡。已有研究表明，BTK抑制剂拉铁尼伯对携带MYD88(L265P)突变的复发难治性华氏巨球蛋白血症具有治疗作用，进一步研究提示其可能对MYD88突变的DLBCL亦有作用[37]。

5 小 结

综上所述，MYD88 L265P突变可通过多种方式激活NF- κB、MAPK及JAK- STAT3等信号通路，促进细胞恶性增殖，阻滞细胞分化成熟，同时产生和释放一系列炎性因子及细胞因子，促进肿瘤免疫逃逸。MYD88L265P突变与DLBCL发生、发展及预后有着密切关系，是弥漫大B细胞淋巴瘤独立的不良预后因素，可用于疾病的预后评估，尤其对于原发结外的DLBCL患者。MYD88作为TLR信号传导通路的关键分子，目前已有多种以它为靶点的药物出现，但要用于临床还需大量研究来证明其可行性、安全性及有效性。

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[通讯作者] △张国楠，主任医师，博士研究生导师，E-mail:zhanggn@hotmail.com

[收稿日期] 2016- 01- 15 [修回日期] 2016- 03- 09

[作者简介] 余 娅(1990-)，女，湖北人，在读硕士研究生，研究方向：妇科肿瘤中西医结合治疗的基础与临床研究。

2015- 10- 27

2016- 02- 01

余思思(1989-)，女，四川德阳人，硕士研究生在读，主要从事恶性淋巴瘤临床诊疗及基础研究。

△张智慧，主任医师，硕士研究生导师，E-mail: 13881889739@139.com

R733；R730.231

A

10.3969/j.issn.1674- 0904.2016.02.013