高效液相色谱法同时测定肤白胶囊中梣酮和黄柏酮的含量

雍　菁

(南京市中医院，南京　210001)



高效液相色谱法同时测定肤白胶囊中梣酮和黄柏酮的含量

雍菁

(南京市中医院，南京210001)

摘要：目的建立高效液相色谱法同时测定肤白胶囊中梣酮和黄柏酮的含量。方法色谱柱为Waters Sunfire C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇-水(65∶35)；检测波长为236 nm；流速为1.0 mL·min-1；柱温为30 ℃。结果梣酮进样量在7.19～43.15 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为98.88%，RSD为1.0%；黄柏酮进样量在6.94～41.66 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为98.62%，RSD为1.2%。结论该方法准确、快速、稳定、方便，可以作为肤白胶囊中梣酮和黄柏酮的含量测定方法。

关键词：肤白胶囊；梣酮；黄柏酮；高效液相色谱法

肤白胶囊是由白鲜皮、地肤子、蝉蜕等五味中药组成的中药复方制剂，其功效为清热燥湿、祛风止痒，临床上用于治疗湿疹、疥癣、湿疮、热毒疮肿、皮肤瘙痒等症。处方中白鲜皮为芸香科植物白鲜DictamnusdasycarpusTurcz.的干燥根皮，性寒味苦，归脾、胃、膀胱经，具有清热燥湿、祛风解毒的功效[1]。白鲜皮主要含有白鲜碱、梣酮和黄柏酮等生物碱及内酯类活性物质，其中梣酮和黄柏酮具有抑菌、杀虫和广谱抗真菌作用[2]，对本方所治病症起主要作用，为本处方中君药。为了进一步有效控制肤白胶囊的质量，从而保证临床用药安全有效，本实验建立高效液相色谱法同时测定其中梣酮和黄柏酮的含量，该方法准确、快速、简便、稳定，可以作为测定肤白胶囊中梣酮和黄柏酮含量的方法。

1仪器与试药

1.1仪器沃特斯e2695高效液相色谱仪，Empower2 色谱工作站(美国沃特斯)；KQ301-DA超声仪(昆山市超声仪器有限公司)；分析天平(德国赛多利斯)。

1.2试药 梣酮对照品(中国食品药品检定研究院，批号200602，质量分数100%，供含量测定用)；黄柏酮对照品(中国食品药品检定研究院，批号201001，质量分数97.5%，供含量测定用)；甲醇；水。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱为Waters Sunfire C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇-水(65∶35)；检测波长为236 nm；流速为1 mL·min-1；柱温为30 ℃。

2.2溶液的制备混合对照品溶液的制备：精密称取梣酮对照品8.68 mg，置于50 mL的量瓶中，加甲醇使其溶解并定容至刻度，摇匀，制得每1 mL含梣酮0.173 6 mg的梣酮对照品溶液；精密称取黄柏酮对照品9.22 mg，置于50 mL量瓶中，加甲醇使其溶解并定容至刻度，摇匀，制得每1 mL含黄柏酮0.179 8 mg的黄柏酮对照品溶液。分别精密吸取梣酮对照品溶液和黄柏酮对照品溶液各10 mL，置于同一50 mL量瓶中，加甲醇定溶至刻度，制得每1 mL含梣酮、黄柏酮分别为34.72和35.96 μg的混合对照品溶液。

供试品溶液的制备：取本品内容物1 g，研细，精密称定，置于50 mL量瓶中，加甲醇40 mL，超声处理30 min，放冷，用甲醇定容，用0.45 μm微孔滤膜过滤，得供试品溶液。

阴性样品溶液的制备：按照肤白胶囊制备工艺阴性样品，按照供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液。

2.3系统适用性实验精密吸取上述溶液各10 μL进样，测定，供试品色谱中梣酮和黄柏酮的保留时间与混合对照品色谱一致，梣酮和黄柏酮的分离度均大于1.5，阴性样品色谱在梣酮和黄柏酮保留时间处没有干扰，见图1。本方法专属性强，理论塔板数以黄柏酮计不低于5 000。

图1HPLC图

A.对照品溶液；B.供试品溶液；C.阴性样品溶液；

1.梣酮2.黄柏酮

Fig.1 HPLC chromatograms

A.reference substance solution；B.sample solution；C.negative sample solution；

1.fraxinellone；2.obakunone

2.4标准曲线的制备分别吸取混合对照品1，2，4，6，8，10和12 μL进样，按照2.1 项下色谱条件测定，分别以梣酮和黄柏酮进样量为纵坐标(Y)，以对应的峰面积为横坐标(X)做线性回归。梣酮的标准曲线方程为Y=24 680.89X-6 996.61，r=0.999 7；黄柏酮的标准曲线方程为Y=5 578.45X-449.26，r=0.999 6。梣酮的线性范围为7.19～43.15 μg，黄柏酮的线性范围为6.94～41.66 μg。

2.5精密度实验精密吸取上述混合对照品溶液10 μL进样，连续进样6次，按照2.1项下色谱条件测定，分别以梣酮和黄柏酮峰面积计算相对标准偏差，RSD分别为0.83%和0.73%。结果表明，本实验精密度良好。

2.6重复性实验取批号为140616的样品内容物1 g，制备供试品溶液，测定，计算梣酮和黄柏酮含量的RSD分别1.2%和1.5%。结果表明，本实验重复性良好。

2.7稳定性实验取本品内容物1.0 g，精密称定，制备供试品溶液，分别在0，1，2，4，8，12和24 h吸取供试品溶液10 μL进样，测定，计算梣酮和黄柏酮含量的RSD分别1.6%和1.8%。结果表明，供试品溶液在24 h内稳定。

2.8回收率实验取批号为140615(已知梣酮为0.72 mg·g-1，黄柏酮为2.17 mg·g-1)的样品0.5 g，精密称定，分别加入梣酮0.347 2 mg和黄柏酮1.078 8 mg，制备供试品溶液，测定，回收率结果见表1。结果表明，本实验回收率符合实验要求。

表1回收率实验结果

Tab.1Results of the recovery test

名称称样量/g原有量/mg加入量/mg测得量/mg回收率/%平均值/%RSD/%梣酮0.51120.36810.34720.714299.6898.881.00.49180.35410.34720.700399.710.50230.36170.34720.701697.900.51760.37270.34720.711197.470.51140.36820.34720.714599.740.50080.36060.34720.703698.79黄柏酮0.51121.10931.07882.168198.1598.621.20.49181.06721.07882.136099.070.50231.09001.07882.139897.310.51761.12321.07882.181298.070.51141.10971.07882.1965100.740.50081.08671.07882.147898.36

2.9样品测定按照2.2项下供试品溶液制备方法制备3批(批号分别为140616，140618，140704)供试品溶液，精密吸取10 μL测定，计算梣酮和黄柏酮含量。结果显示，批号为140616，140618，140704的样品中梣酮含量分别为0.71，0.69和0.74 mg·g-1，平均含量为0.71 mg·g-1；黄柏酮含量分别为2.10，2.09和2.16 mg·g-1，平均含量为2.13 mg·g-1。

3讨论

3.1供试液制备方法的选择本实验通过考察比较回流提取和超声提取对梣酮和黄柏酮含量的影响，证明二者没有显著性差异，超声提取更方便。分别测定超声提取10，20，30，40和50 min时梣酮和黄柏酮的含量，超声30 min后二者的含量均不再显著性增加，因此选择超声时间为30 min。通过比较体积分数为30%，50%，70%和100%的甲醇超声提取结果，不同体积分数甲醇超声提取对梣酮和黄柏酮含量没有显著性影响，而体积分数为100%的甲醇直接超声提取杂质峰最少，因此选体积分数为100%的甲醇直接超声提取。

3.2流动相的选择通过比较甲醇-水[3-9]不同比例下梣酮和黄柏酮的分离度和保留时间，当甲醇-水(65∶35)时，梣酮和黄柏酮分离度良好，保留时间适当，没有杂质峰干扰，因此选择甲醇-水(65∶35)为流动相。通过二极管阵列检测器全波长扫描，在波长为236 nm时，梣酮和黄柏酮均有较好的响应值，色谱峰形良好，故选择236 nm为检测波长。

3.3小结本实验建立高效液相色谱法同时测定肤白胶囊中梣酮和黄柏酮的含量，精密度、重复性、稳定性和回收率均良好，能够在肤白胶囊质量标准中作为梣酮和黄柏酮含量测定的方法。

参考文献：

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Determination of fraxinellone and obacunone in Fubai Capsules by HPLC

YONG Jing(Nanjing Hospital of Traditional Chinese Medicine，Nanjing 210001，China)

Abstract:ObjectiveTo develop an HPLC for determining fraxinellone and obacunone in Fubai Capsules. MethodsThe column was Waters Sunfire C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，the mobile phase was methanol-water(65∶35)，the detection wavelength was 236 nm，the flow rate was 1.0 mL·min-1，and the temperature was 30 ℃. ResultsFraxinellone showed a good linear relationship from 7.19 to 43.15 μg，and the average recovery was 98.9% ，with RSD 1.0%；obacunone showed a good linear relationship from 6.94 to 41.66 μg，and the average recovery was 98.6%，with RSD 1.2%. ConclusionThe method was accurate，fast，reliable and convenient，and can be used for determining fraxinellone and obacunone in Fubai Capsules.

Key words:Fubai Capsules；fraxinellone；obacunone；HPLC

收稿日期：(2015-04-20)

中图分类号：R927.2

文献标志码：A

文章编号：1004-2407(2016)01-0042-04

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.01.014