联合检测VEGF、OPN对原发性肝癌术后复发转移及预后的意义 *

联合检测VEGF、OPN对原发性肝癌术后复发转移及预后的意义*

*基金项目：湖北省自然科学基金项目(2012FFC116)

王代宏，王伟，王芳元

(咸宁市中心医院肝胆胰外科，湖北 咸宁 437100)

摘要：目的 探讨联合检测血清血管内皮生长因子(VEGF)和骨桥蛋白(OPN)的表达水平在预测原发性肝细胞癌(HCC)患者术后复发转移以及生存中的临床价值。方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测54例HCC患者术前外周血中VEGF和OPN的浓度，并与肝癌临床病理特征做相关分析，分析其表达水平与患者术后复发转移及预后的关系。结果 HCC复发患者的外周血中VEGF和OPN表达水平明显高于无复发患者(P<0.01)。VEGF和OPN表达水平与肿瘤分化程度、包膜是否完整、血管侵犯、肝癌转移复发呈显著相关性(P<0.05)；VEGF和OPN高表达组患者的复发率较低表达组患者明显增加，平均生存时间和无瘤生存时间明显缩短，VEGF和OPN两者水平均高和均低的患者术后2年复发率分别为81.8%和26.3%(P<0.01)，2年生存率分别为36.4%和78.9%(P<0.01)，2年无瘤生存率分别为9.1%和68.4%(P<0.01)。结论 外周血中VEGF和OPN与肝癌患者术后复发转移及预后有关，联合检测外周血中VEGF和OPN的浓度可以预测复发转移及预后风险的患者。

关键词：原发性肝癌；复发转移；预后；血管内皮生长因子；骨桥蛋白

中图分类号：R735.7

文献标识码：A

文章编号：2095-4646(2015)04-0280-04

ABSTRACT：Objective To investigate the predictive value of preoperative serum levels of vascular endothelial growth factor (VEGF) and osteopontin (OPN) for metastasis，recurrence and prognosis of patients after resection of hepatocellular carcinoma (HCC). Methods A total of 54 patients received liver resection for HCC from January 2010 to November 2012 in our institute were enrolled in this study.The preoperative serum VEGF and OPN levels were detected by ELISA，the relationship between VEGF,OPN expression and the pathological characteristics，the recurrence and prognosis of HCC was studied.Results The expression of OPN and VEGF in HCC was related to tumor differentiation，tumor surrounding integrity，vaseular invasion，early recurrence and metastasis(P<0.05).A higher VEGF and OPN levels were found in plasma of patients with recurrence during the follow-up time than those of patientswithout recurrence.A significant difference of overall survival (OS)and disease free survival(DFS) was found in different subgroups with higher or lower level of VEGF，and a similar situation was found in patients with high or OPN level.The 2-year recurrence rate of the patients with higher and lower levels of both VEGF and OPN were 81.8% and 26.3% (P<0.01)，respectively，the 2-year OS rate was 36.4% and 78.9%，and the 2-year DFS rate was 9.1% and 68.4%，respectively (P<0.01).Conclusion The evaluation of preoperative serum VEGF or OPN levels may be helpful to predict the recurrence and prognosis of HCC patients in advance.The assessment of VEGF level in combination with OPN could screen patients with different potentials of HCC recurrence and different outcomes more accurately than VEGF or OPN alone.

收稿日期：(2015-02-20)

The Recurrent and Prognostic Significance of Preoperative

Serum Levels of VEGF and OPN for Patients after

Resection with Hepatocellular Carcinoma

WANG Dai-hong，WANG Wei， WANG Fang-yuan

(DepartmentofGeneralSurgery，XianningCentralHospital，XianningHubei437100，China)

KEY WORDS：Hepatocellular carcinoma;Recurrence;Prognosis;Vascular endothelial growth factor;Osteopontin

原发性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)术后复发转移是治疗失败的主要原因，寻求早期预测复发和预后的有效指标是延长生存期的重要手段之一。甲胎蛋白(AFP)是诊断肝癌术后复发最常用的检测标志物，但仍有少部份的肝癌患者血清AFP呈阴性或低浓度，采取多种肿瘤标志物联合检测可以提高诊断率。研究表明血管内皮生长因子(VEGF)是一种特异促进血管内皮细胞增殖的细胞因子，它的高表达与肿瘤的生长、转移有密切关系[1]；骨桥蛋白(OPN)是一种分泌性磷酸糖蛋白，在肿瘤发生、发展、侵袭、转移及血管生成等病理过程中起作用[2]。我们联合检测术前患者血液VEGF和OPN含量，并与肝癌临床病理特征做相关分析，探讨影响HCC术后复发转移的相关危险因素及联合检测对肝癌术后复发转移的临床应用意义。

1资料与方法

1.1临床资料收集本院普外科2010年1月至2012年11月间实施肝癌根治性切除术并经术后病理诊断证实为肝细胞癌且有完整随访资料的患者，术前均未接受过放化疗、中药及生物免疫治疗等。排除标准：围手术期出现严重的并发症或死亡的病例、胆管细胞癌患者；随访中因非肝癌因素死亡的病例。共入组54例，随访至2014年11月，随访时间24~47月。其中男45例，女9例，年龄19～71岁(中位年龄52.6岁)。Child A级47例，B级7例。肝切除术式为左右半肝切除29例、肝段切除7例、左三叶切除1例、局部肝切除共17例。术后出现复发转移的时间最短4个月，最长47个月。随访期间内26例肝内复发，2例肺转移，1例骨转移，25例无瘤生存。

1.2酶联免疫法(ELISA)测定血清VEGF及OPN浓度所有患者术前抽取肘静脉血6ml，置于无菌促凝管内，离心后取上清分装于EP管，置于-70℃低温冰箱保存备用。采用人VEGFELISA定量试剂盒(美国R&D公司)及OPNELISA试剂盒(深圳晶美生物工程公司)，实验过程按照试剂盒说明进行，标准品均双孔检测，血清VEGF和OPN浓度直接从标准曲线查得。全部标本统一检测，每例标本共检测3次取加权平均值。操作者、收集标本及随访资料者遵循随机、双盲原则。

1.3统计学方法统计分析使用SPSS 16.5软件。计量资料的分析采用t检验；相关性分析使用双变量相关分析；采用Kaplan-Meier法进行生存分析。P<0.05认为差异有显著性意义。

2结果

2.1血清VEGF及OPN浓度和术后复发的关系随访期间29例复发组血清VEGF及血浆OPN浓度明显升高，与25例无复发组比较，两组间存在显著性差异(P<0.05)，见表1。

表1　血清VEGF及OPN浓度和术后复发的关系

与无复发组比较，*P<0.05

2.2影响肝癌转移复发危险因素的分析通过多因素相关分析VEGF、OPN与临床病理特征之间的关系,发现VEGF、OPN与患者的年龄、性别、HBV、肝硬化、肿瘤的大小、分级、是否多发无显著相关,与肿瘤分化程度、血管侵犯、包膜是否完整及肝癌复发转移呈显著相关(P<0.05)，见表2。

表2　VEGF、OPN与患者临床病理特征之间的关系

与相同病理特征的其他组比较，*P<0.05

2.3血清VEGF及OPN浓度与肝癌术后复发的关系将VEGF以400ng/L为界分为高(18例)、低浓度组(36例)；OPN以200ng/ml为界分为高(21例)、低浓度组(33例)，比较二者与术后复发的关系。结果显示,血清VEGF高浓度组患者的术后2年复发率明显高于低浓度组患者(P<0.05)；血浆OPN高浓度组患者的术后2年复发率也明显高于低浓度组患者(P<0.05)，见表3。

表3　血清VEGF及OPN浓度高浓度组和低浓度组患者术后2年复发率比较

与高浓度组比较,*P<0.05

2.4血清VEGF及OPN浓度与肝癌患者预后的关系比较VEGF和OPN高、低浓度组的2年总生存率和无瘤生存率，结果高浓度组明显低于低浓度组(P<0.05)，见表4、5。

表4　血清VEGF及血浆OPN高浓度组和低浓度组患者术后2年总生存率比较

与高浓度组比较,*P<0.05

表5　血清VEGF及血浆OPN高浓度组和低浓度组患者术后2年无瘤生存率比较

与高浓度组比较,*P<0.05，**P<0.01

2.5联合应用VEGF和OPN筛选高、低风险患者高浓度者(11例)与低浓度者(19例)的术后2年复发率分别为81.8%和26.3%(P<0.05)，2年生存率36.4%和78.9%(P<0.05)，平均生存时间分别为446d和762d(P<0.05)；2年无瘤生存率分别为9.1%和68.4%(P<0.05)，平均无瘤生存时间分别为213d和608d(P<0.05)(图1)。

X1：VEGF和OPN均呈低浓度患者；X2：VEGF和OPN均呈高浓度患者

图1VEGF和OPN联合检测预测肝癌术后患者总体生存曲线

3讨论

肝癌术后复发转移是一个多步骤、多环节的复杂过程，目前认为多种基因及其功能蛋白的异常表达以及细胞因子、血管因素等都参与了肝癌的复发转移，这些因素在其中相互作用，形成一个复杂的网络[3]。VEGF在肿瘤血管生长中起重要作用，通过与VEGF受体结合，引起血管增殖[4]。易述红等[5]认为术前VEGFmRNA阳性表达和术后持续的VEGFmRNA阳性可以有效地预测肝癌肝移植术后肿瘤复发转移。OPN通过促进细胞增殖、运动，影响细胞外基质，降低细胞黏附等促进肿瘤的侵袭、转移。肿瘤发生时OPN表达明显上调，其表达水平还与肿瘤的恶性程度、病理分期及预后相关[6]，因此可作为肿瘤潜在的诊断和预后的分子标志物。

本研究发现肿瘤复发组血清VEGF及OPN浓度较无复发组明显升高，同时对肝癌手术切除前血清VEGF及OPN浓度与术后复发风险做了分析，发现VEGF和OPN水平可预测肿瘤的复发，VEGF和OPN高浓度组复发率高于低浓度组，因此我们认为VEGF和OPN水平可以作为预测肝癌术后复发转移的潜在参考分子指标。通过对VEGF和OPN与肝癌临床病理特征及手术情况之间的分析发现，血清VEGF含量及OPN浓度与肝癌患者的年龄、性别、HBV、HCV、AFP、肝硬化史、家族史、肿瘤的大小、是否多发无显著相关，而与肿瘤分化程度、血管侵犯、包膜是否完整、肝癌早期复发转移呈显著相关。这些都提示OPN与VEGF在肝癌的早期复发转移中起着重要的作用，OPN有可能通过VEGF促进肿瘤的血管生成，并在肿瘤的早期复发转移中进一步发挥作用。

临床资料显示大HCC切除后复发转移率高于小HCC，但有的小HCC虽然切缘干净、包膜完整、无癌栓及肝内播散，却早期复发。本研究结果发现，虽然VEGF和OPN在大、小HCC患者血清中水平差异无显著性，但大HCC患者血清VEGF和OPN水平高于小HCC的趋势非常明显。这间接提示VEGF和OPN作为HCC术后复发转移预测指标有可能反映HCC侵袭转移的生物学行为。因此，术前外周血VEGF和OPN水平可能是一个较灵敏的HCC术后复发转移的预测指标。以单个指标分组来比较不同表达水平患者的生存预后，发现VEGF或OPN高表达组患者的术后生存时间(率)或无瘤生存时间(率)均明显低于相对应的低表达组患者，即VEGF和OPN都与患者术后生存或无瘤生存有关。

为进一步提高预测的准确性，本研究探索VEGF和OPN两者联合检测的预测模式，发现联合应用VEGF和OPN可以更加准确地区分复发风险及预后状况不同的患者。VEGF或OPN单独应用时，相应的高表达组患者和低表达组患者的2年复发率分别为83.3%、76.2%和38.9%、39.4%，2年生存率为38.9%、42.8%和75.0%、75.8%，2年无瘤生存率为22.2%、23.8%和58.3%、60.6%。而将VEGF和OPN联合应用后，相应的预期高风险患者和低风险患者的2年复发率为81.8%和26.3%，2年生存率为36.4%和78.9%，2年无瘤生存率为9.1%和68.4%，可以较为准确地筛选出具有较高复发及生存风险的患者，提示VEGF和OPN联合检测可进一步提高预测的准确性。

肝癌术后易于复发是肝癌的生物学特性之一，其早期复发是由多种因素决定的。本研究结果表明，外周血中VEGF和OPN水平与HCC患者术后复发和生存有关，两者联合检测可进一步提高预测效能。对于存在术后早期复发高危因素的患者，应加强随访，及早发现肿瘤的复发转移，以便提供再次治疗的机会，从而改善患者预后。

参考文献：

[1]颜廷启、易继林、杨志芳，等.CTGF和VEGF在肝癌中的表达及相关性研究[J].临床外科杂志，2009，17(6)：394

[2]钦伦秀.骨桥蛋白：一个值得关注的肝癌转移复发预测指标与干预靶点[J].中华肝脏病杂志，2011，19(4)：247

[3]刘景丰，林科灿，黄新辉.肝癌术后复发转移预测研究进展[J].外科理论与实践,2012，17(5)：417

[4]叶学忠，杨勇.NF-KBp65、VEGF在肝癌血管生成中的作用与相关性研究[J].临床外科杂志，2009，17(9)：598

[5]易述红，陈规划，陆敏强,等.VEGFmRNA在预测肝癌肝移植术后肿瘤复发和转移中的应用价值[J].中国普外基础与临床杂志，2006，13(5)：560

[6]陈荣新，叶胜龙，李涛,等.骨桥蛋白在不同转移潜能肝癌细胞系及肝癌组织中表达意义[J].中华肝胆外科杂志，2009，15(4)：279