阿托伐他汀对老年自身免疫性脑脊髓膜炎大鼠脑白质的保护作用

阿托伐他汀对老年自身免疫性脑脊髓膜炎大鼠脑白质的保护作用

杨挺嘉楚洪波1于慧玲2殷旭华2

(内蒙古医科大学附属医院神经内科,内蒙古呼和浩特010050)

摘要〔〕目的探讨阿托伐他汀对老年自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE)大鼠脑白质髓鞘碱性蛋白(MBP)和少突胶质细胞转录因子(OLIG)1蛋白表达的影响。方法取老年Wistar雄性大鼠80只，随机分为对照组、模型组、阿托伐他汀大剂量组(8 mg/kg组)和阿托伐他汀小剂量组(2 mg/kg组)，每组20只。采用新鲜豚鼠50%全脊髓匀浆液和完全弗氏佐剂(CFA)免疫制备EAE模型，免疫后第2天开始，模型组给予生理盐水灌胃，阿托伐他汀组给予阿托伐他汀不同剂量灌胃，持续灌胃21 d，于第22天处死，取脑干和脊髓待测。采用实时荧光定量和免疫组织化学染色检测各组脑干、脊髓中MBP和OLIG1的mRNA水平和蛋白阳性表达强度。结果与对照组比较，模型组MBP mRNA水平和蛋白阳性表达强度明显升高、OLIG1明显降低(P<0.01)；阿托伐他汀小剂量组MBP mRNA水平和蛋白阳性表达强度升高、OLIG1降低(P<0.01)；阿托伐他汀大剂量组MBP mRNA水平和蛋白阳性表达强度略升高、OLIG1略降低，无显著差异(P>0.05)，模型组、阿托伐他汀大、小剂量组差异显著(P<0.01)。结论阿托伐他汀能够通过下调MBP、上调OLIG1 mRNA水平和蛋白阳性表达强度，对EAE大鼠的脑白质髓鞘损伤具有保护作用，且大剂量作用优于小剂量。

关键词〔〕阿托伐他汀；自身免疫性脑脊髓膜炎；髓鞘碱性蛋白；少突胶质细胞转录因子1

中图分类号〔〕R392.11〔文献标识码〕A〔

基金项目：内蒙古自治区自然科学基金(No.2011MS1154)

通讯作者：殷旭华(1966-)，女，硕士，主任医师，主要从事神经免疫学研究。

1长春大学特教学院2内蒙古医科大学病理教研室

第一作者：杨挺嘉(1991-)，女，在读硕士，主要从事神经免疫学研究。

自身免疫性脑脊髓炎(EAE) 其主要病理特点是中枢神经系统白质炎性脱髓鞘，其病因及发病机制迄今不明〔1〕。髓鞘碱性蛋白(MBP)和少突胶质细胞转录因子(OLIG)1是调控髓鞘的两个重要蛋白〔2〕。本实验旨在探究阿托伐他汀对EAE大鼠脑白质髓鞘损伤的保护作用。

1资料与方法

1.1实验动物及分组吉林大学白求恩医学部实验动物中心Wistar雄性大鼠80只，鼠龄>18 w，平均体重(500±30)g，豚鼠10只，雌雄不限，平均体重(410±20)g，随机分为4组(n=20)：对照组、模型组、阿托伐他汀大剂量组(8 mg/kg组)和阿托伐他汀小剂量组(2 mg/kg组)。

1.2模型制备〔3〕及实验试剂除对照组，其他3组均采用新鲜豚鼠全脊髓和完全弗氏佐剂(CFA)免疫制备EAE模型，即新鲜豚鼠全脊髓与生理盐水制成50%匀浆液，加上等体积的CFA，按0.5 ml/只注射于大鼠四肢足垫皮下。阿托伐他汀(大连辉瑞制药有限公司, 生产批号为55837001)；CFA购于Sigma公司；MBP和OLIG1兔抗大鼠一抗及实时荧光定量试剂购于Santa Cruz和北京博奥森生物有限公司；DAB和SP9710试剂盒购于福州迈新生物有限公司。

1.3给药剂量及给药方式免疫后第2天开始，模型组给予生理盐水灌胃，阿托伐他汀组给予阿托伐他汀不同剂量灌胃(8 mg/kg组和2 mg/kg组)，持续治疗21 d，于第22天处死，取脑干和脊髓待测。

1.4各组脑干、脊髓中MBP和OLIG1蛋白阳性表达强度的检测10%的水合氯醛腹腔麻醉大鼠，取部分大鼠脑干、脊髓放入4%多聚甲醛液中固定、脱水、透明、浸蜡、包埋，然后切成3 μm的切片，进行免疫组织化学染色，染色结果通过Motic Images Advanced 3.2图像分析软件进行统计学分析，测定光密度值(OD值)；光密度值越大阳性表达越高，反之则越低。

1.5各组脑干、脊髓中MBP和OLIG1 mRNA水平的检测取部分大鼠脑干、脊髓冻存待测，采用实时荧光定量试剂盒检测，操作严格按照试剂盒步骤进行。

1.6统计学方法应用SPSS16.0统计学分析软件进行t检验。

2结果

与对照组比较，模型组MBP蛋白、mRNA表达强度明显升高、OLIG1蛋白和mRNA明显降低(P<0.01)；阿托伐他汀小剂量组MBP蛋白和mRNA表达强度升高、OLIG1蛋白和mRNA降低(P<0.01)；阿托伐他汀大剂量组MBP蛋白和mRNA表达强度略升高、OLIG1蛋白和mRNA略降低无显著差异(P>0.05)，模型组、阿托伐他汀大、小剂量组差异显著(P<0.01)，见表1。

表1　各组脑干和脊髓中MBP和OLIG1蛋白和mRNA表达比较

与对照组比较:1)P<0.01；与模型组比较:2)P<0.01；与阿托伐他汀小剂量组比较:3)P<0.01

3讨论

中枢神经系统脑白质由轴突、少突胶质细胞及由少突胶质细胞形成的髓鞘组成〔4〕。MBP是髓鞘的主要组成成分之一，是功能性的髓鞘结构蛋白，当髓鞘损伤时，MBP蛋白释放表达增高〔2〕。中枢神经系统的传导功能，需要神经纤维髓鞘化才能正常发挥；而髓鞘形成的过程由OLIG1调控〔5～7〕，本实验从形态学水平和分子生物学水平上反映阿托伐他汀能够下调MBP、上调OLIG1 mRNA水平和蛋白阳性表达强度，对EAE大鼠的脑白质炎性脱髓鞘具有保护作用，且大剂量作用优于小剂量，其作用机制有待于进一步探讨。

4参考文献

1金世杰,徐俊,黄榕,等.口服耐受防治大鼠实验性自身免疫性脑脊髓膜炎的实验研究〔J〕.岭南急诊医学杂志，2009；14(2)：84-6.

2Kessaris N, Pringle N, Richardson WD.Specification of CNS gliafrom neural stem cells in the embryonic neuroepithelium〔J〕.Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci,2008；363(1489)：71-85.

3徐玉, 刘瑞春, 王颖, 等.Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立〔J〕.脑与神经疾病杂志,2007；15(6)：415-7.

4Cao QL, Zhang YP, Howard RM,etal. Pluripotent stem cell sengrafted into the normal or lesioned adult rat spinal cord are restricted to a glial lineage〔J〕. Exp Neurol,2001；167(1):48-58.

5赵红, 高晓玉, 张拥波, 等.Olig家族调控脑白质损伤后神经修复的研究进展〔J〕.中华神经医学杂志,2009;8(2)：201-3.

6高晓玉,王得新,张拥波.脑缺血再灌注后Olig1、Nogo-A基因表达与白质损伤〔J〕.中华神经科杂志,2009;42(322)：808-12.

7吕合作,邹健,王艳霞,等. Olig1过表达对大鼠神经干细胞向少突胶质细胞分化的影响〔J〕.神经解剖学杂志,2010；26(2):201-5.

〔2015-05-19修回〕

(编辑苑云杰)