泰山野生黄荆不同部位总黄酮含量的测定*1

王　华　乔　磊　沙南南　田乐园　王明霞　曲晓兰

(泰山医学院药学院，山东 泰安　271016)

泰山野生黄荆不同部位总黄酮含量的测定*1

王华乔磊沙南南田乐园王明霞曲晓兰

(泰山医学院药学院，山东 泰安271016)

摘要：目的测定泰山野生黄荆不同部位中总黄酮的含量。 方法采用紫外分光光度法测定总黄酮含量。结果泰山野生黄荆的叶、茎、果实中总黄酮含量分别为：7.82%、1.41%、4.55%。结论泰山野生黄荆不同部位中总黄酮的含量有明显差异。

关键词：泰山野生黄荆；总黄酮；含量测定

黄荆 (Vitex negundo L.)是马鞭草科牡荆属植物，别名黄荆条、布荆、五指柑、土常山、紫荆草等[1]。黄荆在我国有着悠久的用药历史，《本草纲目》《图经本草》《千金方》等古医书均有记载。现代医学研究表明黄荆具有祛风、除痰、行气、止痛等作用[1]。黄荆在泰山地区资源丰富、分布广泛。目前，对于黄荆化学成分的研究还处于初步阶段，关于黄荆不同部位化学成分的研究尚未见报道。笔者采用紫外分光光度法，测定泰山野生黄荆叶、茎、果实不同部位中总黄酮的含量，以期能够为泰山野生黄荆的开发利用和质量评价提供科学依据。

1仪器与试药

1.1仪器

S-54型紫外分光光度计(上海棱光技术有限公司)； FC104电子分析天平；RE-52A旋转蒸发仪； SHB-III循环水式多用真空泵；FW-135 粉碎机。

1.2试剂和药品

芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号:100080-201008)；其他试剂均为分析醇。样品采自泰山，经泰山医学院药学院曲晓兰老师鉴定为马鞭草科牡荆属植物黄荆(Vitex negundo L.)的叶、茎、果实。

2方法与结果

2.1溶液制备

2.1.1芦丁对照品溶液准确称取105 ℃干燥至恒重的芦丁对照品0.0115 g置于50 ml容量瓶中，加入60%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为230 μg/ml的标准品溶液，避光保存。

2.1.2供试品溶液称取约3.0 g泰山野生黄荆不同部位(叶、茎、果实)干燥的粉末于500 ml圆底烧瓶中，加入60 ml 60%乙醇，85 ℃水浴加热回流提取30 min，减压抽滤，滤渣再用60 ml 60%乙醇85 ℃水浴加热回流提取30 min，再次减压抽滤，合并两次滤液。取50 ml滤液转移至100 ml容量瓶，用60%乙醇定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.1.35%亚硝酸钠溶液称取5.0 g亚硝酸钠置于100 ml容量瓶中，加入适量蒸馏水溶解，定容，摇匀，避光保存。

2.1.410%硝酸铝溶液 称取10.0 g硝酸铝置于25 ml容量瓶中，加入适量蒸馏水溶解，定容，摇匀，避光保存。

2.1.54%氢氧化钠溶液 称取4.0 g氢氧化钠置于100 ml容量瓶中，加入适量蒸馏水溶解，定容，摇匀，避光保存。

2.2总黄酮测定方法的建立

2.2.1最大波长的确定准确吸取芦丁标准液1.0 ml置于25 ml容量瓶中加入1.0 ml 5%亚硝酸钠，放置5 min，再加入1.0 ml 10%硝酸铝，放置5 min，然后加入10.0 ml 4%氢氧化钠，最后用60%乙醇定容至刻度，摇匀，放置20 min，以空白为对照，于400～700 nm波段扫描，测定芦丁的吸光度。经扫描最终确定波长为520 nm。

2.2.2方法学考察

2.2.2.1线性关系考察分别准确吸取芦丁标准液0.0.1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml于25 ml容量瓶中，分别加入1.0 ml 5%亚硝酸钠，放置5 min，再加入1.0 ml10%硝酸铝，放置5 min，然后加入10.0 ml 4%氢氧化钠，最后用60%乙醇定容至刻度，摇匀，放置20 min，分别测定吸光度值，以对照品浓度(C)为横坐标，吸光度值(A)为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程A=0.0086C+0.0011(R=0.9993)。表明芦丁标准品在9.20~55.20 μg/ml与吸光度呈良好的线性关系。

2.2.2.2精密度试验精密称取泰山野生黄荆干燥的果实粉末3.0033g按“2.1.2”中方法制备成供试品溶液，并测定吸光度值，求得RSD为0.85%，表明本法精密度良好。

2.2.2.3重现性试验称取6份同批泰山野生黄荆干燥的果实粉末各3.0g按“2.1.2”中方法制备成供试品溶液，并测定吸光度值，测得各吸光度的RSD值为1.72%，表明试验的重现性良好。

2.2.2.4稳定性试验取供试液2 ml，分别置于25.0 ml容量瓶中，按“2.2.2.1”方法加入显色剂显色后，每间隔30 min测定一次吸光度，连续6 h考察其稳定性，结果RSD为1.94%(n=5)，表明供试品在 6 h 内基本稳定。

2.2.2.5加样回收率试验准确称取五份已知含量的野生泰山野生黄荆的干燥果实粉末供试品溶液每份1.0 ml置于25.0 ml容量瓶中，分别加入1.0 ml芦丁标准品溶液，并测定吸光度值，计算平均回收率及RSD值。测得平均回收率为98.95%，RSD值为1.55%(n=5)。其结果见表1。

表1　加样回收率试验结果

2.3样品测定

取制备好的供试品溶液，依标准曲线法在520nm下测定吸光度，再由标准曲线计算样品中总黄酮的含量。泰山野生黄荆叶、茎、果实中总黄酮含量分别为7.82%、1.41%、4.55%，结果见表2。

表2　泰山野生黄荆叶、茎、果实黄酮含量测定

3讨论

本实验采用了紫外分光光度计法测定了泰山野生黄荆叶、茎、果实中总黄酮的含量，含量高低顺序为: 叶7.82%> 果实4.55%> 茎1.41%。该实验方法操作简单，结果稳定、重现性好。

黄荆在泰山地区的分布很广，野生资源极为丰富。但是国内对其不同部位有效成分的研究还较少。目前很多研究表明，黄酮类物质具有降血压、降血糖和抗氧化[2-5]等多活性。因此为了充分利用野生植物资源，提高其药用价值，本实验以黄荆中黄酮类成分为指标，考察不同部位黄酮类成分的分布情况。结果表明：不同部位的总黄酮含量有明显的差别，叶中黄酮类成分含量最高。本实验为科学开发利用黄荆提供了实验依据，但本实验只针对不同部位中的黄酮类成分进行了考察，对于黄荆中的其它类成分以及其他因素对黄酮类成分的影响还有待进一步的研究。

参考文献：

[1]张新权,梁毅莉.谈黄荆的开发利用价值[J].现代农业科技,2009(22):128-129.

[2]戴春燕,余海军.海南臭黄荆不同部位总黄酮含量的测定[J].安徽农业科学,2010，38(31):17451-17452.

[3]石会丽,冯一凡,刘珍,等.羊红膻药材中总黄酮含量测定方法研究[J].西北药学杂志,2009,24(1):18-19.

[4]舒尊哲,姜秀娟,孟庆艳,等.大白刺不同部位中总黄酮含量的测定[J].安徽农业科学,2010，38(6):2936-2948.

[5]马陶陶,张群林,李俊.中药总黄酮的含量测定方法[J].安徽医药,2007,11(11):1030-1032．

基金项目：泰安市科技局大学生科技创新计划(编号：2012D2049)。

作者简介：王华(1992—)，女，河北人，2011级中药学本科专业学生。

通讯作者：曲晓兰(1980—)，quxiaolan@126.com,Tel:13954813004.

中图分类号：R932

文献标识码：A

文章编号：1004-7115(2015)04-0382-02

doi:10.3969/j.issn.1004-7115.2015.04.007

(收稿日期2015-1-24)

Determination of the content of total flavonoids in different parts of Taishan wild Vitex negundo L.

WANGHuaQIAOLeiSHANan-nanTIANLe-yuanWANGMing-xiaQUxiao-lan

(Depat. of Pharmacy,Taishan Medical College,Taian 271016,China)

Abstract:Objective: Determination of total flavonoids in different parts of Taishan wild Vitex negundo L..Method: Determination of the Content of total flavonoids by spectrophotometry. Result: The content of total flavonids in leaf was the highest, in fruit was less than that in leaf, and stem was the least.Conclusion: The difference of total flavonoids content in different parts of Taishan wild Vitex negundo L. was significant.

Key words:Taishan wild Vitex negundo L.; total Flavonoids; Determination