外斐氏反应结合测量血清腺苷脱氨酶(ADA)活性对于发热伴有焦痂（或溃疡）病人的临床诊断意义

李海霞

(建湖县第二人民医院检验科，江苏建湖224731)

外斐氏反应结合测量血清腺苷脱氨酶(ADA)活性对于发热伴有焦痂（或溃疡）病人的临床诊断意义

李海霞

(建湖县第二人民医院检验科，江苏建湖224731)

目的探讨外斐氏反应结合测量血清腺苷脱氨酶(ADA)活性对于发热伴有焦痂（或溃疡）病人的诊断意义。方法用非特异性凝集反应（变形杆菌OXK凝集反应）检测发热伴有焦痂（或溃疡）病人血中的恙虫病特异性抗体，比色法测量血清腺苷脱氨酶(ADA)活性。结果对于发热伴有焦痂（或溃疡）等疑似恙虫感染的病人，恙虫病特异性抗体检测阳性率随着病程的延长有明显提高。这些病人的血清ADA活性随着病程的延长都大于25U/L。结论在恙虫病流行季节，对于发热伴有焦痂（或溃疡）病人，外斐氏反应结合测量血清腺苷脱氨酶(ADA)活性具有特征性的诊断意义。

变形杆菌OXK凝集反应；外斐氏反应；血清腺苷脱氨酶(ADA)活性；恙虫病；发热伴有焦痂（或溃疡）

恙虫病（tsutsugamushi disease）又称丛林斑疹伤寒，是由恙虫病立克次体R（亦称东方立克次体R.orientalis）所致的急性传染病[1]。其基本病变为全身性小血管炎、血管周围炎及网状内皮细胞增生。临床上以发热、焦痂（或溃疡）、淋巴结肿大、皮疹和肝脾肿大等为特征[2]。本病是一种自然疫源性传染病，在我国东南、西南地区的沿海岛屿发病率较高。主要传染源是啮齿类，传播媒介为恙螨幼虫。其临床特点为急性起病、发热、皮疹、淋巴结肿大、肝脾肿大和被恙螨幼虫叮咬处出现焦痂等。近几年在我县东部有散在分布，加之此病特有的体征——焦痂（或溃疡）处于隐蔽处，不容易发现，医生一般不考虑此病。既使有所怀疑，用大环类酯类（红霉素、阿奇霉素等）抗生素治疗，效果明显，没有引起重视。直到去年秋后我们医院前后三个多月收治四十几个此类病人，才引起注意。现回顾一下去年医院收治的疑似恙虫病病人，我们科利用变形杆菌OXK凝集反应（外斐氏反应）结合血清腺苷脱氨酶(ADA)活性对他们的血清进行检测，以探讨其在恙虫病流行季节（收稻季节），对于发热伴有焦痂（或溃疡）病人的诊断意义。

1 材料与方法

1.1 研究对象⑴检测组：所有受检者均为2013年9月至12月我院住院的病人，同时具有以下二种以上体征——发热、皮疹和肝脾肿大、淋巴结肿大、伴有焦痂（或溃疡）的病人。年龄在4～72岁，男20例，女30例。血清学检查尽量在抗生素使用前，同时测量血清腺苷脱氨酶(ADA)活性。所有受检者分别采集3份标本，在病程早期（1周）、病后10～14d（2周）、及病后21～28d（4周）抽取。⑵正常对照组：所有受检者均为2013年9月至12月我院门诊健康体检者共50例，各项体检指标都正常。

1.2 仪器和试剂⑴37℃恒温水浴箱、试管架，直径为1cm的小玻璃试管。试剂为宁波天润生物有限公司提供的OXl9、OX2、OXK诊断菌液。⑵日本东芝TBA-120全自动生化仪、上海执诚生物科技股份有限公司提供的ADA测定试盒。

1.3 方法

1.3.1 菌液稀释用0.9%生理盐水将菌液稀释，稀释后的细菌悬液每ml含7亿个菌。

1.3.2 血清稀释将血清标本做2倍系列稀释，血清0.4ml加生理盐水3.6ml使成1：10稀释血清4ml。取一小试管架，排三排小试管，每排8个，每列3个。用吸管吸取1：10稀释血清，分别加0.5ml于第一列3个试管中，剩余2.5ml稀释血清，用吸管吸0.5ml弃去，剩余2ml稀释血清再加入生理盐水2ml，成1∶20稀释血清，第二列3个试管分别加入0.5ml 1∶20稀释血清……直至第八列成1∶1280稀释。

1.3.3 外斐氏反应流程三排逐管分别加入OXl9、OX2、OXK稀释菌液各0.5ml，血清稀释度即增为1：20，1：40……1：2560，充分振荡混匀，于37℃恒温水浴箱放置16~20h判定结果。

1.4 生化仪准备在TBA-120生化仪上按照试剂盒要求，设置各项参数，并以蒸馏水作空白对照，用门诊健康人的血清做样品对照，试剂空白吸光度变化绝对值符合试剂盒要求，并且做好常规质量控制和定标，按照仪器的维护保养程序做好仪器的日常维护以及每周、每月、半年、一年的定期预防性保养和配件更换，并做好维护保养记录，保证仪器状态良好[3]。

1.5 统计学处理采用SPSS 13.0统计学软件分析，检测结果以均数±标准差（）表示，所有计量资料比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 阳性判断标准临床检验病原生物学中规定外斐氏反应血清稀释度≥1：160即为凝集反应阳性。OXl9、OX2血清稀释度都≤1：80，排除斑疹伤寒等立克次体病。OXK血清稀释度≥1：160即为OXK凝集反应阳性。

2.2 表格及数据见表1~3。

2.3 统计学分析从上面表1中可以看出检测组与正常对照组的OXK凝集反应及ADA检测结果存在非常显著的差异，经t检验显示差异有统计学意义（P<0.01）。检测敏感性为89%，特异性为99%。表2中可以看出随着病程的延长，检测组的阳性检出率与检测值明显升高，差异有统计学意义。从表3中看出对于发热伴焦痂的病人而言，OXK凝集反应和ADA联合检测的阳性率为96%。发热伴焦痂与不伴焦痂具有统计学差异，经t检验显示差异有统计学意义。

表1 检测组与对照组OXK凝集反应阳性及ADA＞25U/L例数统计及检测结果

表2 检测组随着时间变化OXK凝集反应及ADA检测结果、阳性率统计

表3 检测组中发热伴焦痂及发热无焦痂病人OXK凝集反应阳性及ADA＞25U/L例数统计

3 讨论

立克次体感染（羌虫病）是一种急性传染病，有流行季节性和地区性，多发在东南地区、和西南地区的夏、秋季节[4]。羌虫病近几年在我国东南地区呈散在，小范围的分布。它往往表现全身症状，所以与其它病相混淆，很容易被误诊。恙虫病的首发症状是高热，由于高烧，大约八成的病人会误诊为上呼吸道感染而忽视或延误治疗。由于恙螨幼虫好侵袭人体的潮湿、气味较浓以及被压迫部位，这些叮咬部位较为隐蔽，故焦痂多见于腋窝、阴囊、外生殖器、腹股沟、会阴、肛周和腰带压迫等处[5]。再加之焦痂与溃疡不痛不痒，病人和医生往往不易察觉，易造成漏诊误诊。如若患者病史诉说不清时，也容易被误诊。焦痂与溃疡是本病最主要特征也是鉴别要点。焦痂是人在田间劳作、或在草地玩耍时，被受恙虫病立克次体感染的恙螨幼虫叮咬后病原体先在皮下局部繁殖、随后出现红色丘疹、不痛不痒、继成水疱、然后发生坏死和出血、随后结成黑色痂皮。焦痂边缘突起、周围有红晕、呈圆形或椭圆形、大小不等、直径可为2～15mm、多为4～10mm痂皮脱落后即成溃疡、溃疡呈圆形或椭圆形、周边整齐而稍隆起、基底洁净、为淡红色肉芽组织、起初常有血清样渗出液、随后逐渐减少、形成一个光洁的凹陷面、偶有继发性化脓现象多数患者仅有1个、偶见2～3个焦痂或溃疡、也有多达10多个。由于我们这前几年就有散在分布，把外斐氏反应和测量血清腺苷脱氨酶(ADA)活性作为临床上持续高热，皮肤出现焦痂或溃疡、皮疹、局部淋巴结肿的病人的常规筛查检测，加之对恙虫敏感抗生素的使用，故没有出现大的误诊[6]。

我们上述的血清学检测就是利用外斐氏反应的原理。班疹伤寒等立克次体与变形杆菌X株的菌体抗原（OX19、OX2、OXK）抗原具有共同的耐热性多糖类属抗原（恙虫病立克次体与变形杆菌菌体抗原OXK有共同抗原），因而临床上常用后者代替立克次体抗原进行非特异性凝集反应，作为人类或动物血清中有关抗体的检查。这就是外斐氏反应[7]。

恙虫病诊断标准：⑴有野外草地接触史；⑵高热伴特征性溃疡和焦痂；⑶淋巴结肿大、皮疹；⑷外斐试验(Weil-Felix)1：160以上。具有上述中3项可诊断[8]。

腺苷脱氨酶（ADA）是一种与机体免疫有重要关系的核酸代谢酶类，测定血清ADA对某些疾病的诊断、治疗及免疫功能的研究日趋受到临床重视[9]。

ADA检测是采用酶显色法，样本中的ADA首先把试剂中的底物腺苷转化成黄苷，然后利用嘌呤核苷磷酸化酶（PNP）和黄嘌呤氧化酶（XOD）进一步将黄苷氧化，产生过氧化氢，在过氧化氢和4-氨基安替比林存在的情况下，发生Trinder显色反应，以560nm处吸光度处特异性的变化指示样本中的腺苷脱氨酶的活性。

在上面的血清学检测中，ADA>25U/L病人都排除了能引起腺苷脱氨酶的活性增高的其它病，如肝炎，肝硬化，血色素沉着症等。说明在恙虫病流行地区的流行季节，当急性发热患者出现ADA>25U/L时，可考虑恙虫病[10]。

本文这46例中都具有高热伴特征性溃疡和焦痂，44例为成人，有田间劳作史，2例为儿童，都有光腿、脚在田地里、草地里玩耍史。这46例中有44例在发病第4周时外斐氏反应都是阳性，还有2例由于发现前伴有其它症状，抗生素的早期不规则使用，使得抗体产生较晚，故外斐氏反应为阴性。44人ADA都有大于>25U/L。还有1例病人ADA>25U/L，经过临床观察，为EB病毒引起传染性单核细胞增多症。虽说病原体的分离是恙虫病的诊断金标准，外斐氏反应已在有些地方已淘汰，但我科条件有限，根椐我们这流行特点，把外斐氏反应和测量血清腺苷脱氨酶(ADA)活性作为发热伴有皮疹，焦痂病人的常规筛查检测具有临床诊断意义。

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[8]全国卫生专业技术资格考试专家委员会.2008年全国卫生专业技术资格考试指导临床医学与检验技术（中级）[M].北京：人民卫生出版社，2008：430-432.

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R446.62，R513.2

A

1674-1129(2015)06-0793-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2015.06.040

2015-04-28；

2015-10-28)