雏鸡大肠杆菌的实验室诊断

（黑龙江省绥化市北林区动物检疫站 152000）

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料来源

病料来源为绥化市某县市中随机选出的三个鸡场中疑似大肠杆菌感染的7日龄鸡群中分别各取出10只进行临床诊断和实验室诊断。

1.1.2 培养基和试剂

主要培养基和试剂有麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂、革兰染液，普通肉汤培养基、普通琼脂培养基、三糖铁琼脂、药敏片、葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、乳糖、蔗糖、枸橼酸盐及各类生化反应试剂、大肠埃希菌O型抗血清。

1.1.3 仪器

主要仪器有显微镜、试管、培养皿、吸管等。

1.2 进行雏鸡大肠杆菌实验的方法

分别对三个鸡舍的鸡群总数、发病数和死亡数作出统计。无菌采集病死鸡的心、肝、脾、肺、肾等组织，将病料触片和血液涂片，分别进行革兰染色和碱性美蓝染色、镜检。对A、B、C三个样病例进行细菌分离培养和血清型鉴定。从三个样中随机挑取两个总共组成6个（a、b、c、d、e、f）紫黑色带有金属光泽的菌落接种到斜面培养基上，37℃恒温培养18～24 h。观察细菌生长及菌落特征。

1.2.1 动物回归试验

将分离纯培养的6个病原菌菌液颈部皮下接种30只7日龄雏鸡，每只0.2mL（约2×108cfu）。并设10只为对照组，每只颈部皮下注射0.2mL灭菌肉汤。隔离饲养，观察1星期。

1.2.2 药敏试验

将斜面培养基中增菌纯培养的菌株培养液均匀涂布于普通琼脂培养基表面，37℃干燥8min。然后用灭菌镊子取10种抗生素药物纸片，将其分别对称地贴在培养基表面，每个平皿贴4种，37℃恒温培养18～20 h后观察结果。使用的10种药物为呋喃妥因、复方新诺明、庆大霉素、链霉素、青霉素、丙氟哌酸、头孢他啶、利福平、磺胺嘧啶、新生霉素。还做了平板凝集试验和生化试验。

2 结果与分析

2.1 镜检、血清型鉴定和生化试验结果

病料涂片染色与病料接种培养后染色镜检，均检测到革兰阴性短杆菌。选择攻毒试验中对鸡呈现高致病力的菌株a、b、c、d、e与禽大肠杆菌O型单因子血清分别进行平板凝集试验，三个样A、B、C的血清型鉴定鉴定结果都包含O1、O2、O78。A、B、C三个群体总共30只病例中，有16只分离株是可以定型的，其中以O1、O2、O78为主，这三种血清型在种类上占总量的53.3%（16／30）因此，可以认为O78、O1、O2可能是绥化地区的优势血清型。对分离的病原菌进行生化试验，均能分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇及蔗糖，产酸产气，初步判断为大肠杆菌。

2.2 动物回归试验结果及分析

采用相同菌株攻毒，鸡只死亡数量具体见表1。

表1 同菌株攻毒后鸡只死亡数

通过用6组菌株分别给6组鸡攻毒结果来看，有4组都是阳性，其病理变化原发病鸡基本一致。无菌采集病死鸡脏器进行细菌学检测，结果分离到与送检病例一致的大肠埃希菌。

2.3 药敏试验

选取药物进行药物敏感性试验，结果见表2。

表2 药敏试验结果

3 讨论

A、B、C三家鸡场都是同一时期引进的鸡苗，出自同一鸡苗生产公司，对三家的鸡舍环境卫生以及饲养管理条件进行考察和比较来看，都存在通风不良的情况，且在对鸡舍加温时都采用了火炉方式，放鸡苗时从管理人员那里得知鸡舍内存在较重的煤气；鸡群发病期间末进行对症治疗，仅凭借经验采用超高浓度的药物饲喂雏鸡。因此，三个鸡场的发病情况和死亡率（分别是6.0%、5.2%与5.3%）情况基一致。

通过药敏试验可得出：可以采用对病原菌有高敏感性的抗生素对发病鸡群进行治疗；大肠杆菌的高敏感药物减少，多为中低敏药物并且产生耐药菌株。这可能是平时饲养管理时，多用滥用抗生素和病情长时间不能得到控制从而使病原菌不断的演化，对抗生素和一些药物产生耐药性。

从16株定型菌株的鉴定结果可以看出，O1、O2、O78等菌株出现的机率相对较高，且为优势血清群，这与国内、外称O1、O2、O35、O78为禽常见的致病性大肠杆菌血清型的结论一致。

本次针对三个养殖鸡舍中雏鸡大肠杆菌病的发病情况和饲养管理情况来看，一方面最主要原因可能是种蛋受到大肠杆菌的感染，另一方面加上转移雏鸡时鸡舍的环境温度和空气净化度控制不得当两方面的原因导致雏鸡大批发病死亡；并且在发病期间，相关养殖和技术人员并不清楚病因就仅凭借经验，抗生素严重超标以及滥用抗生素，使得雏鸡继发中毒，从而造成更严重的死亡；并使得大肠杆菌不断进化出更为耐药的强毒株，通过药敏试验可以清晰的看到分离菌株已经对几种药物产生抗性，选择高敏感的药物，用药2天后雏鸡发病情况得到控制，用药1星期后，病鸡基本康复；这使得我们今后在用药方面应该注意药物的耐药性问题以及对药物的选择性问题上具有指导意义。