不同沙棘叶中槲皮素、山柰酚和异鼠李素的含量比较＊

杜蕾蕾，陈 雏

1.成都中医药大学 民族医药学院（成都 611137）；2.四川省中医药科学院（成都 610041）

沙棘属（Hippophae）植物为胡頽子科落叶灌木或小乔木，是一类具有重要医药价值的植物类群。沙棘的果实为藏族、蒙古族的习用药材［1］。研究［2－3］表明，沙棘含有维生素类、黄酮类、甾醇类、多糖类和有机酸类等多种类型的活性成分，具有较高的营养和药用价值。其中，沙棘总黄酮具有降血脂、降血糖作用，可以加强心肌收缩性、降低心肌耗氧量、减少总外周血管阻力和增加血管弹性，减轻大鼠心肌再灌注损伤区超微结构的病理改变，临床用于治疗缺血性心脏病、心绞痛和高血脂症等，同时用于预防动脉粥样硬化和脑血栓等疾病［4－7］。近年研究［8］发现，沙棘叶也含有大量黄酮类成分，其资源量更大且易于采集。本研究对不同基源的沙棘叶样品进行了对比分析，探究沙棘属植物叶中所含黄酮类成分的主要特点，对科学开发沙棘资源和扩大沙棘黄酮的原料来源具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 材料

Shimadzu LC－10ATvp 高效液相色谱仪（LC－10ATvp泵、SPD－10Avp紫外检测器、CTO－10Asvp柱温箱、SCL－10Avp系统控制器、Class－vp色谱工作站）；Sartorius BP211D电子天平；KQ3200超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）。槲皮素（批号：081－9003）、山柰酚（批号：0861－200002）和异鼠李素（批号：110860－200205）对照品均购自中国药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯，水为 Milli－Q超纯水，其余试剂均为分析纯；沙棘叶样品收集自川西高原甘孜州、阿坝州等地，其原植物鉴定分别为柳叶沙棘Hippophae salicifolia D.Don、中 国 沙 棘Hippophae rhamnoides subsp.sinensis Rousi、云南沙棘 Hippophae rhamnoindes subsp.yunnanensis Rousi、卧龙沙棘 Hippophae rhamnoides subsp.wolongensis Lian，K.Sun et X.L.Chen、理塘沙棘Hippophae litangensis Lian et X.L.Chen ex Swenson et Bartish、棱 果 沙 棘 Hippophae goniocarpaLian et al.Swenson et Bartish、江孜沙棘 Hippophae gyantsensis（Rousi）Lian、密毛肋果沙棘 Hippophae neurocarpasubsp.stellatopilosa Lian et al.ex Swenson et Bartish、肋 果 沙 棘Hippophae neurocarpasubsp.neurocarpaS.W.Liu et T.N.He、西藏沙棘 Hippophae tibetana Schlechtend 10种不同基源的沙棘叶。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件色谱柱 Shim－pack VP－ODS（4.6mm×150mm，5μm）；流动相甲醇－0.4%磷酸（50∶50），流速1.0mL/min；柱温30℃；检测波长370nm；进样量10μL。在此条件下，槲皮素、山柰酚和异鼠李素能与其他组分达到基线分离，理论塔板数按异鼠李素计算为7 300。混合对照品、供试品溶液的色谱图（图1）。

图1 混合对照品（A）和供试品溶液（B）的色谱图

1.2.2 对照品溶液的制备 精密称取适量槲皮素、山柰酚和异鼠李素对照品于容量瓶中，甲醇溶解并定容，得对照品储备液。分别吸取各对照品储备液0.2、0.5、1.0、2.0、4.0和8.0mL于10mL容量瓶中，甲醇定容，得对照品溶液。

1.2.3 供试品溶液的制备 沙棘叶经50℃减压干燥，粉碎。精确称取沙棘叶粉末0.5g，精密加入甲醇－水（8∶2）混合溶剂30mL浸泡12h，超声提取30min，提取液放冷至室温并过滤。精密量取续滤液10mL于100mL圆底烧瓶中，加入6mol/L盐酸10mL，甲醇10mL，混匀后于沸水浴上加热回流30min，迅速冷却，移至50mL容量瓶中，甲醇定容，0.45μm微孔滤膜过滤即得。

1.2.4 线性关系考察 分别吸取“1.2.2”项下不同浓度的对照品溶液10μL进样，测定峰面积值，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明，槲皮素在1.67～106.60μg/mL范围内线性良好，回归方程为y＝35 588x＋7 242，r＝0.999 9；山柰酚在0.51～32.64μg/mL范围内线性良好，回归方程为y＝43 894x＋5 399，r＝0.999 6；异鼠李素在0.78～49.92μg/mL范围内线性良好，回归方程为y＝39 030x＋6 154，r＝0.999 9。

1.2.5 重复性试验 精密称取同一沙棘叶粉末6份，分别按“1.2.3”项下方法制备供试品溶液，按“1.2.1”项下色谱条件测定槲皮素、山柰酚和异鼠李素含量。结果表明，槲皮素、山柰酚和异鼠李素含量的 RSD分别为0.69%、1.63%和1.28%。

1.2.6 回收试验 精密称取同一沙棘叶粉末9份，每份约0.25g，平均分为3组，每组精密加入相当于已知含量50%、100%和150%的对照品储备液，按“1.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“1.2.1”项下色谱条件测定槲皮素、山柰酚和异鼠李素的含量，计算加样回收率。结果显示，槲皮素、山柰酚和异鼠李素的平均回收率（n＝9）分别为99.50%（RSD＝0.91%）、98.00%（RSD＝1.33%）和 100.80%（RSD＝1.55%）。

1.2.7 样品测定 分别取不同基源的沙棘叶样品，按“1.2.3”项下方法制备供试品溶液。将供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。

2 结果

按外标法计算样品中槲皮素、山柰酚和异鼠李素的含量（表1）。所测定的10种不同基源的沙棘叶中槲皮素的含量为0.58～4.42mg/g；山柰酚的含量为0.12～3.32mg/g；异鼠李素的含量为0.00～2.58mg/g；而总黄酮含量为1.26～8.08mg/g，最低和最高含量相差约6.4倍。在10种不同沙棘叶中，云南沙棘和卧龙沙棘的总黄酮平均含量较高，分别为5.29mg/g和5.01mg/g。

表1 不同基源沙棘叶中槲皮素、山柰酚和异鼠李素的含量测定结果

3 讨论

廖丽云等［9］报道了高效液相色谱法测定心达康片中槲皮素、山柰酚和异鼠李素含量的方法。但与制剂不同，沙棘果实、叶子等新鲜原料中，总黄酮是由以槲皮素、山柰酚和异鼠李素为主要苷元所形成的数十种黄酮苷类化合物所组成。在缺少化学对照品的情况下，很难对果实中数十种黄酮苷的含量进行直接测定，因此采用加酸水解的方法，可使数量众多的黄酮苷转化为数个主要的黄酮苷元，通过测定各苷元的含量藉以评价果实样品中黄酮类化合物总含量的高低［10］。试验证明，本研究所建立的分析方法能同时测定沙棘叶中3种主要黄酮苷元的含量，该方法准确、简便、重复性好，可用于沙棘叶的质量评价。

测定结果显示：不同基源的沙棘叶样品中总黄酮含量为1.26～8.08mg/g，其含量差异较大，提示云南沙棘和卧龙沙棘的总黄酮含量较高，适宜作为提取沙棘叶黄酮的原料。

在测定的不同基源沙棘叶中槲皮素、山柰酚和异鼠李素的相对比例差异较大，多数样品中槲皮素的相对含量较高，而沙棘果实中异鼠李素的含量较高［11］。研究［12］表明，相同浓度的槲皮素比异鼠李素清除2，2－二苯基－1－苦肼基自由基（2，2－diphenyl－1－picry－hydrazyl radical，DPPH）自由基、2，2－联氮－二（3－乙基－苯并噻唑－6－磺酸）二铵盐（2，2＇－azinobis－（3－ethylbenzthiazoline－6－sulphonate），ABTS）自 由基能力更强。因此，笔者推测沙棘叶中总黄酮的抗氧化能力可能优于沙棘果实。

综上所述，沙棘叶中含有一定量的黄酮成分，且具有资源量大、易于采集的优势，可作为提取沙棘黄酮的原料之一。但沙棘叶中的黄酮含量受品种和生长环境等因素影响较大，今后将作进一步的研究和筛选。

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