异鼠李素抗癌活性研究

谭琪明 胡丹

摘 要：为了研究沙棘中异鼠李素的抗癌活性，分别采用了SRB法测试不同浓度异鼠李素对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞的抑制率以及MTT法测试不同浓度异鼠李素对人白血病细胞株K562和HL60的抑制率。结果为不同浓度异鼠李素对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞的抑制率达（59.42±4.40）% ～（69.55±3.17）%，其中0.063μmol/mL异鼠李素对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞抑制率为（69.55±3.17）%，与0.3μmol/mL阿霉素相当；不同浓度异鼠李素对人白血病细胞株K562的抑制率达（9.84±1.14）% ～（100±4.12）%，其中0.633μmol/mL异鼠李素对人白血病细胞株K562细胞抑制率为（100±4.12）%，与10μmol/mL阿霉素相当；不同浓度异鼠李素对人白血病细胞株HL60的抑制率达（12.50±1.41）% ～（100±6.89）%，其中0.633μmol/mL异鼠李素对人白血病细胞株HL60细胞抑制率为（100±6.89）%，与10μmol/mL阿霉素相当。可见异鼠李素具有一定的抗癌活性。

关 键 词：异鼠李素；抗癌；活性测定

中图分类号：TQ 460 文献标识码： A 文章编号： 1671-0460（2016）04-0687-03

Abstract： The antitumor activity of isorhamnetin was studied. The human breast cancer cell line MCF7 treated with different concentrations of isorhamnetin were examined for cell inhibitory activity by using SRB assay and the human leukemia cell lines K562 and HL60 treated with different concentrations of isorhamnetin were examined for cell inhibitory activity by using MTT assay. The results showed that under the condition of different concentrations of isorhamnetin， the highest human breast cancer cell line MCF7 inhibition rate was （69.55±3.17）%， the lowest was （59.42±4.40）%. The human breast cancer cell line MCF7 inhibition rate of 0.3 μmol/mL adriamycin reached （76.08±3.32）%， there was no significant difference between it and 0.063μmol/mL isorhamnetin. And under the condition of different concentrations of isorhamnetin， the highest human leukemia cell line K562 inhibition rate was（100±4.12）%， the lowest was（9.84±1.14）%. The human leukemia cell line K562 inhibition rate of 10 μmol/mL adriamycin reached （87.59±1.38）%， there was no significant difference between it and 0.633μmol/mL isorhamnetin. And under the condition of different concentrations of isorhamnetin， the highest human leukemia cell line HL60 inhibition rate was （100±6.89）%， the lowest was （12.50±1.41）%. The human leukemia cell line HL60 inhibition rate of 10μmol/mL adriamycin reached （94.20±2.17）%， there was no significant difference between it and 0.633μmol/mL isorhamnetin. Isorhamnetin had a certain activity of antitumor.

Key words： Isorhamnetin； Antitumor activity； Determination of activity

癌症又名恶性肿瘤，是由于机体细胞失去正常调控，过度增殖而引起的疾病。近年来，癌症的发病率日益上升，还有年轻化的趋势，让各种年龄层次的人都感受到了它的威胁。化疗是临床治疗癌症的常用方法，但大多抗肿瘤药物对癌细胞和人体正常细胞的选择性差别不大，在应用中不良反应严重、广泛，加之易产生耐药性等，使癌症的化疗效果受到很大的影响。近年来，植物来源的抗肿瘤药引起了人们的重视。植物来源的化合物不仅可为设计更理想的新药提供新的化学结构，还可作为新的抗癌药物[1]。异鼠李素是一种黄酮类化合物，是沙棘黄酮中的主要单体之一[2]， 近年研究发现，异鼠李素可抑制肿瘤细胞增殖、干预肿瘤细胞信号转导、诱导肿瘤细胞凋亡、增强抑癌基因的活性、抑制癌基因表达。本研究探讨了异鼠李素的抗癌活性，为临床研究抗癌药物提供了参考。

1 实验部分

1.1 仪器

超净工作台：苏州安泰净化设备有限公司；高速离心机：长沙平凡仪器仪表有限公司；超低温冰箱（-85 ℃）：Thermo公司 ；CO2培养箱（Forma 3111型）：美国Thermo公司；倒置相差显微镜（Nikon TS100）：日本Nikon公司；96孔培养板：购于美国Costar公司。

1.2 试剂与细胞株

异鼠李素：由本试验制得，纯度为72.8%；SRB、噻唑蓝（MTT）、二甲基亚砜：美国Sigma公司；RPMI1640培养基、1640培养基、DMEM高糖培养基：购于Gibco公司；MEM/F培养基：购自Hyclone公司；人白血病细胞株HL60、人白血病细胞株K562：购于CCTCC；人乳腺癌细胞株MCF-7：购于上海细胞库；其他试剂均为分析纯。

2 实验方法

采用两种方法即四氮唑盐还原（MTT）和磺酰罗丹明B（Sulforhodamine B，SRB）比色法对异鼠李素抗癌活性进行研究，一为测定异鼠李素对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞的抑制率；二为测定异鼠李素对人白血病细胞株K562和HL60的抑制率。

2.1 异鼠李素对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞抑制率的测定

2.1.1 细胞培养

将MCF-7细胞接种在含有10%的胎牛血清的MEM/F12培养基上并置于37 ℃，5%CO2，饱和湿度环境下培养，待长满瓶底80%～90% 后进行传代实验。

2.1.2 试验方法

将处于对数生长期的MCF-7细胞，按每孔3×103个细胞接种于96孔培养板中，每孔加入100 ?L，培养24 h使细胞贴壁。给药组加入浓度不同的异鼠李素，使其终浓度分别为0.006、0.063、0.633μmol/mL，阴性对照组则加等量的培养液，每一浓度设3个平行孔，每孔加药100 ?L，继续培养至试验设计时间。然后，终止培养，去除上清，轻柔地加入TCA100 ?L固定，接着，将培养板放置于4 ℃冰箱1 h，用去离子水洗5遍，空气中干燥，然后，每孔加入50 ?L 0.4%SRB染色30 min，用1%醋酸冲洗5遍，空气中干燥，最后，采用非缓冲液Tris液100 ?L溶解并将培养板置振荡器上振荡10min，在酶标仪上以波长490nm测OD值。结果见表1-2。

抑制率（%）=（对照组OD值—样品组OD值）/对照组OD值×100

表1与表2测定结果对比表明，异鼠李素对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞有一定地抑制作用。当异鼠李素的浓度为0.063μmol/mL时，其抑制率达最大即为（69.55±3.17）%

2.2 异鼠李素对人白血病细胞株K562和HL60抑制率的测定

2.2.1 细胞培养

将HL60、K562细胞接种在含有10%的小牛血清的RPMI1640培养基上并置于37 ℃，5% CO2，饱和湿度环境下培养，待长满瓶底80%～90%后进行传代实验。

2.2.2 试验方法

将处于对数生长期的K562及HL60细胞，按每孔5×104个细胞接种于96孔培养板中，每孔加入100 ?L，于37 ℃，5% CO2、饱和湿度环境下培养24 h后，加入终浓度为0.006 、0.063 、0.633μmol/mL的异鼠李素，每组设3个复孔。在培养24 h后，每孔加入10 ?L MTT，继续培养4 h，离心10 min，弃去上清，每孔加二甲基亚枫150 ?L，震荡10 min，用酶标仪测570 nm的OD值。结果见表3-6。

抑制率（%）=（对照组OD值—样品组OD值）/对照组OD值×100

表3与表4结果对比表明异鼠李素对人白血病细胞株K562有一定地抑制作用，当异鼠李素的浓度为0.633μmol/mL时，其抑制率达最大即为（100±4.12）% ；表5与表6结果对比表明异鼠李素对人白血病细胞株HL60有一定地抑制作用。当异鼠李素的浓度为0.633μmol/mL时，其抑制率达最大即为（100±6.89）% 。

3 结论与讨论

异鼠李素和槲皮素同属黄酮类化合物，近年研究发现其有抗心肌缺氧缺血、抗心率失常、清除氧自由基和降低血清胆固醇等心血管保护作用[3]。不少研究组报道槲皮素具有良好抗肿瘤效应；异鼠李素与槲皮素结构相似，但作为单体对肿瘤的抑制作用还未见国内外其他研究组的报道[4，5]。

本实验采用MTT及SRB法对异鼠李素抗癌活性进行研究，结果表明异鼠李素对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞，人白血病细胞株K562、HL60细胞均有一定的抑制作用，对比不同浓度的异鼠李素与阿霉素对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞的抑制效果可知，0.063μmol/mL异鼠李素对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞抑制率与0.3μmol/mL阿霉素相当。对比不同浓度的异鼠李素与阿霉素对人白血病细胞株K562、HL60细胞的抑制效果可知，0.633μmol/mL异鼠李素对人白血病细胞株K562、HL60细胞抑制率与10μmol/mL阿霉素相当。

参考文献：

[1]CHENG Jangyang， CHANG Chiyen， KUO Chingchuan， eta1. Salvinal， a noveI microtubule inhibitor isolated from Salvia miltiorrhizae Bunge （ Danshen ）， with antimitotic activity in multidrug-sensitive and- resistant human tumor cells[J]. Mol Pharmacol， 2004， 65（1）：77-84.

[2]Wang ZR，Wang L，Yin HH.Effect of seabuekthorn flavone on myocardial contraction and calcium ion transportation of heart failure that induced by stretch[J].space Med & Med Engineer （航天医学与医学工程），2000，13（1）：6.

[3]Zhao ZG， Liu YC.Cardiovascular protective effect of isorhanmetin[J].Med Recapitul（医学综述）， 2008， 14（15）： 2321-2323.

[4]朱玲，王正荣，周黎明，等. 异鼠李素对肺癌的作用及其抗肿瘤机制的初步探讨[J]. 航天医学与医学工程，2005，18（5）：381-383.

[5]YANG Chunlei， WANG Zhengrong， ZHANG Ming， et a1.A study on inhibitory effect of isorhmnetin on human lung cancer[J]. Space Medicine & Medical Engineering. 2004， 17 （4 ）： 261-265.