1 151例中段尿培养病原菌构成与耐药性分析

蔡 辉， 张 肖， 陆峰泉， 顾 兵， 蒋 理，

·论著·

1 151例中段尿培养病原菌构成与耐药性分析

蔡 辉1， 张 肖1， 陆峰泉1， 顾 兵2， 蒋 理1，2

目的 分析2011—2013年泌尿系感染患者常见病原菌构成及耐药性，为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法 采用SIE M E N S MicroScan W alk A way 96 plus系统或A PI系统鉴定细菌和真菌，细菌药物敏感性测定采用纸片扩散法；应用W H O N E T5.6软件进行数据分析。结果 1 151份中段尿细菌培养标本中共检出344株病原菌，阳性率为29.9%。其中革兰阴性菌263株（76.5%），最为常见的是大肠埃希菌183株（53.2%）、肺炎克雷伯菌33株（9.6%）、变形杆菌21株（6.1%）、铜绿假单胞菌12株（3.5%）；革兰阳性菌81株（23.5%），最常见的是粪肠球菌17株（4.9%）和凝固酶阴性葡萄球菌15株（4.4%）。耐药性分析结果显示，肠杆菌科细菌中大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBL的检出率为51.9%和63.6%；产ESBL菌株对头孢菌素类、喹诺酮类、四环素类、磺胺类等抗菌药物耐药率明显高于非产ESBL菌株，两者相比差异有统计学意义（P＜0.05）；肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素高度敏感（敏感率为90.5%～100%）。不发酵糖革兰阴性杆菌中铜绿假单胞菌对环丙沙星、阿米卡星和美罗培南较为敏感（敏感率为83.3%）。革兰阳性球菌对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺仍高度敏感（敏感率为86.5%～100%）。检出2株大肠埃希菌和1株肺炎克雷伯菌对亚胺培南耐药，2株肠球菌对万古霉素耐药。结论大肠埃希菌是泌尿系感染主要病原菌，病原菌的耐药性日趋严重。定期监测和及时总结并分析泌尿系感染的病原菌构成及耐药性，对指导临床合理使用抗菌药物具有十分重要的意义。

尿培养； 病原菌； 抗菌药物； 耐药性

尿路感染是最常见的感染性疾病之一，也是常见的医院感染疾病之一，约占医院感染的30%～40%，为医院感染的首位［1］。中段尿培养是确定病原菌种类的直接手段，药物敏感试验直接指导着临床用药，对疾病的治疗具有重要意义［2］。随着广谱抗菌药物的广泛使用，泌尿系感染病原菌对其耐药性日趋严重。为了解泌尿系感染病原菌的种类构成及耐药状况，本文对江苏省盛泽医院2011—2013年1 151例中段尿培养分离的344株病原菌进行分析，结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株来源 收集2011—2013年住院患者送检的1 151份中段尿标本进行培养、分离、鉴定和药敏分析，剔除同一患者所获重复菌株。

1.1.2 试剂与仪器 SIE M E N S MicroScan W alk A way 96 plus全自动微生物鉴定仪及法国生物梅里埃公司A PI细菌鉴定系统；细菌药敏纸片为英国O X OID公司产品。

1.1.3 质控菌株 金黄色葡萄球菌（金葡菌）A T C C 25923，大肠埃希菌A T C C 29522，铜绿假单胞菌 A T C C 27853，肺炎克雷伯菌 A T C C 700603，粪肠球菌A T C C 29212。

1.2 方法

1.2.1 标本的采集及培养 按照全国临床检验操作规程（第3版）留取及接种标本［3］。

1.2.2 病原菌鉴定及药敏试验 细菌经革兰染色后，挑取无污染且革兰阴性杆菌菌落计数 ＞105C F U/m L、革兰阳性球菌菌落计数＞104C F U/m L的细菌进行菌种鉴定和药敏分析［3］，用SIE M E N S MicroScan W alk A way 96 plus全自动微生物鉴定仪或 A PI鉴定条进行鉴定。药敏试验采用 K-B琼脂扩散法，根据美国临床和实验室标准化协会（C LSI）规定判断药物敏感性。采用C LSI 2008年推荐的ESB L纸片筛选法和酶抑制剂增强纸片确证法标准测定大肠埃希菌、克雷伯菌属和奇异变形杆菌中产ESB L株。

1.2.3 统计分析 采用世界卫生组织细菌耐药性监测网推荐的W H O N E T5.6软件进行数据分析；SPSS17.0软件进行统计学分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 病原菌构成

2011—2013年我院住院患者共送检中段尿培养标本1 151例，去除同一患者分离的重复菌株后共检出病原菌344株，阳性检出率为29.9%。其中女性阳性266例，男性阳性78例。革兰阴性菌263株，占76.5%；革兰阳性菌81株，占23.5%。排列前5位的病原菌为：大肠埃希菌（53.2%），肺炎克雷伯菌（9.6%），变形杆菌（6.1%），粪肠球菌（4.9%），凝固酶阴性葡萄球菌（C N S，4.4%），见表1。

表1 344例中段尿培养病原菌构成Table 1 The pathogenic bacteria isolated fro m midstream urine

2.2 革兰阴性菌对抗菌药物的敏感性

分离出的263株革兰阴性菌中，以大肠埃希菌为主，占69.6%。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中ESB L检出率分别为51.9%和63.6%。肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素仍高度敏感，敏感率为100%；对β内酰胺-β内酰胺酶抑制剂复合制剂、阿米卡星、米诺环素、呋喃妥因敏感率较高，均＞50%；肠杆菌科细菌中产ESB L菌株对头孢菌素类、喹诺酮类、四环素类、磺胺类等抗菌药物耐药率均显著高于非产ESB L菌株（P＜0.05）。检出2株大肠埃希菌和1株肺炎克雷伯菌对亚胺培南耐药。不发酵糖革兰阴性杆菌中以铜绿假单胞菌为主，其对碳青霉烯类抗生素较为敏感，对头孢菌素类、喹诺酮类、氨基糖苷类耐药率较低，见表2。

2.3 革兰阳性菌对抗菌药物的敏感性

81株革兰阳性菌中，检出的3种主要病原菌为肠球菌属、链球菌属、C N S。其中，耐甲氧西林C N S（M R C N S）11株，占C N S的73.3%。革兰阳性球菌对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺高度敏感。C N S对青霉素耐药率为100%，对阿米卡星较为敏感（敏感率80.0%），对其他抗菌药物耐药率均＞50%；肠球菌属对氨苄西林、高浓度庆大霉素耐药率分别为67.6%、56.8%，对左氧氟沙星、红霉素、米诺环素耐药率在50%以上；另外还检出2株肠球菌万古霉素耐药株。链球菌属细菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟敏感率较高，均＞75%，见表3。

表2 主要革兰阴性菌对常用抗菌药物的耐药率和敏感率Table 2 Susceptibility of main gram negative bacteria to co m m only used antimicrobial agents（%）

表3 主要革兰阳性菌对常用抗菌药物的耐药率和敏感率Table 3 Susceptibility of main gram positive bacteria to co m m only used antimicrobial agents（%）

3 讨论

2011—2013年我院送检的中段尿细菌培养标本共1 151份，检出病原菌344株，阳性检出率29.9%，高于文献报道［4］。近3年来中段尿培养检出的病原菌中，排前5位的为大肠埃希菌（53.2%），肺炎克雷伯菌（9.6%），变形杆菌（6.1%），粪肠球菌（4.9%）和 C N S（4.4%）。泌尿系感染是仅次于呼吸系统感染的第二大感染性疾病。国内外研究均表明，泌尿系感染的病原菌以革兰阴性杆菌为主，尤其以大肠埃希菌最为常见［5-7］。本研究也显示，革兰阴性杆菌是泌尿系感染的主要病原菌，占全部病原菌的76.5%，其中又以大肠埃希菌为主要病原菌，占全部病原菌的53.2%，这一结果与国内外文献报道基本一致。革兰阳性菌以肠球菌属为主，以粪肠球菌和鸟肠球菌为常见。除大肠埃希菌外，其他病原菌构成与文献报道有一定差异［8］，可能与各地区用药情况不同、取样时间不同有关。

本次药敏监测结果显示，我院尿培养分离出的产ESB L大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检出率分别为51.9%和63.6%，与国内报道相当［9-10］；产 ESB L肠杆菌科细菌对头孢菌素类、喹诺酮类、四环素类、磺胺类等抗菌药物耐药率明显高于非产 ESB L菌株，两者相比差异有统计学意义（P＜0.05）；非产ESB L菌株对头孢菌素类、氨曲南敏感性较高，均＞50%。此外，无论肠杆菌科细菌是否产ESB L，均对碳青霉烯类、β内酰胺-β内酰胺酶抑制剂复合制剂、阿米卡星高度敏感，提示临床医师经验用药时，可选用上述药物。不发酵糖革兰阴性杆菌中以铜绿假单胞菌所占比率最高，该菌对哌拉西林、哌拉西林-他唑巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、阿米卡星的耐药率均＜20%。铜绿假单胞菌对抗菌药物的耐药趋势随着该类药物使用频率的增加而逐年上升，并存在多药耐药性，临床医师应提高警惕，引起重视。

葡萄球菌属对万古霉素和利奈唑胺均保持较高敏感性，尚未发现耐药菌株；葡萄球菌属对青霉素、红霉素、克林霉素和甲氧苄啶-磺胺甲口恶唑耐药率较高，均在65%以上。20株葡萄球菌中金葡菌5株，15株为C N S。随着抗菌药物的广泛使用，留置导管、介入等侵袭性诊治项目的开展，一般认为是非致病菌的C N S导致的医院感染亦明显增多，且其耐药性日趋严重。本调查 M R C N S占C N S的比率高达73.3%，由于M R C N S不仅对各类β内酰胺类抗生素具有内在的耐药性，而且通过获得其他耐药基因而呈现出对其他类抗生素的多重耐药性，给临床治疗带来了严重问题。肠球菌属对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺均保持较高敏感性，但检出2株万古霉素耐药肠球菌，实验室应密切关注其耐药性变化。肠球菌属对氨苄西林、红霉素、左氧氟沙星、高水平氨基糖苷类耐药率较高；这表明氨基糖苷类与氨苄西林、青霉素或万古霉素的协同作用逐渐降低，临床医师应尽量避免氨基糖苷类和其他作用于细菌细胞壁的药物同时使用［4］。同时，肠球菌对呋喃妥因敏感性较高，该药具有较高的抗菌活性，可作为临床经验治疗泌尿系感染的首选药物，但因其肾毒性较大，故应慎用［11］。链球菌对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺均保持较高敏感性，且尚未发现耐药菌株；对头孢噻肟具有较高敏感性，敏感率为91.7%，给临床医师选择抗菌药物提供依据。

总之，尿路感染的主要病原菌为革兰阴性菌，该类菌呈现多重耐药性，且耐药率不断升高，所以定期监测和分析尿培养病原菌的构成及耐药性变迁，对于指导临床合理选用抗菌药物十分重要。

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Pathogens from 1 151 cases of urine culture and their antibiotic resistance profile

C AI H ui，Z H A N G Xiao，L U Fengquan，G U Bing，JIA N G Li. （Departmentof Laboratory M edicine，Jiangsu Shengze H ospital，Suzhou Jiangsu 215228，China）

Objective To analyze the pathogens and antibiotic resistance profile in patients with urinary tract infections w ho were treated fro m 2011 to 2013 to provide evidence for rational use of antimicrobial agents.M ethods SIE M E N S MicroScan W alk A way 96 Plus system or A PI system was used for identification of bacteria and fungi.A ntimicrobial susceptibility testing was conducted by disk diffusion method.W H O N E T 5.6 software was used for data analysis.Results A total of 344（29.9%）strains of pathogens were detected fro m 1 151 midstream urine culture specimens，of w hich 76.5% （263/344）were gram negative bacteria，includingE.coli（53.2%，183/344），K.pneu moniae（9.6%，33/344），Proteus（6.1%，21/344），andP. aeruginosa（3.5%，12/344）.A bout 23.5% （81/344）of the isolates were gram-positive bacteria，includingEnterococcus faecalis（4.9%，17/344）and coagulase-negativeStaphylococcus（4.4%，15/344）.ESBLs were produced in 51.9%of theE. coliisolates and 63.6%of theK.pneu moniaeisolates.ESBLs-producing strains showed significantly higher resistance rates to cephalosporins，quinolones，tetracyclines，sulfonamides and other antimicrobial agents than non-ESBLs-producing strains（P＜0.05）.Enterobacteriaceaeisolates were highly sensitive to carbapenems（90.5%-100%sensitive）.P.aeruginosastrains were relatively sensitive to ciprofloxacin，amikacin and meropenem （83.3%）.Gram-positive cocci remained highly sensitive to vanco m ycin，teicoplanin and linezolid（86.5%-100%）.T wo stains ofE.coliand one stain ofK.pneu moniaewere found resistant to imipenem.T wo strains ofEnterococcuswere resistant to vanco m ycin.ConclusionsE.coliis the major pathogen of urinary tract infections.The pathogens of urinary tract infection are increasingly resistant toantimicrobial agents.Regular m onitoring and timely analysis of the pathogens of urinary tract infections and their resistance profile are of great im portance to rational use of antimicrobial agents.

urine culture；pathogen；antimicrobial agent；resistance

R378

A

1009-7708（2015）01-0038-05

2014-04-01

2014-09-09

1.江苏盛泽医院检验科，江苏苏州 215228；2.南京医科大学第一附属医院。

蔡辉（1986—），男，学士，检验师，主要从事临床微生物学检验。

张肖，E-mail：zhangxiaoxixi223@163.co m。