当归、川芎不同配比中阿魏酸的含量测定

顾秀琰，王雪梅，王昕

（1.甘肃省中医院，甘肃兰州730050；2.甘肃中医学院，甘肃兰州730000）

当归、川芎不同配比中阿魏酸的含量测定

顾秀琰1，王雪梅1，王昕2

（1.甘肃省中医院，甘肃兰州730050；2.甘肃中医学院，甘肃兰州730000）

目的比较当归川芎不同配比中阿魏酸的含量变化，为临床治疗提供当归川芎的最佳配伍比例。方法用HPLC法，色谱柱：Agileht ZORBAX SB-C18柱（250 mm×4.6 m，5 μm），流动相：乙腈∶0.085%磷酸水溶液=17∶83，流速为1 mL·min-1，检测波长为320nm。采用水煎法制备上述药对作为供试品。结果阿魏酸回归方程Y=97268X-12960，r=0.9999，在12.5～250μg·mL-1的浓度范围内线性关系良好，平均加样回收率97.55%，RSD为2.10%。结论当归与川芎配比1∶5时阿魏酸的含量最高。

当归；川芎；不同配比；阿魏酸；HPLC

当归-川芎是临床常用补血活血之药对。当归为伞形科植物当归的根，性温味甘辛，归心、肝、脾经，具有补血活血、调经止痛、润燥滑肠之功效，用于血虚萎黄、眩晕心悸、月经不调、经闭痛经、虚寒腹痛、风湿痹痛、跌仆损伤、痈疽疮疡，有养血而不滋腻、活血而不伤正的优点。川芎为伞形科草本植物川芎的根茎，性温味辛，归肝、胆经，具有行气开郁、祛风燥湿、活血止痛的功效，用于头痛、风湿痹痛、月经不调、经闭痛经、疮疡肿痛、症瘕腹痛、跌仆肿痛等，为“血中之气药”。二者均可用来治疗月经不调、痛经、疮疡肿痛等，其主要成分均为阿魏酸，配伍使用，可增强养血调经、行气活血的功效［1-2］，均为妇科要药。王欢等［2］应用数据与方法对当归-川芎在古方中的使用频次统计表明，当归、川芎在治疗妇科疾病时，使用频次1 622次，配伍使用频次在10次以上，且药对川芎-当归组成的佛手散长期以来被用于治疗动脉粥样硬化和高血压病［3］。近年来，就当归和川芎药理作用的研究具有相似点，主要集中在抗血小板聚集和血栓形成、扩血管、清除氧自由基、保护脏器的缺血损伤、抗肿瘤、调节免疫系统等方面［4-5］。

阿魏酸（ferulic acid）是当归、川芎的有效成分之一，其化学名4-羟基-3-甲氧基肉酸，是桂皮酸的衍生物之一。药理学研究表明，阿魏酸能改善血液循环、抗凝血并能抑制血小板聚集，有明显的抗血栓作用；有抑制巨噬细胞活化、抑制花生四烯酸（AA）代谢、拮抗组胺、降低血管通透性、抗氧化和清除自由基等广泛药理作用。临床用于治疗血管栓塞性脉管炎、动脉粥样硬化、急性脑血栓和偏头痛及动脉粥样硬化等［6］。阿魏酸能通过抑制细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）、应激活化蛋白激酶（JNK）而显著抑制有血管紧张素II诱导的血管内皮细胞VSMC增生。结果显示，阿魏酸将有可能成为有效治疗心血管疾病的药物［7］。因此，本实验采用HPLC法测定当归-川芎不同比例配伍后阿魏酸含量的变化，为含当归-川芎的复方方剂分析和临床治疗药物监测提供质量依据，现介绍如下。

1　仪器与材料

Waters600高效液相色谱仪；电子天平（BS124S北京赛多利斯仪器系统有限公司）；阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定研究院，110773-201012）；乙腈为色谱纯，购自山东禹王公司；磷酸为分析纯，购自天津凯信公司；川芎饮片、当归饮片（均来源于甘肃省中医院饮片药房，由李喜香主任药师鉴定）；水为重蒸馏水。

2　方法

2.1对照品溶液的制备

精密称取阿魏酸标准品2.5 mg，用流动相定容于10 mL棕色容量瓶中，作为对照品贮备液。分别取贮备液0.25 mL、0.5 mL、1 mL、2 mL、5 mL置于5 mL棕色容量瓶中，用流动相定容作为标准曲线制备液。

2.2样品溶液的制备

分别称取适量当归-川芎不同配比（1∶5、1∶4、1∶3、1∶2、1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1）的药材置于不锈钢锅中，加入4倍量水浸泡30分钟，电磁炉加热煮沸30分钟，过滤，残渣再用4倍量水加热煮沸20分钟，过滤，合并药液，文火浓缩至60 mL，备用。

2.3色谱条件

Agileht ZORBAX SB-C18柱（250 mm×4.6 m，5 μm）；流动相：乙腈∶0.085%磷酸水溶液=17∶83（v/v）；流速为1 mL·min-1；柱温：25℃；检测波长为320 nm。色谱图见图1。

图1　当归-川芎不同配比中阿魏酸HPLC图

3　结果

3.1线性关系分析

取2.1项中标准曲线制备液，分别进样20 μL测定。由峰面积（Y）对相应的浓度（X）做线性回归，阿魏酸回归方程为Y= 97 268X-12 960，r=0.999 9，表明阿魏酸在12.5～250 μg·mL-1的浓度范围内线性关系良好。

3.2精密度实验

取2.1项中对照品贮备液，精密吸取20μL，连续进样5次，测定阿魏酸的峰面积，其峰面积RSD=1.47%，表明仪器精密度良好。

3.3稳定性实验

取20 μL配比为1∶5的样品溶液，分别在0小时、2小时、6小时、12小时、24小时内测定，其阿魏酸峰面积RSD=1.93%，表明样品溶液在24小时内稳定。

3.4重复性实验

取20 μL配比为1∶5的样品溶液，重复进样5次，其阿魏酸峰面积RSD=2.60%，重复性符合要求。

3.5加样回收率实验

精密称取约6 g已知含量配比为1∶5的药材饮片，精密加入阿魏酸对照品溶液（3种不同浓度水平，各3份）。按2.2项下条件制备样品溶液，定容至10 mL；各进样20 μL，测定阿魏酸含量，计算回收率，结果见表1。实验结果表明：平均加样回收率为97.55%，RSD为2.10%，加样回收率符合规定，说明方法的准确度较好。

表1　加样回收率实验结果（n=9）

3.6样品的测定

按2.2项下方法制备样品溶液，进样20 μL，测定当归、川芎不同配比下阿魏酸的含量，结果见表2。从实验结果来看，当归与川芎配比为1∶5时阿魏酸的含量最高，配比为4∶1时阿魏酸的含量最低。

表2　样品测定结果

4　讨论

（1）阿魏酸结构中有酚羟基和苯环共轭的双键而使其性质极不稳定，特别是具有光不稳定性，配制时应存放在棕色容量瓶里。方法学实验表明，该法线性关系良好，回收率、精密度高，具有准确、灵敏的特点。本实验结果表明，当归与川芎配比为1∶5时，阿魏酸的含量最高，而随着配比的变化，阿魏酸含量也发生了不同程度降低，这为当归-川芎的复方方剂分析和临床药物检测提供了质量依据。

（2）本实验曾选用过甲醇、乙腈-冰醋酸-水和甲醇、乙腈-磷酸-水作为流动相，对样品溶液进行进样分析，结果显示，流动相条件为乙腈∶0.085%磷酸水溶液=17∶83（v/v）时，样品溶液色谱峰分离效果好，且杂质少。

（3）根据白晶等［8］在当归-川芎药对中阿魏酸在体肠吸收研究结果表明，与单味药相比较，药对中阿魏酸的吸收在质量浓度、pH值及胃肠道方面均表现出较大的优越性。相同质量浓度（以阿魏酸为准）给药时，药对中阿魏酸的吸收更完全、更迅速。因此，本实验通过比较当归、川芎不同配比中阿魏酸的含量，寻找出阿魏酸含量最高时当归、川芎的配比，从而指导临床合理有效用药。

［1］李伟霞，唐于平，郭建明，等.当归川芎药对及其组成药味对3种血虚模型补血作用的比较研究［J］.中国中药杂志，2011，36（13）：808.

［2］王欢，唐于平，丁安伟，等.当归-川芎药对不同配比的中医应用数据分析［J］.中国实验方剂学杂志，2009，15（11）：44-47.

［3］张焕，王一涛，严灿，等.当归与川芎药理作用研究进展与比较［J］.时珍国医国药，2008，19（2）：293-295.

［4］夏泉，张平，李绍平，等.当归的药理作用研究进展［J］.时珍国医国药，2004，15（3）：164.

［5］李秋怡，干国平，刘焱文.川芎的化学成分及药理研究进展［J］.时珍国医国药，2006，17（7）：1298.

［6］胡益勇，徐晓玉.阿魏酸的化学和药理研究进展［J］.中成药，2006，28（2）：253-255.

［7］Hou Yongzhong，Yang Jie，Zhao Guangrong.Ferulic acid inhibits vascular smooth muscle cell proliferation induced by angio tensin II［J］.European Journal of Pharmacology，2004（499）：85.

［8］白晶，丁振铎，徐昶儒，等.“当归-川芎”药对中阿魏酸在体肠吸收研究［J］.哈尔滨商业大学学报，2013，29（2）：129-132.

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1671-1246（2015）22-0158-02