维多利亚蓝B-安乃近的共振瑞利散射光谱及应用

2015-10-16庞向东

分析科学学报 2015年2期

庞向东, 杨娜, 江虹

(长江师范学院化学化工学院，重庆 408100)

安乃近是吡唑酮类解热镇痛药中最具代表性的药物，它是治疗各种急、慢性疼痛性疾病的首选药，常用于高热时的紧急对症用药。安乃近存在一定副作用，长期使用会引起粒细胞减少、再生障碍性贫血、严重的过敏、休克虚脱，甚至死亡等，所以一些国家对安乃近作出了限用或停用的规定。为了临床能更好的使用安乃近，对其进行分析方法研究，以适应急检需要，显得很有必要和重要。目前，测定安乃近的方法主要有碘量法[1]、高效液相色谱法[2,3]、电化学分析法[4]、荧光分析法[5]、化学发光法[6]、紫外分光光度法[7]、红外光谱法[8]等，未见用共振瑞利散射(RRS)法测定安乃近的报道。

本实验在弱碱性的Tris-HCl缓冲介质中，以维多利亚蓝B作探针，研究并建立了测定痕量安乃近的RRS法。实验发现，维多利亚蓝B与安乃近的结合物在364 nm波长处有最大的RRS峰，且安乃近在一定浓度范围内与共振散射强度△IRRS呈良好的线性关系。该方法用于实际样品的测定，回收率在98.2%～102.5%范围。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

F-2500型荧光光度计(日本，日立公司)；pH计(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)。

安乃近(ANG，重庆药检所提供)标准溶液：1.0×10-4mol/L 储备液，冰箱4 ℃保存，使用时稀释10倍。维多利亚蓝B(VB；上海源叶生物科技有限公司)溶液：1.0×10-3mol/L。Tris-HCl缓冲溶液：0.1 mol/L HCl和0.2 mol/L Tris混合，用酸度计测定配成pH=3.0～9.8的系列缓冲溶液。所用试剂均为分析纯，实验用水为超纯水。

1.2 实验方法

于10 mL具塞比色管中，依次准确加入0.5 mL pH=9.36 的Tris-HCl缓冲溶液，适量的1.0×10-5mol/L 安乃近标准溶液和1.0 mL 1.0×10-3mol/L 维多利亚蓝B 溶液，用水稀至刻度，摇匀，10 min后，在荧光光度计上进行同步扫描(λex=λem=220 nm，测定狭缝为 5.0 nm)，得共振瑞利散射光谱，在最大散射波长处测定体系的共振瑞利散射强度(IRRS)和试剂空白的共振瑞利散射强度(I0)，计算△IRRS。

2 结果与讨论

图1 安乃近-维多利亚蓝B的RRS光谱 Fig.1 RRS spectra of analgin-victoria blue B1.ANG (8.0×10-7 mol/L);2.VB (1.0×10-4 mol/L);3-7.ANG (0.0, 2.0×10-7,5.0×10-7,8.0×10-7,1.2×10-6 mol/L)-VB (1.0×10-4 mol/L), pH=9.36.

2.1 共振瑞利散射光谱

按实验方法配制溶液并扫描光谱图。从图1可知，安乃近本身几乎无散射，维多利亚蓝B在414 nm波长处有弱散射。当在安乃近的弱碱性溶液中加入维多利亚蓝B 溶液后，由于维多利亚蓝B 是碱性阳离子染料，可以与安乃近上的磺酸根离子以静电引力结合生成离子缔合物，使溶液的共振瑞利散射明显增强，最大散射峰位于364 nm，紫移50 nm。在体系的最大散射波长处，随着安乃近浓度的增加，体系的共振瑞利散射信号随之增强，安乃近在一定浓度范围内与体系的共振瑞利散射强度呈良好的线性关系，可用于安乃近的定量分析。

2.2 实验条件优化

2.2.1反应介质、酸度及用量考察了Tris-HCl、HAc-NaAc缓冲介质对体系共振瑞利散射强度的影响。结果表明：在pH=9.0～9.5 范围内，使用0.5 mL Tris-HCl 缓冲溶液时，体系的△IRRS较大，方法有较高灵敏度。实验用0.5 mL pH=9.36 的Tris-HCl缓冲溶液。

2.2.2维多利亚蓝B用量考察了1.0×10-3mol/L 维多利亚蓝B 溶液对体系△IRRS的影响。结果表明：维多利亚蓝B溶液用量在0.8～1.2 mL 范围内，体系的△IRRS较大，实验用1.0×10-3mol/L维多利亚蓝B 溶液1.0 mL。

2.2.3试剂加入顺序考察了安乃近、维多利亚蓝B 及Tris-HCl缓冲溶液在不同加入顺序时对体系灵敏度的影响。结果表明：按实验方法的加入顺序较佳。

2.2.4反应时间在最佳条件下，考察了不同反应时间对体系稳定性的影响，结果表明：缔合物在 10 min内即可形成，至少稳定1 h。实验选在 10 min后测定。

2.3 共存物质的干扰

在选定条件下，考察了某些常见物质对测定1.0×10-6mol/L 安乃近的影响。结果表明，当相对误差不超过±5% 时，下列物质不干扰测定：100倍的葡萄糖、蔗糖、乳糖、甘氨酸、KCl、NaCl、Na2S2O3；50倍的L-白氨酸、L-丙氨酸、L-组氨酸、L-色氨酸、DL-苹果酸、CaCl2、BaCl2、Na2SO4、K2SO4、Mg(NO3)2、KNO3；20倍的淀粉、MnSO4。可见，方法具有良好的选择性。

2.4 标准曲线

按实验方法配制标准系列溶液并扫描共振瑞利散射光谱，作△IRRS-c标准曲线。其线性回归方程为：△IRRS=-358.6+1647×106c(c：mol/L)，相关系数为0.9987，线性范围为0.20×10-6～1.2×10-6mol/L，检出限(3Sb/S)为2.6×10-8mol/L(n=11)。

2.5 样品分析

取安乃近注射液和滴鼻液各1支，分别将其内容物置于1 000 mL 容量瓶中，用水稀至刻度，摇匀。取稀释液各1.0 mL 分别置于500 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即为待测液。取安乃近药片4粒，用水溶解后，过滤，将清液转入500 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，取清液0.50 mL 置于1 000 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即为待测液。取上述样液的待测液各1.0 mL，按实验方法分析，各平行测定5次，同时作加标回收试验，结果见表1。