贵州省汉族原发性高血压患者醛固酮合成酶基因(-344T/C)多态性的研究

刁晓艳 ，何 燕 ，周 黔

（1.贵阳医学院附属医院 心内科；2.贵阳医学院分子生物学教研室；3.贵阳医学院附属医院临床检验室，贵阳 550004）

遗传和环境因素的交互作用是原发性高血压（essential hypertension，EH） 的主要发病机制，高血压的基因研究虽报道很多，但仍无定论明确的高血压相关的基因。高血压的发病与肾素-血管紧张素-醛固酮系统有关，作为候选基因之一的醛固酮合成酶（CYP11B2）基因是醛固酮合成的标志基因。国内外对CYP11B2基因-344T／C多态性与原发性高血压的关系结论不一[1～5]。本研究探讨了贵州汉族正常人群与高血压人群CYP11B2基因（-344T/C）的特点。

1 对象与方法

1.1 研究对象

EH组：2011年5月～2012年12月在我科门诊就诊的高血压的患者，血压诊断标准按2010年中国高血压指南的标准；排除继发性高血压、瓣膜疾病、心肌病及肝、肾衰竭等，共182例，其中男92 例、女 90例；平均年龄 57.58±10.94 岁。（2）对照组：选择我科门诊的健康体检者182例，无高血压家族史，其中男87例、女95例；平均年龄56.48±11.57岁。2组在性别与年龄上差异无统计学意义。2组均为贵州籍汉族人，且互相均无血缘关系。

1.2 方法

（1）血压测定：用标准水银柱血压计测量安静休息坐位血压；（2）生化指标测定：清晨空腹抽取静脉血检测血脂（包括甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、载脂蛋白A1、载脂蛋白B100、脂蛋白 a）、血糖和尿酸；（3）采用国际标准化方法测量身高、体重。体重指数（BMI）=体重/身高2（kg/m2）；（4）基因的检测。

①按经典常规法 （酚-氯仿法）抽提白细胞DNA，溶于TE；紫外吸收法定量后标化为80～100ng/μl，-20℃备用。 ②PCR 扩增上游引物序列为 5′-CAG GAG GAG ACC CCA TGT GAC-3′，下游引物序列为5′-CCT CCA CCC TGT TCA GCC C-3′。 25μl PCR 反应体系组成为：10×PCR 缓冲液 2.5μl，25mmol/L MgCl21.8μl，4×dNTP （每种2.5mmol/L）2.0μl，10mol/L 引 物 各 0.6μl，DNA 聚合酶1.5U，模板DNA 80～100ng。PCR循环条件：94℃变性 40s，60℃退火 40s，72℃延伸 40s， 循环30次。PCR产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳分离检测，有目的条带者进行限制性酶切分析。10μl酶切反应体系组成为：PCR 产物 5.0μl，10×缓冲液1.0μl，HaeⅢ 5U， 加水补足体积后 37℃温浴 4h。酶切产物用3%琼脂糖凝胶电泳进行分离检测，判断相应基因型。

1.3 统计学方法

统计分析应用SPSS17.0软件，采用t检验和单因素方差分析。各组的基因型和等位基因频率用直接计数法，Hardy-Weinberg平衡吻合度检验基因型分布用χ2检验的方法，组间基因型和等位基因频率的比较采用χ2检验或确切概率法检验。用逐步Logistic回归分析不同基因型获得性因素的差别。

2 结果

2.1 EH组及对照组CYP11B2（-344T/C）多态性分析

图 1 CYP11B2（-344T/C）多态性的PCR产物和基因型电泳图

研究对象DNA经PCR扩增为538bp片段。如果CYP11B2基因无-344T→C点突变，该处将不存在 HaeⅢ酶切位点，故-344T基因型酶切产物为274bp+138bp+126bp 3个片段 （后两者在琼脂糖凝胶电泳图上合为一条条带，下同）；若有CYP11B2-344T→C点突变，则该处有HaeⅢ酶切位点，故-344C基因型酶切产物为203bp+138bp+126bp+71bp 4个片段（后者太小不易观察）。因此电泳后TT基因型电泳条带为274bp，CC基因型电泳条带为203bp，TC基因型电泳条带为274+203bp，各型均同时有138/126bp的小带出现（图1）。随机抽取约10%的样本进行重复测量，一致率为100%。

2.2 EH组及对照组CYP11B2基因（-344T/C）位点基因型分布的H-W平衡检测

实验结果显示，EH组和对照组人群CYP11B2基因（-344）位点均检测出有 TT、TC 和CC等3种基因型，2组的基因型频率均符合Hardy-Weinberg平衡。

2.3 EH组与对照组等位基因频率和基因型的分布特点

表1示，2组间基因型分布有统计学差异（P＜0.05），2组间等位基因频率分布有统计学差异（P＜0.05）。而各组中不同性别无统计学意义 （P＞0.05）。

2.4 高血压患者不同基因型获得性因素的比较

把体重、尿酸、血糖、胆固醇、甘油三酯及BMI等指标放在一起，用Logistic回归分析结果显示CT杂合子和CC纯合突变基因型与野生TT基因型比较，差异均无意义（P＞0.05）。

表1 醛固酮合成酶基因CYP11B2（-344T/C）基因型频率与等位基因频率分布 n(%)

表2 高血压组与对照组的获得性因素比较

2.5 原发性高血压组与对照组获得性因素的比较

表2示，高血压组的尿酸、血糖、甘油三酯、体重指数明显高于对照组，且两者之间的差异主要由女性引起（P＜0.05）。

3 讨论

醛固酮合成酶（CYP11B2）基因为高血压的候选基因之一，该基因的-344C/T基因多态性与高血压的关系尚无定论，与获得性因素之间的关系目前报道较少。

本研究对贵州汉族原发性高血压人群进行了研究，结果显示，高血压组和对照组之间CYP11B2基因-344 T/C基因型构成比和等位基因频率的差异均有统计学意义 （P＜0.05），这提示，CYP11B2基因（-344 T/C）基因多态性可能和贵州原发性高血压的发病有密切相关性，这与日本和国外部分研究一致[5]，与国内部分相关研究一致[6～8]。

众所周知，获得性因素在高血压的发病中起着重要的作用，由于生理的特殊性，女性高血压与男性有不同的特点。生理剂量的雌激素具有扩血管作用、维持正常血脂及胰岛素敏感作用，还具有抗氧化的作用，而氧化应激和血脂紊乱及肥胖有明显的关系。女性高血压发病在绝经后明显高于男性，与女性内分泌变化相关，部分妇女雌、孕激素调节不稳定可导致肾素分泌调控机制不正常而导致高血压[9]。更年期女性患者体内较低的雌激素水平、较高的孕激素水平以及性激素比例失衡，在高血压的发生发展过程中起着促进作用[10]。本研究提示，贵州汉族高血压患者CYP11B2基因（-344 T/C）多态性没有显著影响获得性因素的变化，而女性高血压患者明显受获得性因素影响。这可能提示我们在日常生活中，特别是绝经后女性，在失去雌激素的保护后，控制体重，低嘌呤、低脂、低糖饮食对预防高血压的发生具有重要的意义。

通过本研究提供了贵州汉族CYP11B2基因-344 T/C多态性与原发性高血压发病的相关依据，同时也表明了获得性因素对高血压的影响，更进一步显示了高血压发病的多重机制[11]

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