NF-kB在B细胞淋巴瘤组织中的表达及临床意义

赵亚君赵腾蛟李明玉谭亚纳李红玲

作者单位：730000 兰州1甘肃中医药大学临床医学院；2甘肃省人民医院肿瘤内科

临床经验

NF-kB在B细胞淋巴瘤组织中的表达及临床意义

赵亚君1赵腾蛟1李明玉1谭亚纳1李红玲2

作者单位：730000 兰州1甘肃中医药大学临床医学院；2甘肃省人民医院肿瘤内科

目的探讨核转录因子-κB（nuclear factorκB，NF-κB）在B细胞淋巴瘤组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化法检测42例B细胞淋巴瘤组织（B细胞淋巴瘤组）及20例淋巴结反应性增生组织（对照组）中NF-κB蛋白的表达。分析NF-κB表达与B细胞淋巴瘤临床病理特征的关系。结果NF-κB在B细胞淋巴瘤组织和淋巴结反应性增生组织中的阳性表达率分别为78.57%（33/42）和20%（4/20），两组比较差异有统计学意义（P<0.001）。NF-κB的表达与恶性程度、临床分期有关（P<0.05）；而与年龄、性别、乳酸脱氢酶（LDH）水平无关（P>0.05）。结论NF-κB在B细胞淋巴瘤发生、发展中起重要作用，有望成为判断淋巴瘤患者预后的指标。

淋巴瘤；核转录因子-κB；免疫组织化学；表达；临床意义

淋巴瘤是淋巴造血系统常见的恶性肿瘤，是一种异质性疾病，根据WHO（2008）造血和淋巴组织肿瘤分类将其分为霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤［1］。B细胞淋巴瘤是一组发病率和恶性程度高的非霍奇金淋巴瘤。随着基因组学和分子生物学等研究的深入开展，部分淋巴瘤的发病机制已明确，靶向治疗的研究和临床新药的应用使其具有部分治愈的可能，但仍有部分淋巴瘤易复发，难以治愈。研究表明，核转录因子-κB（nuclear factorκB，NF-κB）信号通路在淋巴瘤的发生中扮演着重要的角色。NF-κB是一类广泛存在于细胞中的多显性核转录因子，属于Rel基因家族。其激活参与炎症、细胞增殖、细胞凋亡等基因的调节。在肿瘤细胞中具有调控肿瘤细胞凋亡和免疫活性的作用［2］。本研究利用免疫组化法检测NF-κB在B细胞淋巴瘤组织中的表达情况，探讨NF-κB的表达与B细胞淋巴瘤临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料

收集2012年8月至2015年5月甘肃省人民医院肿瘤内科确诊的B细胞淋巴瘤42例为B细胞淋巴瘤组，其中男性22例，女性20例；年龄16～78岁，中位年龄47岁。选取反应性增生淋巴组织20例为对照组，中位年龄50岁。淋巴瘤的诊断符合《淋巴瘤病理诊断》标准［3］，全组病例资料完整。按照2008年WHO淋巴瘤相关病理分型、临床分期及恶性程度进行分类，其中病理分型：弥漫性大B细胞淋巴瘤27例，边缘区淋巴瘤7例，套细胞淋巴瘤1例，Burkitt淋巴瘤2例，滤泡性淋巴瘤5例；临床分期：Ⅰ～Ⅱ期16例，Ⅲ～Ⅳ期26例；恶性程度：侵袭性淋巴瘤30例，惰性淋巴瘤12例。所有患者标本采集已征得医院伦理委员会批准及患者知情同意，病理活检前均未进行抗肿瘤治疗。所有组织标本均经过10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋切片，片厚4μm，行HE和免疫组化染色。

1.2 主要试剂

鼠抗人NF-κB单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司（北京中杉金桥生物技术公司进口分装），Envision两步法免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物技术公司，Envision两步法免疫组化染色按试剂盒说明书操作，NF-κB工作浓度为1∶100，所有切片均采用微波修复抗原。以PBS替代一抗作阴性对照。

1.3 免疫组化染色

将片厚为4μm石蜡切片脱蜡至水，3%过氧化氢10 min阻断内源性过氧化物酶，胰酶修复20 min，10%山羊血清室温封闭20 min，NF-κB抗体（1∶100）于湿盒中4℃冰箱过夜，滴加二抗、三抗室温下湿盒内孵育各20 min，DAB显色，苏木精复染，常规脱水，封片。

1.4 结果判定

采用双盲法进行计数。结果判定由两位资深病理学专家进行双盲法评估。细胞计数在高倍镜视野（×400）下，每张切片上随机选择5个视野，每个视野计数100个细胞数，每个标本计数3张切片。NF-κB的表达以阳性细胞百分率及染色强度之积进行判定。NF-κB：细胞核和（或）细胞质内出现明显棕黄色颗粒为阳性细胞。阳性细胞百分率：≤5%计0分，6%～25%计1分，26%～50%计2分，≥51%计3分；无阳性细胞计0分。细胞染色强度：无染色计0分，弱染色（浅黄色）计1分，中等染色（金黄色）计2分，强染色（棕黄色）计3分。两项得分相乘：0分为阴性（-），1～9分为阳性，其中1～3分为弱阳性（+），4～6分为中等阳性（++），7～9分为强阳性（+++）。

1.5 统计学分析

应用SPSS 17.0软件进行统计学处理。组间比较用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NF-κB在B细胞淋巴瘤组织中的表达

在显微镜（×400）下观察细胞形态及肿瘤细胞的病理变化。NF-κB阳性表达位于细胞核和细胞质，在细胞质内明显表达，呈棕黄色或者棕褐色。B细胞淋巴瘤组NF-κB的阳性表达率为78.57%，对照组为20%，两组比较差异有统计学意义（P<0.001）。见图1、表1。

图1 NF-κB在B细胞淋巴瘤组织中的表达（Envision×400）

表1 NF-κB在B细胞淋巴瘤组和对照组中的表达［n（%）］

2.2 NF-κB的表达与B细胞淋巴瘤患者临床病理特征的关系

NF-κB的表达与B细胞淋巴瘤患者临床分期及恶性程度有关（P<0.05），而与性别、年龄、乳酸脱氢酶（LDH）水平无关（P>0.05）。见表2。

3 讨论

肿瘤的发生与转移是癌基因与抑癌基因共同参与调节的一个复杂过程，通过肿瘤发生与转移相关基因过度表达，以及一系列基因产物的参与，对肿瘤发生与转移全过程进行调控［4］。NF-κB是一类普遍存在的、通常以同源或者异源二聚体的形式存在的核转录因子，其家族共有5个成员，包括p65（Rel A）、c-Rel、Rel B、p50/p105（NF-κB1）、p52/p100（NF-κB2），其中最常见的形式为p50/p65组成的二聚体［5］，它可引起基因转录激活。细胞在非刺激状态下，NF-κB与它的抑制物核转录因子抑制因子（IKB）结合，以一种未被激活的形式存在于细胞质，当细胞受到损伤等刺激后，IKB降解，活性NF-κB释放并转移至细胞核，调节靶基因的转录活性，故细胞核的NF-κB蛋白的表达可认为是NF-κB激活的标志［6］。激活的NF-κB可促进凋亡基因的转录，从而导致肿瘤细胞的增生。多数研究认为，NF-κB调节凋亡可能通过以下途径：⑴通过调节细胞S周期，间接影响细胞对凋亡信号的反应；⑵通过和一些蛋白相互作用影响凋亡；⑶直接调节凋亡基因［7］。

临床上对于NF-κB在其他肿瘤组织中的表达及临床意义已有报道。秦阳等［8］检测100例甲状腺癌组织、30例甲状腺腺瘤组织、30例结节性甲状腺肿组织和30名健康人甲状腺组织中的NF-κB p50蛋白阳性表达情况，结果显示NF-κB p50蛋白的阳性表达率分别为73%、30%、33.33%和6.67%，NF-κB p50蛋白在甲状腺非癌组织中的表达率显著低于癌组织。Sasaki等［9］和李亚平等［10］对胃癌组织进行研究，发现NF-κB阳性表达与肿瘤大小、淋巴结侵犯、肿瘤侵犯深度及腹腔转移有关。另有学者［11］研究发现NF-κB在乳腺癌细胞和癌组织中呈高表达，认为NF-κB在监测乳腺癌的发生和发展方面发挥重要作用。也有学者［12，13］研究发现卵巢癌细胞及其组织NF-κB/p65阳性表达率明显高于良性上皮细胞肿瘤和交界性肿瘤。董佑红等［14］检测62例弥漫性大B细胞淋巴瘤组织中NF-κB的水平，结果阳性表达率为63%（39/62）。上述结果说明NF-κB阳性表达与肿瘤生长、侵犯及转移相关。目前，在临床研究中，有学者已将NF-κB作为妇科肿瘤治疗的重要目标，如Mabuchi等［15］联合应用顺铂和NF-κB的抑制剂（SN50）治疗卵巢癌，结果发现通过阻断NF-κB激活，有利于细胞凋亡，从而增强顺铂化疗作用，提高疗效。

本研究通过免疫组化检查发现NF-κB在B细胞淋巴瘤组织中呈高表达，阳性表达率为78.57%。进一步分析发现，随着B细胞淋巴瘤的临床分期越晚及恶性程度越高，NF-κB的阳性表达率越高（P<0.05），而与性别、年龄、LDH水平无关（P>0.05），表明NF-κB的表达与B细胞淋巴瘤的发生、发展有关。本文未对以上患者进行随访，中位生存期未知，但发现NF-κB与临床分期、恶性程度有关，从而证实了NF-κB阳性表达可以作为B细胞淋巴瘤患者不良预后的指标，有助于指导个体化药物治疗。

综上所述，NF-κB与淋巴瘤的发生、发展密切相关，NF-κB有望成为判断淋巴瘤预后新的标志物。为进一步了解NF-κB家族蛋白在淋巴瘤发生、发展中的作用及临床应用打下了基础。

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［2015-10-09收稿］［2015-10-23修回］［编辑 江德吉］

Expression of NF-κB in B cell lymphoma carcinoma and its clinical significance

Zhao Yajun1，Zhao Tengjiao1，Li Mingyu1，Tan Yana1，Li Hongling2（1Gansu University of Traditional Chinese Medical College；2Department ofMedical Oncology，Gansu Provincial People′s Hospital，Lanzhou 730000，P.R.China）

Li Hongling.E-mail：15002681915@163.com

ObjectiveTo investigate the expression of nuclear transcription factorκB（NF-κB）in B cell lymphoma，and analyze possible relationships between expression and clinicopathological characteristics.MethodsImmunohistochemistry was used to detect NF-κB protein expression in tissues from 42 patients with B cell lymphoma and 20 patients with reactive lymph node hyperplasia.Relationships between NF-κB expression and clinicopathological characteristics were analyzed.ResultsThe rate of NF-κB-positive tissue was significantly higher among patients with B cell lymphoma（78.57%，33/42）than among those with reactive lymph node hyperplasia（20%，4/20；P<0.001）.Level of NF-κB protein expression correlated with Ann-Arbor clinical stage and histology grade（P<0.05），but not with sex，age or lactate dehydrogenase（LDH）level（P>0.05）.ConclusionNF-κB plays an important role in the development of B cell lymphoma，and it may serve as a prognostic indicator.

Lymphoma；Nuclear factor kappa B；immunohistochemistry；Expression；Clinical significance

R733.4

A

1674-5671（2015）06-04

10.3969/j.issn.1674-5671.2015.06.08

国家自然科学基金资助项目（30960438，81260342，81560498）；兰州市科技计划项目（2009-1-56）

李红玲。E-mail：15002681915@163.com