端粒酶、人类表皮生长因子受体2和c-myc基因在宫颈病变中的表达及与高危型人乳头瘤病毒感染的相关性

齐丽敏，王雪，孙波，张学玲，冯晔，公春兰，王丽君，张清涛

(1.沧州医学高等专科学校助产教研室，沧州 061001 2.河北沧州市人民医院妇产科)

·论著·

端粒酶、人类表皮生长因子受体2和c-myc基因在宫颈病变中的表达及与高危型人乳头瘤病毒感染的相关性

齐丽敏1，王雪1，孙波2，张学玲2，冯晔1，公春兰1，王丽君1，张清涛1

(1.沧州医学高等专科学校助产教研室，沧州 061001 2.河北沧州市人民医院妇产科)

目的 研究端粒酶基因(hTERC)、人类表皮生长因子受体2(HER-2)基因和c-myc基因在不同程度宫颈病变的表达情况及与高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染的相关性。方法 选取236例就诊或筛查患者，行TCT、HPV、hTERC、HER-2和c-myc基因检测。对任一阳性患者行阴道镜下多点活检，进行病理检测。结果 ①236例中有108例进行宫颈活检，在正常/慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ及浸润性子宫颈癌中hTERC阳性表达率分别为16.0%、39.5%、64.5%、100.0%；HER-2阳性表达率分别为4.0%、20.9%、45.2%、100.0%；c-myc阳性表达率分别为8.0%、30.2%、54.8%、100.0%；HPV阳性率分别为40.0%、67.4%、80.6%、100.0%。②不同病理结果之间hTERC、HER-2和c-myc阳性率比较差异均有统计学意义(P<0.05)，随着病理结果的严重程度，hTERC、HER-2和c-myc的阳性率逐渐增加(P<0.01)。③随着宫颈病变程度的加深，HPV感染者中hTERC、HER-2和c-myc基因的阳性扩增率也增高(P<0.05)。结论 hTERC、HER-2、c-myc基因的阳性表达率与宫颈病变程度、高危型HPV感染密切相关，在宫颈癌的发生发展中可能起着重要作用。

宫颈肿瘤; 人乳头瘤病毒; 基因,myc; 基因,erbB-2

宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤，它的发生发展虽然已被证实与高危型人乳头瘤病毒(HPV)持续感染有关，但是宫颈癌发病率比HPV在人群中的感染率要低得多，意味着除了HPV感染外还有其他的机制在宫颈癌发生与进展中发挥着作用。随着对分子水平上研究的不断深入，越来越多的报道发现宫颈癌的发生、发展可能与一些基因异常相关。本研究采用荧光原位杂交(FISH)技术检测人端粒酶基因(hTERC)、HER-2基因和c-myc基因在宫颈癌发生发展中的异常扩增情况及与HPV感染相关性进行初步研究。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取沧州市人民医院2013年9月至2014年5月妇科门诊就诊及机会性筛查患者236例，年龄25～65岁,平均年龄(43.3±6.5)岁。排除已经阴道镜活检确诊的宫颈上皮内瘤变(CIN)者和已治疗过的患者。对所有患者行新柏氏液基细胞学(TCT)、HPV、hTERC、HER-2和c-myc基因检测。对任一阳性患者行阴道镜下多点活检，进行病理检测。其中正常/慢性宫颈炎25例，CINⅠ 43例，CINⅡ 18例，CINⅢ 13例，宫颈癌9例，所有患者均无阴道镜活检史和治疗。

1.2 方法

1.2.1 TCT检测 使用专用取样刷采集宫颈脱落细胞，将可以分离的采集器刷头置于细胞保存液之中，4 ℃冰箱保存，采用新柏式2000全自动制片机进行程序化处理。按照2001年国际癌症协会(NCI)推荐的TBS分级标准进行阅片。

1.2.2 HPV检测 使用专用宫颈脱落细胞采集器在宫颈外口顺时针旋转3～5圈，将刷子置入3 mL宫颈细胞保存液中，放入4 ℃冰箱保存。检测23种HPV基因型，包括18种高危型16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、83和5种低危型6、11、42、43、81。所有操作过程和结果判读严格按照亚能生物技术有限公司提供试剂盒说明进行。

1.2.3 FISH检测 本实验使用的探针购自广州安必平科技有限公司。严格按照试剂盒说明进行操作。用OLYMPUS B×51 荧光显微镜在DAPI/FITC/TRITC三色滤光镜激发下观察脱落细胞荧光杂交信号，用Video2.0 Test公司提供的FISH分析软件进行图像分析。阳性判断标准: 单个间期细胞核中绿色信号≥2个，红色信号>2个，则表示hTERC、HER-2基因有扩增，因无对照探针，单个间期细胞核中红色信号>2个则表示c-myc基因有扩增。

1.3 统计学处理 采用SPSS18.0 软件处理数据，组间率的比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同病理结果中hTERC、HER-2和c-myc表达情况 hTERC、HER-2和c-myc阳性率在不同病理结果之间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。随着病理结果的严重程度，hTERC、HER-2和c-myc的扩增阳性率逐渐增加(P<0.01)，见表1。

表1 不同病理结果中FISH检测hTERC、HER-2和c-myc的阳性表达[例(%)]

2.2 高危型HPV感染与hTERC、HER-2和c-myc基因扩增的相关性 108例不同病理结果中HPV感染率分别为40.0%、67.4%、80.6%和100.0%，随着病理分级严重程度HPV感染率逐渐增高(P<0.05)，见表2。在73例HPV阳性患者中hTERC、HER-2和c-myc基因异常扩增在HPV感染组与非感染组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)，可见，三种基因的扩增主要发生在HPV感染阳性患者中，见表3。

3 讨论

3.1 hTERC、HER-2和c-myc基因在不同宫颈病变中的异常扩增情况 国外的研究发现，人类hTERC基因的扩增可阻止细胞凋亡，因而可导致肿瘤产生[1-2]。随着对hTERC基因在宫颈癌的发生发展中的深入了解，hTERC可作为宫颈癌筛查的重要指标已经得到了大量的实验验证[3-4]。本研究结果中，hTERC基因在CIN组和宫颈癌组扩增明显高于慢性宫颈炎组，且CIN各组与宫颈癌组比较差异有统计学意义(P<0.05)，提示hTERC基因异常扩增与宫颈癌的发生发展有着重要的联系，结果与Liu等[5]报道一致。

表2 不同病理结果HPV感染情况及HPV阳性与hTERC、HER-2和c-myc基因扩增情况[例(%)]

表3 HPV感染阳性或阴性时hTERC、HER-2和c-myc基因扩增的情况

在正常情况下，HER-2 基因处于非激活状态。当机体受某些因素影响后，其即活化成为具有转化活性的细胞癌基因，过度表达则可导致细胞过度增殖和表型向恶性转化。HER-2的激活、扩增及其表达产物在肿瘤的发生、发展过程中起着极其重要的作用[6]；HER-2被确认为一种新的肿瘤标记物在宫颈癌的研究中报道不多。从本实验研究结果来看，HER-2在宫颈癌中的阳性表达比慢性炎症和CIN中明显增高(P<0.05)，提示HER-2基因的表达在宫颈癌的发生、发展过程中起着重要的作用，研究结果与有关研究[7-8]的报道一致。

c-myc是一种转录调控基因，是人类肿瘤中最常见的高表达的癌基因之一，在细胞的增殖、分化、基因的不稳定性及细胞的恶性转化中起着重要的调节作用[9]。自发现以来备受人们重视，然而在宫颈癌的研究报道中较少见，且对c-myc用来作为宫颈癌筛查还存在争议[10]。本研究结果显示，c-myc基因的阳性表达率随病理学分级严重程度而增高(P<0.05)，提示c-myc可能参与了宫颈癌的发生及发展，与Sokolova[11]报道一致。

3.2 hTERC、HER-2和c-myc基因异常扩增与HPV感染的相关性 端粒酶的激活是高危型HPV感染宫颈组织后CIN向宫颈浸润癌发展过程中比较关键的步骤之一，HPV E6蛋白上调内源性人端粒酶逆转录酶水平而激活端粒酶是限速步骤。而hTERT是原癌基因c-myc的下游靶基因，c-myc基因可直接结合到多种细胞hTERT基因的核心启动子5'端的E-box上，使细胞获得无限增殖能力，故认为高危型HPV感染可能和c-myc起到协同致癌作用。HER-2高表达是通过HPV E6调节的，推测HER-2基因转录或翻译后的调控可能在宫颈癌发生中起一定的作用。本研究显示，hTERC、HER-2及c-myc扩增率在HPV阳性者中显著高于HPV阴性者，hTERC、HER-2及c-myc扩增与HPV感染相关，与以往研究结果一致[12-13]。

综上所述，hTERC、HER-2及c-myc基因的异常表达可能参与了宫颈癌的发生、发展过程，改变了细胞内的基因调控作用，从而使细胞更易于向恶性表型转化，促进了宫颈癌的发生、发展。

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The correlation between the hTERC,HER-2 ,c-myc gene expression in cervical lesion and HPV infection

Qi Limin*,Wang Xue,Sun Bo,Zhang Xueling,Feng Ye,Gong Chunlan,Wang Lijun,Zhang Qingtao

(*Staff room of Midwifery,Cangzhou Medical College Cangzhou,061001,China)

Objective To investigate the expression of hTERC, HER-2 and c-myc gene in the different cervical lesions and analyze the correaltion between the hTERC,HER-2 and c-myc gene expression and HPV infection.Methods A total of 236 outpatients were randomly selected from September 2013 to May 2014 at Gynecology in people hospital of Cangzhou city.The detection of TCT,HPV,hTERC,HER-2 and c-myc were conducted,and every patient with positive result was underwent colposcopic examination and histological evaluation.Results ①108 cases according to the cervical biopsy， the positive rate of hTERC were 16.0%,39.5%,64.5% and 100% respectively,the positive rates of HER-2 were 4.0%,20.9%,45.2%,100.0%，respectively,and the positive rates of c-myc gene test were 8.00%,30.2%,54.8%,100.0%，respectively ,and high risk HPV infection rate were 40.0%,67.4%,80.6%,100.0% respectively in the CINⅠ,CINⅡ-Ⅲ and cervical cancer in normal/chronic inflammation.②The positive rate of hTERC,HER-2 and c-myc were statistically differences among the different pathologic results (P<0.05),With the increase of pathological grade，the positive rates of hTERC,HER-2 and c-myc were also increased(P<0.01).③With the deepening of cervical lesions,the positive rate of hTERC,HER-2 and c-myc was also increased in the HPV-infected persons(P<0.05).Conclusion The positive expression rate of hTERC,HER-2 and c-myc gene are closely correlated with severity of cervical lesions and high-risk HPV infection,which may play an important role in the development of cervical cancer.

Uterine cervical neoplasms; Human papillomavirus; Genes,myc ; Genes,erbB-2

沧州市科学技术局计划项目(141302003)

齐丽敏，主治医师，讲师，Email:mymyqiqi@163.com

R737.33

A

10.3969/J.issn.1672-6790.2015.02.017

2014-11-12)