非特异性自身抗体致新生儿溶血病的血清学检测分析1例

李榕，张晓丽，徐晶

(南昌市血站,江西 南昌330025)

新生儿溶血病(HDN)是临床引起新生儿病理性黄疸主要原因之一，常因母婴血型不合所导致，多见于ABO血型系统和Rh血型系统，其中，Rh血型系统新生儿溶血病伴随的临床症状较重，但ABO和RhD以外血型抗体引起的HDN在国内也时有报道[1-3]，鲜见非特异性自身抗体引起HDN的报道。最近，我们在工作中发现了1例由非特异性自身抗体引起的HDN，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 临床资料 患儿，男，出生第1天即出现重度溶血；产妇，25岁，无输血史，孕产1次。

1.2 仪器和试剂 血型血清学用离心机 (长春博研科学仪器有限责任公司TD-3A型)，日本久保田离心机(KA-2200)，水浴恒温震荡器(江苏金坛中大仪器厂 SHA-C)。 血型定型卡(厂家：GRIFOLS)，Rh 血型抗原分型卡(厂家：GRIFOLS)，Coombs 卡(厂家：GRIFOLS)，ABO标准红细胞(上海血液生物医药有限责任公司)，筛选细胞(厂家：BIO-RAD)，谱细胞(厂家：BIO-RAD)，试剂均在有效期内使用。

1.3 检测方法 血型鉴定，直接抗人球蛋白试验，游离抗体试验，不规则抗体筛查与鉴定，按《全国临床检验操作规程》[4]及GRIFOLS微柱凝胶法说明书操作。用产妇血清，患儿血清及患儿红细胞放散液进行抗体筛查试验[5]，再利用谱细胞进行抗体鉴定。产妇血清采用倍比稀释法，以试管中出现凝集强度达到1+的最后一管稀释倍数的倒数作为本次测定的抗体效价。采用ZZAP(二硫苏糖醇+蛋白水解酶)处理产妇红细胞，用处理后直接抗人球蛋白试验阴性红细胞进行自身吸收3个循环，自身吸收后血清做抗体筛查试验[6-8]及抗体鉴定试验。

2 结果

2.1 产妇

2.1.1 血型 O，CcDee。

2.1.2 抗体筛选 产妇血清与Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ筛选细胞进行试验，结果 与3个细胞都呈阳性反应2+。红细胞自身吸收3个循环后，血清抗体筛查试验为阴性。见表1。

表1 抗体筛查试验

2.1.3 放散前直接抗人球蛋白试验 4+。ZZAP处理后，直接抗人球蛋白试验结果为阴性。见表2。

表2 直接抗人球蛋白试验

2.1.4 抗体鉴定 产妇血清及自身吸收后血清与11个谱细胞进行实验，结果见表3。

2.1.5 抗体效价 用产妇倍比稀释的血清与标准O细胞进行盐水及抗人球蛋白试验，效价分别为4和256。

2.2 患儿

2.2.1 血型 O，CcDee。

2.2.2 抗体筛选 患儿血清及红细胞放散液分别与Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ筛选细胞进行实验，结果3个细胞都呈阳性反应。见表1。

2.2.3 直接抗人球蛋白试验 4+。见表2。

2.2.4 患儿血清及红细胞放散液抗体鉴定 患儿血清及患儿红细胞放散液与11个谱细胞进行实验，结果见表3。

2.2.5 游离试验 患儿血清与A，B细胞3+，与O细胞2+。

2.3 父亲

2.3.1 血型 O，CcDee。

表3 产妇血清、患儿血清及患儿红细胞放散液抗体鉴定结果

3 讨论

新生儿溶血病是由于血型不合引起的同种被动免疫性疾病。引起HDN的血型抗体，主要是ABO系统，其次为Rh系统，其他如MNS，Kell，Duffy，Kidd等血型系统不合引起的HDN极为少见。在HDN中，ABO血型系统引起的溶血病约85%，Rh血型系统引起的溶血病约14.6%[9]。血型不合妊娠是引起HDN的主要原因，HDN除ABO系统外很少发生在第一胎。这是因为自然界中除ABO系统外少有与人类红细胞上血型抗原相同或相似的抗原存在，以至孕妇血清中血型系统抗体很少存在天然抗体或免疫性抗体。只有在输血、妊娠流产时刺激母亲的免疫系统产生抗体，以后再妊娠含该抗体的胎儿时才可能发生HDN[10，11]，一般都是因为父亲遗传给胎儿的抗原恰为母亲所缺少引起的。胎儿红细胞通过胎盘进入母体可刺激母体产生免疫性抗体，此抗体再通过胎盘进入胎儿血液循环，使胎儿红细胞溶血。而此患儿ABO，Rh血型与父母都相同，排除了ABO-HDN和Rh-HDN发生的可能性。根据患儿红细胞放散液中抗体与11个谱细胞反应，凝集强度相同，都为4+；鉴于产妇无输血史，采用ZZAP处理红细胞后进行3个循环的自身吸收，产妇红细胞直接抗人球蛋白试验阴性，血清抗体筛查试验亦为阴性，表明该抗体为非特异性的自身抗体，未合并同种抗体。由此可见，非特异性抗体也能通过胎盘进入胎儿血液循环，引起新生儿溶血病。该患儿起病急，黄疸迅速加重，出生一天总胆红素便达到351μmol/L，说明非特异性抗体引起新生儿溶血病也不容忽视，应引起大家的高度重视。

[1]孙国栋,尹志柱,张彦平,等.抗-Ce、抗-e致新生儿溶血病1例[J].中国输血杂志,2006,19(2):147-148．

[2]郭萍,杨通汉,姚富柱,等.IgG抗-M引起新生儿溶血病1例[J].中国输血杂志,2007,20(4):418．

[3]骆宏,莫春妍,张润青,等.Rh血型系统新生儿溶血病的实验诊断及特殊反应分析[J].实验与检验医学,2012,30(4):334-336.

[4]叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程 [M].第3版,南京:东南大学出版社,2006:246-270．

[5]AABB．METHOD 2-20．Dissociating IgG by chloroquine for antigen testing of red cells with a positive DAT，AABB Technical Manual[S].16th edition，Bethesda，2005：894-895．

[6]孙国栋.带有温自身抗体病人体内的同种抗体的检测[J].国外医学输血及血液学分册,2001,24(4):344-346．

[7]Das SS,Chaudhary R.Utility of adsorption techniques in serological evaluation of warm autoimmune haemolytic anaemia[J].Blood Transfus,2009,7(4):300-304.

[8]Leger RM1,Garratty G.Evaluation of methods for detecting alloantibodies underlying warm autoantibodies[J].Transfusion,1999,39(1):11-16.

[9]薛辛东.杜立中.儿科学[M].北京:人民卫生出版社,2005:139.

[10]付涌水.临床输血[M].第3版.北京:人民卫生出版社,2013:196-198.

[11]杨乾坤,海宝宏.非ABO RhD血型抗体引起新生儿溶血病临床观察[J].医药论坛杂志,2009,30(5):96-97.