微柱凝胶法抗人球蛋白试验检测孕妇IgG抗体效价诊断新生儿溶血病的应用研究

陈晓军，艾 清

（1.长春市妇产医院 检验科，吉林 长春 130042；2.吉林大学第一医院 检验科）

微柱凝胶法抗人球蛋白试验检测孕妇IgG抗体效价诊断新生儿溶血病的应用研究

陈晓军1，艾 清2＊

（1.长春市妇产医院 检验科，吉林 长春 130042；2.吉林大学第一医院 检验科）

＊通讯作者

微柱凝胶法免疫检测技术是20世纪90年代进入我国并逐步广泛应用于临床的实验室项目检测。抗人球蛋白试验是目前对IgG抗体检测国际公认的最经典、可靠的实验室方法。由于传统的间接抗人球蛋白试验（试管法）操作繁琐、时间长、重复性不好等缺点，一直不能被临床常规应用。微柱凝胶抗人球蛋白试验比试管法抗人球蛋白试验敏感性高10倍左右［1］，且方法简单、耗时少、结果可重复、试验流程标准化等优点。本文就微柱凝胶抗人球蛋白试验与试管法抗人球蛋白分别对225例怀孕3个月以上孕妇的血清进行IgG抗体效价检测，现报道如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 检测对象 2009年8月至2010年6月期间，怀孕3个月以上到本院进行产前检查的孕妇225例。年龄28-38周岁，ABO血型为O型的孕妇，丈夫ABO血型均为A型、B型、AB型。

1.1.2 主要试剂 微柱凝胶抗人球蛋白检测卡（长春博迅生物技术有限责任公司生产）。广谱抗人球蛋白试剂（长春博德生物技术有限责任公司生产），2-Me试剂（长春博德生物技术有限责任公司生产）。

1.1.3 主要仪器 TD-3A型血型血清学用离心机和FYQ型免疫微柱孵育器（长春博研科学仪器有限责任公司生产）。光学显微镜（日本Olympus CX-31）。

1.2 方法

1.2.1 标本处理 取试管一支，加受检孕妇血清0.2ml及2-Me试剂0.2ml，加塞混合，置37℃水浴30min，充分破坏血清中IgM抗体，另取6支干净试管，第1支试管加处理后血清50μl和350μl生理盐水混匀，第2－6支试管分别加入200μl生理盐水，从第1支试管中吸取200μl混合液加入第2支试管中混匀，再从第2支试管中吸取200μl混合液加入第3支试管中混匀，依次倍比稀释。第1－6支试管稀释倍数依次为：1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512。

1.2.2 采用微柱凝胶抗人球蛋白试验对受检孕妇血清进行IgG抗体效价检测：取出微柱凝胶抗人球蛋白检测卡，标记标本号，6孔中分别加入与该孕妇丈夫ABO血型同型的0.8%红细胞悬液50μl，从第1－6支试管中各取50μl混合液分别加入微柱凝胶抗人球蛋白检测卡对应的孔中，置37℃孵育箱中孵育15min后，离心5min，肉眼观察结果。

1.2.3 采用试管法抗人球蛋白试验对同一受检孕妇血清进行IgG抗体效价检测：取六支标记好的试管，六管中分别加入与该孕妇丈夫ABO血型同型的2%红细胞悬液100μl，用生理盐水反复洗涤4次，再对应加入上述第1－6支试管中混匀液100μl，37℃水浴60min后，在反复洗涤4次，在六支试管中分别加入广谱抗人球蛋白试剂各100μl，离心1min（1 000 r／min），轻轻摇动试管，观察血凝结果。

2 结果

结果判定：以凝集强度≥1＋判定为阳性结果，凝集强度＜1＋判定为阴性结果。注：由于抗体效价1∶4、1∶8在诊断新生儿溶血病中的意义不明确，故本实验研究将抗体效价＜1∶16视为阴性［2］。

两种方法的检测结果见表1。从表可见：微柱凝胶抗人球蛋白试验较试管法抗人球蛋白试验灵敏度高，且滴度越高，差异越明显。

3 讨论

母婴ABO血型不合是新生儿溶血病的重要原因，对ABO血型为O型的孕妇，丈夫ABO血型为A型、B型、AB型者，在孕期进行IgG抗体效价检测是非常有必要的，对有异常者（目前临床普遍认为IgG抗体效价≥1：64有意义［2］），可以早发现早治疗，可以有效的预防及减少由母婴ABO血型不合引起的新生儿溶血病的发生。

表1 225例微柱凝胶法与试管法抗人球蛋白（IgG）抗体效价检测结果比较

传统使用的试管法抗人球蛋白试验操作步骤烦琐、时间长，不能标准化、人为因素干扰大等缺点，很难在临床推广应用。微柱凝胶抗人球蛋白试验是建立在传统的试管法抗人球蛋白试验基础之上的一种新方法，在凝胶中进行反应，利用红细胞的可变形性的特点，通过离心力作用使未经抗人球蛋白桥联的单个红细胞可通过凝胶介质的原理，用以检测血清中的IgG抗体，并采用目测直接观察到检测结果。且对阴性、阳性结果一目了然，避免了试管血凝法凭经验判断结果的错误。抗人球蛋白试验是目前国际公认的最可靠的不完全抗体的检测方法，由于繁琐的操作程序一直不能实现临床常规化，微柱凝胶抗人球蛋白试验法彻底改变了试管法抗人球蛋白试验的弊端，其无需繁琐的洗涤过程、操作方法简单、结果准确、重复性好、标本用量少（减少操作污染的同时还节省患者的红细胞和血清，特别有利于新生儿及某些血液病标本量很少时的检测［3］）等优点已被临床广泛应用。

综上所述，微柱凝胶抗人球蛋白试验应用于孕妇IgG抗体效价检测是可行的。

［1］李 勇，杨贵贞.人类红细胞血型血清学实用理论与实验技术［M］.北京：中国科学技术出版社，1999：251.

［2］魏亚明，欧英贤.红细胞免疫抗体检查在输血及产前诊断中的应用［J］.中国输血杂志，2000，13（4）：266

［3］李 勇，马学年.实用血液免疫学血型理论与实验技术［M］.北京：科学出版社，2006：637.

1007－4287（2012）02－0330－02

2010－11－30）