强力感冒片指纹图谱的初步研究

鱼光强，高晔珩

榆林市食品药品检验所，陕西榆林719000

强力感冒片指纹图谱的初步研究

鱼光强，高晔珩△

榆林市食品药品检验所，陕西榆林719000

目的：研究强力感冒片的HLPC指纹图谱。方法：采用HLPC方法测定，色谱柱：KromasilODS-2 C18(250mm×4.6mm,5μm)；检测波长：327 nm；流速：1.0mL/min;柱温：25℃；乙腈-0.4%的磷酸水溶液(12:88)为流动相。结果：确定了7个共有峰，5批样品每批处理两份，10份样品指纹图谱的相似度均在0.9以上，绿原酸的线性范围为0.03～0.33μg/mL,加样回收率为101.27%。结论：所建立的HLPC简便可靠，可用于强力感冒片的质量控制。

强力感冒片；绿原酸；高效液相色谱法；指纹图谱

中药指纹图谱的建立能比较全面地反映中药所含化学成分的数量及种类，在现阶段多数中药有效成分没有明确的情况下，指纹图谱能有效表明中药质量，很大程度上提高中药质量检测水平［1］。强力感冒片为常用感冒药，主要由桔梗粉末以及金银花、连翘等中药提取物和对乙酰氨基酚按一定比例压制而成，其标准为《部颁标准二十册》［2］中收载的中西复方制剂，标准只对对乙酰氨基酚应用紫外分光光度法进行了定性、定量鉴别，作为复方制剂，中药组分按中医理论君、臣、佐、使配伍而成，中药成分同样起重要作用，由于成分过多，过去单一的质量检测控制，难以做到全面控制［3-5］。本研究采用高效液相色谱法，建立了5批强力感冒片样品，每批处理两份，建立了10份指纹图谱，比较了不同批次强力感冒片的相似度，以期提高强力感冒片的质量标准。

1 仪器与材料

1.1 仪器 高效液相色谱仪(岛津LC-20AD)；紫外检测器(岛津SPD-2A)；高效液相色谱工作站(CBM-102)；电子分析天平(BSA224S赛多利斯)；超纯水仪(重庆力德高端水处理设备有限公司，型号：LHP-18-Z)；甲醇(分析纯，国药集团化学试剂公司)；乙腈(色谱纯，国药集团化学试剂公司)；磷酸(色谱纯，国药集团化学试剂公司)。

1.2 对照品与样品 绿原酸(中国药物生物制品检验所，批号：110753-200413)；5批强力感冒片(榆林市食品药品检验所抽检科提供，批号：110700、110701、110705、110707、110709)。

1.3 方法与结果

1.3.1 色谱条件 色谱柱：Kromasi lODS-2 C18(250mm×4.6mm，5μm)；检测波长：327 nm；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；乙腈-0.4%的磷酸水溶液(12∶88)为流动相。

1.3.2 对照品溶液的制备 绿原酸对照品溶液制备：精密称定0.003 0 g，放置100mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，完全溶解，即得。

1.3.3 供试品溶液的制备 取强力感冒片5片，去除薄膜衣，研细，精密称取0.499 5 g，置100mL量瓶中，加50%甲醇适量，超声30分钟使溶解，放至室温，定容摇匀，滤膜(0.45μm)即得。

1.3.4 参照峰选择 绿原酸是该处方有效成分之一，在HLPC出峰时间适中稳定，图谱中峰面积大，所以选择绿原酸为参照峰［6］。

1.3.5 方法学考察

1.3.5.1 线性关系考察 精密吸取对照品溶液1、3、5、7、9、11μL注入液相色谱仪，以对照品进样量为横坐标，相应峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线回归方程，得绿原酸线性范围为0.03～0.33μg，回归方程为Y=12312X+1129.2(r=0.9999)。

1.3.5.2 精密度实验 精密吸取同一供试品溶液10μL，连续进样5次，记录色谱峰。以绿原酸峰为参照峰，各共有色谱峰保留时间的RSD值均在0.5%以下，各共有峰相对峰面积间的RSD值均在5.0%以下，根据峰面积计算，绿原酸的RSD为 0.7%，结果表明仪器精密度良好。

1.3.5.3 稳定性实验 精密吸取同一供试品溶液10μL，每间隔1小时进样1次，进样5次，记录色谱峰。以绿原酸峰为参照峰，各共有色谱峰保留时间的RSD值均在0.5%以下，各共有峰相对峰面积的RSD值均在5.0%以下，根据峰面积计算，绿原酸的RSD为1.3%，结果表明稳定性良好。

1.3.5.4 重复性实验 取同一批样品6份(批号：110700)，按供试品制备方法，记录指纹图谱。结果各共有色谱峰保留时间的RSD值均在0.5%以下，各共有峰相对峰面积的RSD值均在5.0%以下，根据峰面积计算，绿原酸的RSD为0.0%，结果表明该方法重复性良好。

1.3.5.5 回收率实验 取已知含量的样品(批号：110700)约0.25 g，精密称定，分别加入适量绿原酸，按“1.3.3”供试品溶液的制备方法操作，结果绿原酸平均加样回收率为101.27%，RSD为0.20%，结果表明本方法回收率良好，见表1。

1.3.5.6 绿原酸含量 绿原酸含量的测定按照“1.3.3”供试品溶液的制备方法制备并测定，见表2。

表1 加样回收率测定结果

表2 绿原酸含量测定结果

1.3.5.7 指纹图谱的建立 将各供试品(批号：110700、110701、110705、110707、110709)按供试品溶液制备方法，每批处理两份，注入液相色谱仪，测定各样品的HLPC指纹图谱，经比较分析，确定7个色谱峰为强力感冒片的共有峰，通过与对照色谱(110700-1)对照，峰高最高者为绿原酸，见图1。

图1 供试品指纹图谱

1.3.5.8 指纹图谱相似度计算 本研究采用《中药色谱指纹图谱相似度评价》软件(中国药典委员会出版2.0A版)，5批样品经该软件进行相似度评价。以110700-1图谱为参照图谱，中位数法，时间窗0.5，多点校正后自动匹配，生成对照图谱，5批样品处理的10份供试品溶液的相似度均在0.9以上，结果见表3、图2。

表3 指纹图谱相似度

图2 指纹图谱相似度

2 讨论

2.1 色谱条件的选择 本研究以乙腈-水、乙腈-0.2mol/L磷酸水溶液及乙腈-0.4mol/L磷酸水溶液为流动相进行实验，结果发现加磷酸的峰

形较好，以0.4%的出峰分离度较好，所以选择乙腈-0.4mol/L磷酸水溶液的流动相。样品溶液在不同波长240、280、327 nm检测，发现327nm有较强吸收，而且在此波长下，峰形较好，出峰数目适中，各峰的分离度较好，所以检测波长为327 nm。

2.2 特征色谱峰的选择 由于组方中金银花的主要有效成分为绿原酸，具有较好的清热、解毒、抗菌、抗病毒作用［7］，所以采用绿原酸作为控制强力感冒片质量标准的特征色谱峰。

［1］ 江俊.中药质量评价新方法——中药指纹图谱［J］.湖北中医学院学报，2001，3(4)：11.

［2］ 中华人民共和国卫生部药典委员会.中药成方制剂：第20册［M］.北京：中华人民共和国卫生部，1998：346.

［3］ 曹玲，王志刚，王连芝.色谱法在中药指纹图谱研究中的应用［J］.中国当代医药，2012，19(1)：16-17.

［4］ 王薇，康云鹰.论中药指纹图谱利弊及其应用前景［J］.现代中医药，2009，29(2)：70-72.

［5］ 魏雪芳，陈杰，李卓明.复方金银花颗粒质量标准研究［J］.中成药，2004，26(11)：900-904.

［6］ 张春玲，杨华.金银花中总黄酮的提取［J］.美中国际创伤杂志，2005，4(2):51-52.

［7］ 侯媛芳.鼻炎片中升麻苷、欧前胡素的含量测定及防风药材指纹图谱的研究［D］.广州：广州中医药大学，2011.

Prelim inary Study on Fingerprintsof QiangLi GanMao Tablets

YU Guangqiang,GAO Yeheng△
Yulin Institute of Food and Drug Control,Yulin 719000,China

Objective:To investigate the fingerprints of QiangLi GanMao tablets by HPLC.Methods:The HPLCmethod wasadopted to detectw ith the conditionsof chromatographic column being KromasilODS-2 C18(250 mm×4.6mm,5μm),detection wavelength 327 nm,flow speed 1.0 m L/m in,column temperature 25℃aswell as mobile phase being CH3CN-0.4%H3PO4(12/88).Results:Seven common peaks consisted in the fingerprintsof five batches of sampleswhich were divided into two groups.Finally,the sim ilarity of ten fingerprintswas over 0.9,the linear rangeof chlorogenic acid was from 0.03 ug to 0.33μg/m L and the recovery of chlorogenic acid was101.27%. Conclusion:The HPLCmethod applied is simple,convenientand reliable and can be used to control the quality of QiangLiGanMao tablets.

QiangLiGanMao tablets;Chlorogenic acid;HPLC;fingerprint

R284.11

A

1004-6852(2015)01-0023-03

2013-12-29

鱼光强(1986—)，男，硕士学位，药师。研究方向：中药提取。

△通讯作者：高晔珩(1962—)，女，主任药师。研究方向：中药鉴定。