“肤敏膏”对湿疹皮炎模型的影响

李静平，起荣林

1云南中医学院，云南昆明650500；2昆明滇虹药业股份有限公司

“肤敏膏”对湿疹皮炎模型的影响

李静平1，起荣林2

1云南中医学院，云南昆明650500；2昆明滇虹药业股份有限公司

目的：研究“肤敏膏”对豚鼠湿疹皮炎模型皮肤组织病理学的影响，探讨其治疗作用及机理。方法：以2，4-二硝基氯苯(DNFB)建立豚鼠湿疹皮炎模型，采用HE常规病理及透射电镜超微病理学检测方法，观察“肤敏”膏对实验性豚鼠湿疹皮炎的治疗作用。结果：“肤敏膏”能改善动物湿疹皮炎模型皮肤组织病变，减少炎性细胞浸润。结论：“肤敏膏”对Th1/Th2细胞平衡失调所引起的后续皮肤炎症反应和组织损伤有明显抑制作用，从而间接调节Th1/Th2细胞动态平衡，改善过敏症状。

湿疹皮炎；豚鼠；肤敏膏

“肤敏膏”由云南省名中医李庆生教授在长期临床实践和科研工作中总结、结合文献筛选确定，前期各项临床研究已证实“肤敏膏”为疗效确切、主要用于治疗湿疹等过敏性皮肤病的有效复方制剂。

辅助细胞亚群(Th1/Th2)功能失调是诱发过敏性皮肤病的关键因素，是决定过敏性皮肤病炎症反应和组织损伤发生的前提［1］。Th细胞分泌多种Th1和Th2型细胞因子如白细胞介素(IL-2、4、5、13)，IFN-γ，TNF-β、CSF等，既可刺激B细胞合成大量IgE，介导经典Ⅰ型超敏反应；又能趋化嗜酸性粒细胞、中性粒细胞等炎性细胞浸润，或直接杀伤靶细胞，激发Th2细胞主导的Ⅳ型超敏反应，从而引起皮肤炎症反应和组织损伤［2］。因此，本研究从病理形态学角度探索“肤敏”对Thl/Th2细胞的干预调节作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SPF级豚鼠，体质量200～400 g，雌雄兼用，由四川医科大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(川)2011-0007。

1.2 实验用药与试剂“肤敏膏”浸膏(总提物)，褐色粉末，提取率为29.8%，由云南省药物研究所科研科提供；人用量口服7.7g/次，3次/d，共23g (相当于77 g生药)。实验时用电子天平称取适量肤敏浸膏粉，加蒸馏水稀释后配制成适当浓度的溶液供动物灌胃用；2，4二硝基-1-氟苯(DNCB，上海化学试剂公司)；丙酮、橄榄油等其他常用试剂均市购；分析纯。

1.3 仪器 TGL-20M高速台式离心机(上海第三仪器厂生产)；XSP-18A型生物显微镜(江南光学仪器厂生产)；JEDL-100CE透射电子显微镜(南京皓海仪器仪表有限公司生产)；PL403型Sar to-rius电子天平(上海第二天平仪器厂生产)。

1.4 方法

1.4.1 豚鼠湿疹皮炎模型的建立［3-4］采用2，4-二硝基氯苯(DNCB)一次大剂量致敏，多次小剂量激发的方法诱发豚鼠湿疹皮炎模型。豚鼠背部去毛，用5%DNCB-丙酮溶液50μL涂于去毛皮肤上致敏，2周后豚鼠右耳内测涂0.1%DNCB-丙酮溶液100μL激发，每周1次，连续4周。第4次激发后48小时，即造成豚鼠变应性湿疹皮炎模型。模型评判标准：豚鼠右耳出现明显肿胀、充血，表皮角化并伴有一定量丘疹或红斑，少许渗液，出现血痂、脱皮等。

1.4.2 实验分组 豚鼠30只，雌雄各半，随机分为3组，每组10只，分别为“肤敏膏”组、模型组和正常组。于致敏当天灌胃给药。剂量为6.45 g/kg,模型组和正常组予同体积生理盐水。灌胃每日1次，连续灌胃30天(至末次激发后第2天止)。然后处死豚鼠，用直径8mm打孔器沿左右耳廓相同部位打孔取材，制作切片。

1.4.3 观测项目

1.4.3.1 常规病理学检测［5］取耳组织，10%福尔马林液固定，石蜡包埋、切片、HE(苏木精-伊红)染色，光镜下观察组织学改变。

1.4.3.2 超微病理学检测［6］取耳组织，2.5%戊二醛多聚甲醛固定，再由1%四氧化锇固定，乙醇逐级脱水，Epon812环氧树脂包埋，超薄切片约50～70nm厚，醋酸铀、柠檬酸铅染色，在JEDL-100CX透射电子显微镜下观察组织学改变。

2 结果

2.1 光镜观察 与正常组比较，模型组动物表皮增厚、角化过度或灶性角化不全及浅表结痂、表皮突延长增厚，棘层细胞水肿肥厚、颗粒层肥厚等情况；真皮血管扩张充血、内皮细胞肿胀，细胞间水肿，炎性细胞浸润(淋巴细胞、嗜酸性细胞、肥大细胞)等。与模型组比较，用药后“肤敏膏”组豚鼠以上皮肤病变情况不同程度地减轻或抑制。表皮轻度角化，角化不全呈小灶性，且仅偶见，表皮稍增厚或增厚不明显，水肿细胞偶见；真皮内少数炎性细胞浸润，偶见嗜酸性粒细胞，血管内皮细胞未见或仅轻度肿胀，见图1。

图1 豚鼠常规病理学图片

2.2 电镜观察 与正常组比较，模型组动物表皮病变：炎性细胞(如淋巴细胞)变形、细胞浆突起及细胞间桥粒变性或高度增生，表皮基底板弥漫性增厚、表皮浆内可见边缘不规则块状角质颗粒，细胞间可见团块状蛋白质沉着，细胞内张力原纤维束增生等。真皮病变：早期胶原间质水肿，后期间质纤维增生等。

活化的免疫应答细胞如淋巴细胞长胞浆突起、细胞核变大、核仁增大，肥大细胞胞浆突起、颗粒溶解或排出，巨噬细胞胞浆丰富及不规则突起等。另观察到淋巴细胞与肥大细胞或巨噬细胞等相互吻合，细胞膜相插的细胞接触现象。用药后，与模型组比较，“肤敏膏”组以上皮肤病变情况不同程度减轻或改善。如淋巴细胞胞浆稍突起，细胞间桥粒偶有变性或轻度增生，表皮基底板偶见增厚；少见胶原间质水肿；淋巴细胞、肥大细胞和巨噬细胞的细胞核核仁增大、胞浆突起、颗粒溶解或排出情况明显减轻，各种炎性细胞间的吻合接触现象显著改善，见图2。

3 讨论

通过常规病理和超微病理学观察发现，“肤敏膏”不同程度减轻或改善了动物湿疹皮炎模型皮肤组织病变，减少炎性细胞数量。提示“肤敏膏”对Th1/Th2细胞平衡失调所引起的后续皮肤炎症反应和组织损伤有明显的抑制作用，从而间接调节Th1/Th2细胞动态平衡［7-8］。

［1］ 张玉环，沈伟，纪华安，等.异位性皮炎超微病理、免疫病理改变及临床意义［J］.中国中西医结合皮肤病性病学杂志，2003，2(3)：158-161.

［2］ 张玉环，纪华安，张峻玲，等.免疫反应致异位性皮炎病理形态学改变［J］.现代诊断与治疗，2000，11(6)：358-360.

［3］ 许宗严，吴铁，吴志华.鼠皮炎湿疹模型建立的研究进展［J］.中国临床药理学与治疗学，2005，10(7)：730-733.

［4］Tang A，Judge TA，Nickolof f BJ，et al.Suppression of murine al lergic contact dermatitis by CTLA4Ig tolerance induction of Th2 responses requires additional blockade of CD40-l igand［J］.J Immunol，1996，157:117-125.

［5］Hopkins JE，Naisbitt DJ，Kit teringham NR，et al.Selective haptenation of cel lular or extracel lular protein by chemical al lergens:association with cytokine polarization［J］.Chem Res Toxicol，2005，18(2)：375-381.

［6］Mosmann TR，Cherwinski H，Bond MW，et al.Two types of murine helper T cel l clone:def inition according to prof iles of Lymphokine activites and secreted proteins［J］.J Immunal，1986，136(7):2348-2357.

［7］ 李光武.现代生命科学研究与中药研发模式转变［J］.中医药学刊，2004，22(12)：2231-2232.

［8］ 李庆生，陈子君，田芳.从学科特点论临床中药学与中药临床药学［J］.中药材，2002，25(1)：49-53.

Effectof FuMin Cream on theModelw ith EczematousDermatitis

LIJingping1,QIRonglin2
1 Yunnan University of Chinese Medicine,Kunming 650500,China
2 Kunming Dianhong Pharmaceutical Co.,Ltd

Objective:To investigate the influence of FuMin cream on skin pathology of guinea pigs suffering from eczematous dermatitis,explore its therapeutic function and the pathogenesis.Methods:Modelswere prepared by DNFB,curative effects of FuMin cream on themodelswere observed by HE stainingmethod and ultrastructural pathological detection of transm ission electronm icroscope.Results:FuM in cream could improve skin pathological changes of the animals w ith eczematous dermatitis and reduce inflammatory cells infiltration.Conclusion:FuMin cream could inhibit inflammatory reaction and tissue damage significantly induced by the imbalance of TH1/Th2 cells,consequently,regulate dynamic balanceof TH1/Th2 cells indirectly and improveallergic symptoms.

eczematous dermatitis;guinea pig;FuMin cream

R275

A

1004-6852(2015)01-0013-03

2013-12-27

李静平(1979—)，女，博士学位，讲师。研究方向：临床中药学。