黄精膏中水溶性总糖与多糖的测定*

李鸿飞，张凤雪，李柯翱，李 岩，田树革

1新疆医科大学第四附属医院，新疆乌鲁木齐830000；2新疆医科大学中医学院；

3新疆奇康哈博维药有限公司；4新疆医科大学药学院；5新疆医科大学中心实验室

黄精膏中水溶性总糖与多糖的测定*

李鸿飞1，张凤雪2，李柯翱3，李 岩4△，田树革5

1新疆医科大学第四附属医院，新疆乌鲁木齐830000；2新疆医科大学中医学院；

3新疆奇康哈博维药有限公司；4新疆医科大学药学院；5新疆医科大学中心实验室

目的：测定黄精膏中水溶性总糖、多糖含量。方法：采用紫外可见分光光度法，经0.2%蒽酮-硫酸溶液显色测定黄精膏中的总糖、多糖含量。结果：实验测得黄精膏中总糖、多糖含量分别为85.63%、31.70%。精密度、回收率实验结果理想。结论：该方法简便、快速、准确，灵敏度高。

黄精膏；总糖；多糖；含量测定

黄精膏主要由黄精等组成，为棕黄色黏稠的半流体，气香，味甜。此组方黄精膏具有调经止痛，美容养颜，滋阴补肾，补脾养胃等功效［1-2］。黄精作为传统中药，其主要化学成分为多糖、单糖、低聚糖、甾体皂苷、黄酮类及蒽醌类等化合物［3］。

总糖是单糖、低聚糖、多糖等化合物的总和，其中多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、降血糖、抗凝血、抗血栓、提高记忆力等作用［4-5］。

本研究采用蒽酮-硫酸法［6-7］测定黄精膏中水溶性总糖和多糖的含量，为开发黄精膏提供化学基础，同时为进一步研究黄精膏的多种药理机制提供参考。

1 药材、试剂与仪器

1.1 药材 黄精膏(新疆医科大学中医学院自制)；葡萄糖对照品(天津市天新精细化工开发中心)。

1.2 试剂 浓硫酸，无水乙醇，蒽酮，乙酸乙酯等试剂均为分析纯，实验用水为自制蒸馏水。

1.3 仪器 GBC 40型紫外可见分光光度计(AUSTRALIAGBCSCIENTIFICEQUIPMENTPTY.LTD.)；玻璃仪器气流烘干器(郑州长城科工贸有限公司)；HH-S4数显恒温水浴锅(金坛市医疗器械厂)；旋转蒸发仪R-1001N(郑州长城科工贸有限公司)；智能恒温电热套(郑州长城科工贸有限公司)；电子天平；电热恒温鼓风干燥箱。

2 方法与结果

2.1 葡萄糖标准溶液的制备 精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品0.01 g，置于100mL容量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(葡萄糖浓度为10-4g/mL)。

2.2 供试品溶液的制备［4］

2.2.1 总糖供试品溶液的制备 精密称取黄精膏约0.50 g，加水溶解，置250mL的容量瓶中稀释至刻度线，再从中量取1mL于50mL容量瓶中稀释至刻度线，摇匀，静置。再精密量取上述溶液40mL，于100mL圆底烧瓶中，加入2mL浓硫酸，称定质量，90℃水浴回流1小时，冷却，再称定质量，加水补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10mL，用等体积乙酸乙酯萃取3次，分取水层，即得。

2.2.2 多糖供试品溶液的制备 称取黄精膏5.055 g，加145mL热水溶解，过滤，使含醇量达75%，离心15分钟(4 000 r/min)，用无水乙醇洗涤沉淀2～3次，取沉淀物溶于50mL热水，取17mL置100mL容量瓶中，溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。

2.3 测定波长的选择 精取葡萄糖标准溶液1.0mL置试管中，用蒸馏水补液至3mL，加0.2%蒽酮-硫酸试液5mL，混匀。置冰水浴10分钟后取出，再放沸水浴中保温4分钟［2］。取出，放冷。以3mL水加5mL 0.2%的蒽酮-硫酸试液为空白，用GBC40型分光光度计，于500～700nm波长范围内测定吸收度。结果在(625±2)nm处有最大吸收，同法测得黄精膏总糖供试液、多糖供试液在(625±2)nm处有最大吸收。

2.4 标准曲线的制备和线性关系的考察

2.4.1 总糖供试品溶液的标准曲线 精密量取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL对照品溶液，分别置于试管中，加水至3mL，然后缓慢精密加入5mL蒽酮-硫酸试液，摇匀，置于冰中10分钟，再用热水浴4分钟，之后冷却至常温，以试剂空白为参比在625 nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、葡萄糖浓度为横坐标作图，得回归直线方程为Y=0.3856C-0.0068(R2=0.999)；结果表明葡萄糖在0.005～0.015mg/mL范围内具有较好的线性关系。

2.4.2 多糖供试品溶液的标准曲线 精密量取0、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL对照品溶液，分别置10mL带刻度的试管中，再依次加水至3.0mL混匀，沿管壁各加入0.2%蒽酮-硫酸溶液5.0mL，冰浴10分钟，振摇至绿色，立即置沸水浴中保温4分钟，取出后放冷，在625 nm处测定吸收度A。以3.0mL水加入0.2%蒽酮-硫酸溶液5.0mL在625 nm处测定吸收度。以A为纵坐标，C为横坐标，绘制标准曲线，计算得：A=0.3856C-0.0068；R2=0.9990。

2.5 精密度实验 分别取总糖供试品溶液及多糖供试品溶液0.8mL，5份，按标准曲线制备方法测定吸光度。总糖RSD为1.91%，多糖RSD为1.91%，表明精密度良好。

2.6 稳定性考察 分别精密吸取总糖及多糖供试品溶液各1.4mL，分别在0、10、20、30、60分钟测定。结果表明总糖供试品溶液及多糖供试品溶液在60分钟内是稳定的。

2.7 加样回收率 精密吸取已知量的黄精膏干燥样品粉末0.5 g，平行5份，分别精密添加已知质量浓度葡萄糖对照品适量。按总糖、多糖样品液的制备方法分别制备各样品溶液，按标准曲线方法测定，计算回收率，结果总糖、多糖样品溶液平均回收率为90.02%、99.61%，RSD分别为2.9%、0.937%，见表1—2。

2.8 含量的测定 分别精密吸取总糖供试溶液和多糖供试溶液，按照制备标准曲线步骤测定其吸光度，重复5次。根据回归方程计算溶液浓度，然后计算出总糖、多糖含量，见表3—4。

表1 总糖加样回收率测定结果

表2 多糖加样回收率测定结果

表3 总糖样品含量测定结果

表4 多糖样品含量测定结果

3 讨论

采用紫外可见分光光度法，经0.2%蒽酮-硫酸溶液显色测定黄精膏中的总糖、多糖含量，结果测得黄精膏中总糖、多糖含量分别为85.63%、31.7%。精密度、回收率试验结果理想。

多糖广泛存在于自然界，是多种中草药的有效成分之一，具有多种生物活性，是理想的免疫增强剂，能提高机体免疫系统的功能［8］。目前已有多种多糖物质被发现，多糖的作用机理以及生物功能和结构的关系研究不断深入。黄精膏的热水提取物中有多种具有抗补体活性的多糖，具有多种免疫药理活性，对造血系统有明显作用，在治疗生殖器疱疹方面具有一定的临床疗效［9-10］，对血糖水平也有一定的影响［11］，对抗肿瘤、抗辐射损伤也显示出较好的疗效。

本实验方法操作简便、快速、准确，灵敏度高，为深入认识黄精膏的作用，进一步挖掘黄精膏的临床价值，对分析黄精膏的有效成分的含量以及测定方法提供了实验依据。

［1］ 侯慧.黄精的化学成分及药理作用研究探讨［J］.黑龙江科技信息，2014(7)：78.

［2］ 郭婕，张国.黄精的现代化学、药理研究与临床应用进展［J］.齐鲁药事，2005，24(12)：741-743.

［3］ 庞玉新，赵致，袁媛，等.黄精的化学成分及药理作用［J］.山地农业生物学报，2003，22(6)：547-550.

［4］ 吴笳笛.多糖的作用及其研究进展［J］.沈阳师范大学学报：自然科学版，2008，26(2)：221-223.

［5］ 张峰，张继国，王丽华，等.黄精多糖对东莨菪碱致小鼠记忆获得障碍的改善作用［J］.现代中西医结合杂志，2007，16(36)：5410-5412.

［6］ 马丽耘.蒽酮-硫酸法测定灵芝多糖含量［J］.首都医药，2004，11(2)：51.

［7］ 李利军，孔红星，陆丹梅.蒽酮-硫酸法快速测定蔗糖的研究及应用［J］.食品工业科技，2003，24(10)：145-149.

［8］ 郑永飞.活性多糖的保健功能及其应用［J］.粮食与食品工业，2009，16(4)：22-25.

［9］ 陈金，陈美明，陈琦，等.黄精多糖乳膏治疗生殖器疱疹临床随机对照实验［J］.现代预防医学，2004，31(4)：503-504.

［10］辜红梅，何开泽，蒲蔷，等.黄精多糖乳膏治疗单纯疱疹性豚鼠阴道炎的疗效研究［J］.应用与环境生物学报，2003，9(2)：146-149.

［11］王红玲，张渝侯，洪艳，等.黄精多糖对小鼠血糖水平的影响及机理初探［J］.儿科药学，2002，8(1)：14-15.

Detection ofWater-soluble Total Sugarand Polysaccharide in HuangJing Ointment

LIHongfei1,ZHANG Fengxue2,LIKe′ao3,LIYan4△,TIAN Shuge5
1 The Fourth Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University,Urumqi830000,China;
2 TCM College of Xinjiang Medical University;3 Xinjiang QiKang HaBo Uygur Medicine Co.,LTD;
4 Pharmacy College of Xinjiang Medical University;5 Central Laboratory of Xinjiang Medical University

Objective:To detect the contents of water-soluble total sugar and polysaccharide contained in HuangJing ointment.Methods:The contentsof totalsugarand polysaccharide in HuangJing ointmentweremeasured by UV spectrophotometry after HuangJing ointmentcolored by 0.2%anthranone-sulfuric acid solution.Results:The experimentsshowed that the contentsof totalsugarand polysaccharide could reach 85.63%and 31.7%respectively. The accuracy and recovery ratewere perfect.Conclusion:Themethod is simple,rapid,accurate and highly sensitive.

HuangJing ointment;totalsugar;polysaccharide;contentdetermination

R927.2

A

1004-6852(2015)01-0016-03

2014-06-17

乌鲁木齐科技计划项目(编号C121120001)。

李鸿飞(1979—)，男，在读硕士研究生，主管中药师。研究方向：药剂学。

△通讯作者：李岩(1969—)，女，硕士研究生导师，博士学位，教授。研究方向：药物化学与质量标准。