DNA 定量分析在非妇科脱落细胞学中的应用价值

黄 莱

（湖南省肿瘤医院病理科 ，长沙 410013）

近年来随着DNA 检测技术的日益成熟，DNA 定量分析技术已经在临床上广泛使用。DNA 分析技术可有效显示细胞的倍体情况，而恶性肿瘤的一个特征是细胞增殖失控，其重要表现是DNA 发生异常改变，故恶性肿瘤细胞中可出现异倍体如多倍体、亚二倍体，通过DNA 倍体分析为判断某个细胞是否是恶性肿瘤诊断提供重要的客观指标和依据，是对细胞形态性诊断的重要补充和提升。研究显示，DNA 定量分析技术的敏感性远远大于液基细胞学［1-2］。本组我们主要是针对非妇科脱落细胞学普通细胞学涂片与细胞DNA 定量分析比较［3］，探讨两者在细胞学诊断中的作用，以便为DNA定量分析技术更有效应用于临床提供依据。

1 资料与方法

1.1 材料选用2013 年10 月～2014 年6 月间在本院住院患者送检我科的体液标本106 例，287 例支窥和肺穿标本，其中195 例同时送检病理学检查。

1.2 方法体液细胞学标本采用过滤法处理后，制成四张玻片，两张使用HE 染色用于常规细胞学诊断，另两张采用Feulgen 染色，进行自动细胞DNA 定量分析。支窥，肺穿标本由临床医生取样后送检我科，两张用Feulgen 染色进行自动细胞DNA 定量分析，其余送检玻片均行HE 染色用于常规诊断。

1.3 常规细胞学诊断所有HE 染色玻片均有病理细胞学医生作出诊断，报告方式：体液细胞学：涂片中找到癌细胞，涂片倾向恶性，不能排除恶性，涂片中见淋巴样细胞，间皮样细胞，未见恶性证据。支窥和肺穿涂片报告方式：找到癌细胞，倾向恶性，不能排除恶性，未见癌细胞。我们将报告中找到癌细胞，倾向恶性，不能排除恶性均归于阳性病例，未见癌细胞报告归于阴性病例。

1.4 细胞学DNA 倍体细胞定量分析经Feulgen 染色玻片采用全自动DNA 倍体细胞定量分析检测仪（Moticytometer,麦克奥迪（厦门）医疗诊断系统有限公司）对全片进行扫描，根据DNA 指数（DI）作为DNA 的衡量尺度，将检测的数据使用以下的报告方式：（1）未见DNA 倍体异常细胞（阴性）（2）可见少量细胞增生（5%-10%增生）（3）可见少量DNA 倍体异常细胞（1~2个DI ≥2.5）（4）可见细胞异常增生（≥10%增生）（5）可见DNA 倍体异常细胞（3 个及3 个以上DI ≥2.5）（6）可见异倍体细胞峰；其中结果（1）代表检测阴性，（2，3)代表可疑或少量病变，（4,5,6）代表检测阳性。凡DI 值大于2.5以上的玻片，都需通过操作技术人员在显微镜下对其细胞进行复检核实，以排除系统将垃圾和重叠细胞误认为癌细胞核异常细胞。

1.5 病理学检查我们将同时送检了细胞学检查的支窥，肺穿标本由病理学医生取材后，进行染色，做出常规病理诊断，对照结果。

1.6 统计学分析数据分析用SPSS 统计软件，采用卡方检验，以P<0.05 为差异，有统计学意义。

2 结果

2.1 DNA 倍体细胞定量分析检测与普通细胞学检查结果比较所有送检的393 例标本中，通过DNA 倍体细胞定量分析发现异常细胞≥3 者为177 例，而通过普通细胞学检查，结果显示阳性者为163 例，两者比较有统计学意义（P<0.01），说明DNA 倍体细胞定量分析敏感性高于普通细胞学检查，结果见表1。

表1 DNA倍体细胞定量分析与普通细胞学检查结果比较

2.2 DNA 倍体细胞定量分析与病理学检查结果对较

在送检的195 例标本同时进行DNA 倍体细胞定量分析与病理学检查中，通过DNA 倍体分析发现异常细胞≥3 者为92 例，而通过病理细胞学检查，结果显示阳性者为84 例，两者比较有无统计学意义，结果见表2。

表2 DNA倍体检测与病理学检查结果比较

2.3 DNA 倍体细胞定量分析、普通细胞学与病理细胞学检查结果比较由表3 可见，同时送检三项检查的195 例标本中，DNA 倍体细胞定量分析发现异常细胞≥3 者为92 例，细胞学检查结果为阳性者为78 例，病理学细胞检查为阳性者为84 例，三两者比较有统计学意义（P<0.01）。说明DNA 倍体细胞定量分析敏感性高于普通细胞学检查和病理学检查。

表3 DNA倍体、细胞学与病理学结果比较

3 讨论

细胞DNA 倍体细胞定量分析主要是通过对细胞核内DNA 含量或染色体倍数测定来判断细胞的生理状态和病理改变，是病理学由传统的形态学描述向定量分析发展的产物。正常细胞DNA 倍体为二倍体，具有较恒定的DNA 含量，而细胞癌变过程中DNA 含量和（或）染色体结构异常较为常见，尤其是分化低恶性程度高的肿瘤更为常见，并以DNA 指数的形式表现出来，出现非整倍体细胞峰［4］，常规传统的诊断方法结合DNA倍体检测更有助于将良恶性病变的鉴别，国外运用ICM-DNA 检测系统研究的报道认为DNA 倍体异常对判断肿物恶性程度有帮助，且与肿瘤预后有相关性［5］。据文献报道常规细胞学检查诊断渗出液中肿瘤细胞的敏感性约为60%，特异性约为97%［8］。在本组病例中，体液细胞学普通细胞学涂片阳性率为69.5%，而DNA倍体细胞定量分析检测阳性率为74.4%，DNA 倍体细胞定量分析检测与病理学对照结果及细胞学与病理学对照结果比较，其阳性率明显高于普通细胞学涂片。普通细胞学对于体液细胞学诊断时对于增生的间皮细胞诊断是诊断中的难点，而DNA 倍体定量分析能发现一般光镜检测时不能发现的细胞改变，敏感性高，但由于细胞在凋亡过程中也可出现异倍体峰，所以不能单凭DNA 定量分析发现异倍体细胞就判断恶性，仍需结合细胞学结果。若DNA 倍体发现有异常细胞而细胞学未发现异常，可督促细胞学医生对普通细胞学涂片进行更为细致的阅片或者临床再次送检，所以在细胞学初步筛选良恶性病变中DNA 倍体分析提高细胞学的阳性检出率有着重要的辅助价值。

［1］ 贾永蕊.流式细胞术在DNA检测中的应用［J］.中国医学装备, 2010,4: 4-6.

［2］ 张学艳, 王军.流式细胞仪在血液学检验中的应用［J］.中国医学装备, 2008, 5: 8-11.

［3］ 余秀荣，刘勇，王旭等.细胞DNA倍体定量分析技术宅宫颈癌普查中的应用价值.诊断病理学, 2011, 8:289-292.

［4］ 徐姗, 梅金红, 韩永良, 等.宫颈脱落细胞DNA定量分析与薄层液基细胞学检查在宫颈早期病变筛查中的应用比较［J］.广东医学,2013, 34（9）: 1387-1390.

［5］ 张卫国, 童强, 王强, 等.T淋巴细胞亚群和DNA倍体检测在腹水鉴别诊断中的价值［J］.世界华人消化杂志, 2007, 15（17）: 1972-1975.

［6］ Van der Avoort IA,van de Niewwenhof Hp.Otte-HÖller I,et al.High levels of p53 expression correlate with DNAaneuploidy in(pre)malignancies of the value［J］.Hum Pathol, 2014, 41: 1475-1485.

［7］ Sherman ME, Marks EJ.Effusions cytology in the diagnosisof malignant epithelioid and biphasic pleural mesothelioma［J］.Arch Pathol Lab Med, 1990, 114: 845-851.

［8］ Motherby H, Marcy T, Hecker M, et al.Static DNA cytometry as a diagnostic aid in effusion cytology.I DNA aneuploidy for identification and differentiation of primary andsecondary tumors of the serous membranes［J］.Anal QuantCytol Histol, 1998, 20: 153-161.