富硒罗汉果中罗汉果皂苷V的HPLC测定
2015-03-20陈薇刘庚贵段小群吴卫
陈薇 刘庚贵 段小群 吴卫
摘要：建立富硒罗汉果（Siraitia grosvenorii）果实中罗汉果皂苷V的HPLC测定方法，以Diamonsil C18 （250 mm×4.6 mm， 5 μm）为固定相，乙腈-水（24∶76，V/V）为流动相，检测波长203 nm，流速1.0 mL/min，柱温30 ℃。结果表明，罗汉果皂苷V在0.21～2.10 μg范围内线性关系良好（r=0.999 3），平均回收率为97.64%，RSD为1.66%。该方法可用于富硒罗汉果果实中罗汉果皂苷V含量的测定。
关键词：罗汉果（Siraitia grosvenorii）;罗汉果皂苷V;高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）02-0444-02
DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.02.048
Determination of Mogroside V in Selenium-riched Siraitia grosvenorii Fruit with HPLC
CHEN Wei1，LIU Geng-gui2，DUAN Xiao-qun1，WU Wei1
（1. Guilin Medical University，Guilin 541004，Guangxi，China;2. Guilin Aglycone Bio-technology Co.，Ltd.，Guilin 541001，Guangxi，China）
Abstract： A HPLC based method of analyzing mogroside V in selenium-riched Siraitia grosvenorii fruit was established. The samples were separated by Diamonsil C18 （250 mm×4.6 mm， 5 μm） with a mobile phase of acetonitrile-water（24∶76， V/V） at 30 ℃. The flow rate was 1.0 mL/min and sample was detected at 203 nm. The results showed that the good linear range （r=0.999 3） of mogroside V between 0.21 and 2.10 μg was obtained. The average recovery reached 97.64% （RSD=1.66%）. This method is suitable for detecting mogroside V in selenium-riched Siraitia grosvenorii fruit.
Key words： Siraitia grosvenorii; mogroside V; HPLC
罗汉果（Siraitia grosvenorii）属葫芦科（Ducurbi taceae），主产于广西，为中国特色植物，在东南亚及欧美地区享有良好声誉，备受人们青睐，被誉为“东方神果”。罗汉果味甘、性凉，具有清热润肺，利咽开音，滑肠通便等功效，常用于治疗肺火咳嗽、咽痛失音、便秘等，药用价值高[1]。富硒罗汉果是近年研制出的罗汉果新品种，除上述功效外，富含硒元素，具备清除体内过量羟基自由基的功效[2]，可抗氧化、增强免疫力、抗疲劳等[3，4]。葫芦烷型三萜皂苷类成分罗汉果皂苷V是富硒罗汉果中的主要有效成分[5-8]，通过建立富硒罗汉果中罗汉果皂苷V的HPLC分析方法，将有助于控制富硒罗汉果制剂的质量，为开发相关产品提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
富硒罗汉果（产地：广西桂林，桂林亦元生现代生物技术有限公司提供，经桂林医学院生药学教研室品种鉴定为富硒罗汉果）;罗汉果皂苷V（批号：20120619，纯度≥98%，上海源叶生物科技有限公司）。
甲醇、乙腈为色谱纯，去离子水等。
1.2 仪器
1100型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）;BS110S型电子分析天平（北京赛多利斯天平有限公司）;1810A型电热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂）;SY-360型超声波提取器（上海宁商超声仪有限公司）;MSP-8600型微波消解仪（北京北分瑞利分析仪器公司）。
1.3 方法
1.3.1 色谱分析 以Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm， 5 μm）为色谱柱，以乙腈-水（24∶76）为流动相，检测波长为203 nm，柱温30 ℃，流速1. 0 mL/min，样品过0.22 μm微孔滤膜后，进样10 μL，其理论板数按罗汉果皂苷V峰计算应不低于3 000。
1.3.2 对照品溶液的制备 称取10.5 mg罗汉果皂苷V于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至50 mL，摇匀，得0.21 mg/mL对照品溶液。
1.3.3 供试品溶液的制备 取富硒罗汉果粉末0.5 g，加入甲醇50 mL，加热回流2 h，回收溶剂，减压蒸干，加去离子水10 mL溶解，以AB-8大孔树脂柱纯化，依次以去离子水、20%（V/V）乙醇各100 mL洗脱[7]，弃去洗脱液，50%（V/V）乙醇100 mL洗脱，收集洗脱液，挥干，残渣以流动相溶解，定容至10 mL，摇匀待测。
1.3.4 硒的测定 取富硒罗汉果粉末0.5 g于消化管中，加10 mL硝酸、2 mL过氧化氢，摇匀，微波消化后，加水至25 mL，用稀盐酸调至pH 2，加1% （m/v）邻苯二胺2 mL，振摇，放置1 h，加甲苯10 mL萃取，取甲苯液，在340 nm处测定，并计算硒含量。
2 结果与分析
2.1 线性关系的考察
对照品和样品的色谱图见图1。由图1可知，该方法可实现目标化合物的有效分离。取罗汉果皂苷V对照品溶液，分别吸取不同体积（2～20 μL）注入液相色谱仪分析，峰面积（Y）与进样量（X）的线性回归方程为Y=310 662.9X+107.3（r=0.999 3）。结果表明，罗汉果皂苷V进样量在0.21～2.10 μg范围内与峰面积线性关系良好。
2.2 方法学分析
取供试品溶液，重复进样测定6次，罗汉果皂苷V峰面积的RSD为1.12%，说明本方法精密度良好;称取6份样品，各0.5 g，参照上述方法分析，测定样品中罗汉果皂苷V平均含量达10.75 mg/g（RSD=1.37%），表明该方法重现性良好;称取样品0.5 g，参照上述方法制备样品提取液，并于0，1，2，4， 6，12，24 h测定，其峰面积RSD为2.03%，表明提取液中罗汉果皂苷V在24 h内稳定性良好;称取已知罗汉果皂苷V含量为10.75 mg/g的富硒罗汉果样品粉末0.25 g，然后加一定量的罗汉果皂苷V，测定分析，计算回收率为95%～105%，平均回收率97.64%（RSD=1.66%），表明该法准确。
2.3 样品分析
取3批样品（20130921，20131009，20131011），按上述方法分别测定罗汉果皂苷V和硒含量，结果表明，样品中罗汉果皂苷V含量分别为7.61，10.75，
9.33 mg/g，硒含量分别为28.77，31.09，30.56 μg/g，其中罗汉果皂苷V符合2010版药典中对罗汉果含量的要求[9]。
3 讨论
罗汉果皂苷味甜，甜度约为蔗糖的300倍，不含热量，理化性质稳定，易溶于水，作为食品添加剂具有安全无毒的优点，适合长期食用，在国家强制标准《GB2760食品添加剂使用标准》中规定，罗汉果皂苷可不限量用于各类食品，罗汉果皂苷在药品和食品中具有广泛的应用前景[10]。
富硒罗汉果是桂林近年研制栽培出的新品种。通过收集优良栽培品种和野生株系，利用物理和化学方法诱导罗汉果植株染色体加倍、将二倍体大花粉与单倍体卵细胞杂交，培育出有效成分含量大幅提高的无子富硒罗汉果，其中果实中硒元素含量高达30 μg/g左右。目前，富硒罗汉果药用价值的研究尚处于起步阶段，开展相关系统研究，将挖掘其发展潜力，其经济效益和社会效益前景广阔。
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