病理制片过程中常用试剂的合理更换

刘细荣，黄海燕，李敏才

(1.咸宁市第一人民医院病理科，湖北咸宁437000;2.湖北科技学院基础医学院)

病理制片过程中常用试剂的合理更换

刘细荣1，黄海燕1，李敏才2

(1.咸宁市第一人民医院病理科，湖北咸宁437000;2.湖北科技学院基础医学院)

目的在保证病理制片质量基础上，探索常用组织块和浸泡液的量的关系。方法采用全自动脱水机方式，标本厚度控制在1cm×1cm×0.2cm范围内，将标本分为3组，按相同试剂量(2000ml)和相同程序分别处理，比较制片质量差别。结果第1组3000块标本，有900块组织勉强可以切出完整的切片，余下均不能切出完整切片，表现为组织发软，切片松散;第2组2000块标本，组织软硬度适中，都能较顺利的切出完整切片;第3组的标本1000块组织，其中700块组织通过温水湿润，能勉强切出切片，余下组织在切片时出现断裂、皱褶等，无法制片。结论标本处理量与常用试剂的消耗相关，常用试剂的更换以组织块数量计算可能更为合理。

病理制片;常用试剂;更换

石蜡切片制作技术是病理学、组织胚胎学与科学研究观察细胞、组织的生理、病理形态变化的一种常用主要方法，在医院病理科起着无法替代的作用。随着现代病理学技术的飞速发展，环保问题日益突出，越来越多的新技术、新设备投入到病理科，这样对病理组织标本的处理要求也日益提高。可是大多数病理常用试剂具有毒性、腐蚀性、易燃、易爆等特性，所以安全、高效、环保、污染小、组织处理好的全自动密闭式脱水机被越来越多的医院病理科所采用［1］。切片质量的好坏，直接会影响到病理的诊断和各种新技术的开展。为此我院探索出常用组织块和浸泡液的关系，既保证了标本质量，又有效利用和节约了试剂，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料标本均来源于本院病理科，病理活检取材后剩余的标本6000例，均更换新试剂。甲醛、无水乙醇、松节油均购于武汉市中天化工有限责任公司。石蜡:浸蜡第一、二缸为58℃～60℃、第三缸为60℃～62℃;包埋蜡为68℃～78℃蜂蜡和60℃～62℃石蜡，以1∶4混合。使用器材:TC－120型智能程控生物组织自动脱水机(Taiva)，JBL5生物组织包埋机(WHJJ)，JB－6生物组织摊烤片机(WHJJ)、德国莱卡2015切片机和Microtome Blade Stainless Steel R35切片刀。

1.2 方法组织标本厚度控制在1cm×1cm× 0.2cm范围内，将标本分为3组(3000块、2000块、1000块)，按相同时间(15个半小时)及试剂量(2000ml)分别处理，处理程序［2］:采用脱水机方式进行脱水。处理流程:10%的中性福尔马林2h－85%酒精1h－90%酒精1h－95%Ⅰ酒精1h－95%Ⅱ酒精2h－无水Ⅰ酒精1h－无水Ⅱ酒精2h－松节油Ⅰ45min－松节油Ⅱ45min－60℃石蜡Ⅰ1h－60℃石蜡Ⅱ1h－62℃石蜡Ⅲ2h。

常规HE染色处理，切片厚度控制在3～4μm之内，环境温度不大于30℃，局部环境有良好的通风和消防设施。比较制片质量差别。

2 结果

第1组3000例标本中有900块组织勉强可以切出完整的切片;余下2100块不能切出完整切片，表现为局部出现白色区域，切片松散。第2组2000例标本组织软硬度适中，均能较顺利的切出完整切片，组织切面完整、平坦、厚薄均匀。第3组1000例标本，其中700块通过温水湿润，能切出切片，但厚薄不均;其余300块切片较硬，切片时出现断裂、裂隙、颤横、皱褶、折叠等现象，无法制片。

3 讨论

3.1 试剂更换的条件

3.1.1 脱水机试剂的更换①脱水剂:将无水乙醇加入白色的无水硫酸铜粉末观察颜色变化，若看到粉末变成蓝色时，则可以断定无水乙醇含有一定的水分，则提示可更换脱水剂了。其化学反应的方程式为:CuSO4+5H2O==CuSO4·5H2O。CuSO4是无水硫酸铜，是白色的;而CuSO4·5H2O是五水和硫酸铜结晶，是蓝色的［3］。无水乙醇如果含有水，组织块就会脱水不尽，如果即转入到透明剂中，透明剂就不能很好的侵入，蜡液更不能很好的渗入到组织块中去，脱水不净的组织块是不能切出很好的切片的。②透明剂:在组织浸入透明剂时，观察是否有明显油脂从组织块中溢出;如果没有油脂，并且组织块不呈现棕黄或暗红色透明样，则提示该组织块的固定、脱水、透明不充分，应及时更换脱水剂和透明剂［4］。③石蜡:石蜡用了一段时间后就会含有大量的透明剂，它会导致石蜡松软，以至浸蜡不充分，使组织过于松软，不利于切片，或切片容易散开，影响切片质量，因此石蜡的更换也同样重要［4］。

3.1.2 包埋包埋过程组织块与包埋盒、标签及周围组织有粘连，或组织松软、组织在包埋蜡液中冒气泡似煮沸样，与石蜡不能很好的融合在一起，表现蜡块组织收缩明显、凹陷，则提示要检查试剂的浓度了［5］。如果浓度不够，则应及时过滤与更换，不然亦难以切成完好的切片。

3.1.3 切片切片过程中蜡块松软、组织发白、组织块收缩凹陷，似含水样或组织较硬脆、扭曲、变形，表现切片容易颤痕、开裂、松解、不呈连续的带状完整切片，影响观察全貌，不甚理想，则提示常用试剂应及时沉淀、过滤、更换。

3.1.4 染色在染色过程中时有掉片、脱片等情况，镜下观察表现组织结构不清，核浆共染，核模糊结构不清，核分裂像难找，胞质轮廓不清，染色模糊，着色欠佳，诊断有一定困难，无法观察，影响诊断。此时也提示要更换试剂了［3］。

3.2 试剂的合理更换方法病理技术的人体组织病理切片的步骤应根据各固定、脱水、透明剂的特征，扬长避短，进行合理搭配。更换时，每次都可以只换第一缸试剂，然后后一缸试剂再往前一缸位置上移:即将第一缸试剂废弃，将第二缸前移为第一缸，第三缸前移为第二缸，如此类推;相同试剂的最后一缸倒入新鲜试剂。但无水乙醇是不能往上顶作95%乙醇的，因为无水乙醇里已经含有好多的脂肪了。包埋石蜡必须将68℃～78℃的蜂蜡和60℃～62℃新石蜡以1∶4的比例溶解混合后使用，目的是增强蜡块粘稠度，组织切片连接更好。在合理使用试剂的前提下运用分批提取的方式使溶脱效率更高，有条件的科室，对于多量的组织块，可按其大、小标本分批进行处理，较大组织块的脱水时间长于较小者，小块组织可适当缩短处理时间［1］。具体做法是对每天的试剂、蜡块数进行记录，每次更换一批新试剂后，当出现组织块脱水不佳时，统计这一批试剂共做的蜡块数。

本研究第1组由于组织块数多，试剂量相对过少，导致组织脱水、透明、浸蜡不充分，使组织含水分过多，过软，即使勉强切出，染色时出现脱片、掉片现象。第2组试剂和组织块的比例合适，所以能够切出完美的切片。第3组由于组织块少，试剂量相对过多，导致组织脱水、透明、浸蜡过火，使组织块过硬，切片时组织块和蜡不能很好的融合，不能切出完好的切片。

综上所述，常用试剂的更换都应该以处理了多少块组织块数量来更换更合理。一般来说，2000ml试剂可用于处理大约2000个组织块。

［1］司明远.基层医院如何制备优质病理切片［J］.临床与实验病理学杂志，2012，28(2):221

［2］马恒辉，周晓军.组织固定处理及包埋常见问题与对策［J］.临床与实验病理学杂志，2011，27(6):638

［3］马恒辉，周晓军.如何提高组织处理的技术水平［J］.临床与实验病理学杂志，2011，27(4):415

［4］马恒辉，周晓军.组织切片常见问题与对策［J］.临床与实验病理学杂志，2009，(2):211

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