铁皮石斛白绢病防治药剂筛选试验

梁 君，张科立，张珂莹，谢云陆，成卓敏

(宁波华厦现代农业研究所，浙江宁波 315000)

铁皮石斛又名黑节草，为兰科石斛属多年生草本植物，是我国传统名贵中药［1］。因其自然成苗率极低，通过植物组织培养大量繁育铁皮石斛组培苗已是解决种苗不足的有效途径。但铁皮石斛组培苗在炼苗驯化期间常因白绢病 (Sclerotium rolfssi Sacc．)造成大量死苗，一般死亡率在30%左右，严重者可达70%以上［2-3］。在实验室和塑料钢管大棚内，对铁皮石斛白绢病菌进行室内药剂筛选和防治试验，现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 供试药剂

50%腐霉利可湿性粉剂 (日本住友化学株社分社);250 g·L-1嘧菌酯悬浮剂 (瑞士先正达作物保护有限公司);400 g·L-1嘧霉胺悬浮剂 (德国拜耳作物科学公司);450 g·L-1咪鲜胺水乳剂(广东东莞市瑞德丰生物科技有限公司);400 g·L-1克菌.戊唑醇悬浮剂 (以色列马克西姆化学公司);30%甲霜·恶霉灵水剂 (中农住商 (天津)农用化学品有限公司);250 g·L-1吡唑醚菌酯乳油 (德国巴斯夫有限公司);500 g·L-1甲基硫菌灵悬浮剂 (江苏龙灯化学有限公司);10%苯醚甲环唑水分散剂 (瑞士先正达作物保护有限公司);2.5%啶氧菌酯悬浮剂 (美国杜邦公司);50%异菌脲可湿性粉剂 (江西禾益化工有限公司);325 g·L-1苯甲·嘧菌酯悬浮剂 (瑞士先正达作物保护有限公司);20%腐霉利悬浮剂 (江西禾益化工有限公司)。以上药剂均为市售。

1.2 供试菌株

铁皮石斛白绢病病菌菌株从宁波华厦现代农业研究所连栋大棚苗床分离纯化获得，并经回接证实其具有极强的致病性。菌饼为白绢病菌在PDA平板上4 d培养物，直径1 cm;菌核为白绢病菌在PDA平板上10 d培养物，粒径约0.2 cm。

1.3 试验方法

1.3.1 药剂初筛

采用管碟法［4］。将3个灭菌消毒的牛津杯均匀插入含PDA培养基的培养皿中，接种白绢病菌饼(直径1 cm)于培养皿中心。将配置的1～13号药剂1 000倍液注入牛津杯中，每杯200μL，置25℃培养箱培养。每种药剂处理重复5次，3 d后观察药剂对白绢病菌菌丝生长的抑制程度。

1.3.2 防治铁皮石斛白绢病菌的最适药剂浓度测定

采用生长速率法测定［4］。将药剂与PDA培养基混匀，配制成所需浓度的药液培养基混合物。处理1接种白绢病菌菌饼 (直径1 cm)，每皿4片;处理2接种大小近似成熟白绢病菌菌核 (粒径约0.2 cm)，每皿4粒。置于25℃培养箱中培养，3 d后用游标卡尺测量菌落直径，记载菌落丰满度，观察菌核萌发情况，计算抑菌率。每处理重复3次。

1.3.3 2种药剂对白绢病菌核抑制试验

将成熟的白绢病菌菌核分别置于甲霜·恶霉灵和苯甲·嘧菌酯1 000倍的药液中，于12，24，48，72，96，120，144和168 h后取出，用无菌水清洗后置于PDA培养基上，置25℃培养箱中培养，3 d后观察菌核萌发情况，计算抑制率。每处理重复5次。

1.3.4 2种药剂防治铁皮石斛白绢病的田间试验

试验在本公司钢管大棚内苗床上进行。床上基质为前茬石斛育苗后再利用的松树皮碎片和小石块，每床长42 m，宽1.5 m。移栽驯化苗每丛3株，株行距为12 cm×18 cm。将室内筛选较好的2种药剂分别参照厂家推荐使用浓度以甲霜·恶霉灵1 000倍液和苯甲·嘧菌酯1 500倍液配制成供试药剂，以清水为对照，每处理20 m2(800丛)，重复3次。驯化苗移栽后先用药剂浇根，随后每隔7 d喷药1次，连续3次，30 d后调查发病株数和发病级数，计算病情指数和防治效果［5］。

铁皮石斛白绢病病情分级参照以下标准:0级为植株健壮无病;1级为1丛植株中有1株感病，地上茎基部变黄;2级为1丛植株中有2株茎部感病;3级为1丛植株中3株全部感病，植株黄化;4级为整丛植株萎蔫枯死，茎根腐烂。

2 结果与分析

2.1 铁皮石斛白绢病菌的药剂初筛

由表1可知，腐霉利、咪鲜胺、克菌·戊唑醇、甲基硫菌灵、异菌脲和腐霉利6种药剂在1 000倍下对铁皮石斛白绢病无抑制作用;嘧霉胺、吡唑醚菌酯和苯醚甲环唑3种药剂对白绢病有一定抑制作用，嘧菌酯、甲霜·恶霉灵、啶氧菌酯和苯甲·嘧菌酯4种药剂对白绢病有较强的抑制作用。

2.2 防治铁皮石斛白绢病病菌药剂浓度测定

试验所用药剂为1.3.1筛选出的4种对白绢病菌有抑制效果的药剂。

由表2可知，嘧菌酯500倍液、啶氧菌酯500倍液抑菌率均未达到90%，甲霜·恶霉灵2 500倍液、苯甲·嘧菌酯35 000倍液抑菌率达到100%。苯甲·嘧菌酯抑制白绢病菌菌丝生长的有效浓度比甲霜·恶霉灵低14倍。选用甲霜·恶霉灵和苯甲·嘧菌酯对白绢病菌核萌发抑制效果进行测定(表3)可以看出，虽然菌核萌发抑制率均为0，但苯甲·嘧菌酯2 500～20 000倍液对白绢病菌菌核萌发抑制效果明显，仅菌核周边有少量菌丝向外伸展，菌落疏松呈稀薄层。故本试验筛选出的苯甲·嘧菌酯为最适防治铁皮石斛白绢病药剂。

表1 不同药剂对白绢病菌的抑制效果

表2 不同药剂及浓度对白绢病菌丝伸展的抑制效果

表3 2种药剂不同浓度对白绢病菌菌核萌发的抑制效果

注:表中0表示菌核未萌发，+表示菌核周边菌丝稀少，++表示菌核周边菌丝稠密丰厚，+++表示菌核周边菌丝稠密丰厚。

2.3 2种药剂对白绢病菌核灭杀效果测定

试验所用药剂为1.3.2中抑制白绢病菌效果较好的甲霜·恶霉灵和苯甲·嘧菌酯。从表4中可以看出，白绢病菌菌核在苯甲·嘧菌酯1 000倍药液中浸泡处理168 h，抑菌率达到90.1%，菌核萌发抑制率达到26.7%，菌核周边仅有少量菌丝伸展，菌落疏松，菌丝畸形。该试验与1.3.2试验结果一致，再次验证了苯甲·嘧菌酯为最适防治铁皮石斛白绢病药剂。

表4 2种药剂对白绢病菌菌核灭杀效果

2.4 2种药剂防治铁皮石斛白绢病田间试验

试验选用甲霜·恶霉灵1 000倍液和苯甲·嘧菌酯1 500倍液，以清水为对照。

由表5可知，苯甲·嘧菌酯病株防效和病指防效均达到90%以上，其中病株防效高出甲霜·恶霉灵29.13%，病指防效高出23.04%，苯甲·嘧菌酯明显防效优于甲霜·恶霉灵，与室内试验结果一致。

表5 2种药剂防治铁皮石斛白绢病田间防效

3 小结与讨论

在供试的13种化学药剂中，对铁皮石斛白绢病菌抑制活性较强的化学药剂有嘧菌酯、甲霜·恶霉灵、啶氧菌酯和苯甲·嘧菌酯。其中，甲霜·恶霉灵2 500倍液和苯甲·嘧菌酯35 000倍液对白绢病病菌就有很好的抑制效果，平均抑菌率都为100%。在2种药剂对白绢病菌菌核抑制试验中，苯甲·嘧菌酯比甲霜·恶霉灵抑制菌核萌发的效果好，在2 500～20 000倍液对白绢病菌菌核的萌发抑制效果十分明显，供试菌核仅少量长出菌丝，菌落稀薄疏松。白绢病菌菌核在苯甲·嘧菌酯1 000倍液中浸泡168 h，菌核萌发抑制率达26.7%，抑制率达90.1%，菌核周边仅少量菌丝长出，菌丝畸形。田间防治试验，苯甲·嘧菌酯1 500倍液对铁皮石斛白绢病病株防效达90.72%，病指防效达94.37%，表明苯甲·嘧菌酯是防治铁皮石斛白绢病病菌的理想药剂。

铁皮石斛白绢病是土传根部病害，其病菌以菌丝和菌核在土壤和病残组织中存活较长时间［5］，要铲除该病菌为害，仅依靠药剂防治远不够，需要结合综合防治。在栽种铁皮石斛前，对铁皮石斛栽培基质进行灭菌处理［6］，移栽初期加强肥水管理才能控制铁皮石斛白绢病的发生和危害，从而取得良好的经济和社会效益。

［1］ 付开聪，冯德强，张绍，等.铁皮石斛集约化高产栽培技术研究 ［J］.中草药，2003，34(2):177-179.

［2］ Xiao Z J，Li X X，Duag S，et al.The idengtification on patheogen of harbadosnut leaf blight ［J］.Mycosystema，2010，29(6):874-878.

［3］ 丁彩平，黄思良，陆少峰.韭菜白绢病菌的分离及其特性鉴定 ［J］.西南农业学报，2005，18(3):302-305.

［4］ 方中达.植病研究方法［M］.北京:中国农业出版社，2001:112-125.

［5］ 马琳，银福军，曾纬，等.黄连白绢病生物学特性及防治药剂的筛选 ［J］.安徽农业科学，2009，37(34):16905-16908，16932.

［6］ 斯金平，诸燕，朱玉球.铁皮石斛人工栽培技术研究与应用进展 ［J］.浙江林业科技，2009，29(6):66-70.