御寒暖胃膏穴位贴敷对胃癌前病变大鼠胃黏膜的影响*

御寒暖胃膏穴位贴敷对胃癌前病变大鼠胃黏膜的影响*

★谢宇锋1*第一作者：谢宇锋(1983—)，主治医师。研究方向：针灸治疗疼痛及脾胃相关病症。E-mail：714732618@qq.com。冯军1*通信作者：冯军(1962—)，主任中医师。研究方向：针灸治疗疼痛及脾胃相关病症。E-mail：szfdzyfj@163.com。杨宗保2王晨光3刘琼3陈赟1罗建良1王曙辉1杨丽霞1(1.深圳市福田中医院针灸推拿科广东 深圳 518000；2.厦门大学医学院福建 厦门 361005；3.江西中医药大学灸学院2012级硕士研究生南昌 330004)

摘要：目的：研究御寒暖胃膏贴敷胃经穴对慢性萎缩性胃炎癌前病变大鼠胃黏膜的影响，探讨御寒暖胃膏贴敷胃经穴对慢性萎缩性胃炎癌前病变大鼠胃黏膜损伤修复的作用机制。方法：大鼠随机分为正常组、模型组、御寒暖胃膏贴敷胃经穴组、御寒暖胃膏贴敷对照点组、药物对照组，采用综合干预方法复制慢性萎缩性胃炎癌前病变大鼠模型，肉眼下观察大鼠胃黏膜损伤指数，光镜下观察胃黏膜组织的病理变化，彩色多普勒观察胃黏膜的血流量。结果：与模型组比较，御寒暖胃膏贴敷胃经穴组和药物对照组大鼠胃黏膜损伤指数值均显著降低(P<0.05)，胃黏膜组织的病理损伤得到明显修复，胃黏膜血流量均显著升高(P<0.05)；御寒暖胃膏贴敷对照点组大鼠胃黏膜损伤指数值未见明显降低(P>0.05)，胃黏膜组织的病理损伤未得到明显修复，胃黏膜血流量未见显著升高(P>0.05)。结论：御寒暖胃膏贴敷胃经穴可以促进慢性萎缩性胃炎癌前病变大鼠胃黏膜损伤的修复，增加胃黏膜的血流量，并且存在经脉-脏腑特异相关性。

关键词：慢性萎缩性胃炎；癌前病变；胃黏膜损伤；御寒暖胃膏；穴位贴敷

慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis，CAG)是临床常见的慢性消化系统疾病，以胃黏膜上皮和腺体萎缩、黏膜变薄或伴有肠腺化生、不典型增生为特征。1978年WHO将CAG列为胃癌的癌前病变，是胃癌发生发展过程中的必经阶段[1]。本课题组在前期使用中医外治法经典著作《理瀹骈文》所记载的“御寒暖胃膏”贴敷胃经穴足三里、中脘治疗慢性萎缩性胃炎患者，对改善患者的临床症状具有较好的效果，为进一步明确御寒暖胃膏贴敷胃经穴对慢性萎缩性胃炎的作用，并阐述其可能的作用机制，为临床开展御寒暖胃膏贴敷胃经穴治疗慢性萎缩性胃炎提供科学的实验依据，本课题组开展了以下实验，实验过程及结果具体介绍如下。

1材料

1.1实验动物合格SD大鼠50只，雄性，清洁级，8周龄，体重200～250g，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司,许可证号：SCXK(湘) 2009-0004。大鼠饲养于垫锯木屑的饲料笼中，每笼10只，控制室温22℃，相对湿度50%，采用自然光暗周期，自由饮水，检疫3周后分组实验。

1.2试剂与仪器

1.2.1试剂与药品御寒暖胃膏药物组成：生姜160份，凡士林48份，乳香3份，没药3份，川椒6份。所有中药均购自深圳市福田区中医院中药房，并且于深圳市福田区中医院中药煎药房制成膏药；维酶素片(河北环海药业有限公司，批号：20120214)；N-甲基-N`-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)(日本东京化成株式会社)。

1.2.2仪器计量天平(TP-200D，200g×0.001g，e=0.01g，湘仪天平仪器设备有限公司)，电磁炉(苏泊尔，C21-SDHJ05)，冷冻干燥机(LGJ-10多歧管压盖型，北京松源)，荧光倒置显微镜(TE-2000U型，日本尼康公司)，图像采集系统(Retiga SRV型，奥林巴斯公司)，冷冻台式高速离心机(德国 Heraeus(贺力氏)，产品编号：30-TY7107)，低温冰箱(美国thermo fisher revco，产品编号：808964-1601)，纯水仪(德国赛多利司，产品编号：AriumR611VF)。

2方法

2.1实验分组将50只大鼠按体重排序，然后按随机数字表法随机分为5组：正常组、模型组、御寒暖胃膏贴敷胃经穴组、御寒暖胃膏贴敷对照点组、药物对照组，每组10只。

2.2药品制备

2.2.1御寒暖胃膏的制备(1)膏药的组成：生姜800g，凡士林240g，乳香15g，没药15g，川椒30g。

(2)膏药的制备方法：①研磨药粉：将乳香、没药、川椒分别研碎成粉末，过100目筛，使用天平称取上述药品的粉末备用。②制备姜汁：将生姜洗干净后在室温下晾干过夜，用榨汁机将生姜榨成汁，并用滤网滤去汁中的姜渣，然后将滤得的生姜汁倒入烧杯中，用酒精灯加热至沸腾。③溶化药物：将备好的凡士林放入烧杯中，用酒精灯加热至完全融化，然后加入乳香、没药，并不断用玻棒搅拌至乳香、没药融化为止，然后加入制备好的姜汁，并不断搅拌至均匀后熄火。④冷却撒药：熄火后继续用玻棒向一个方向搅拌，待膏药温度降至60摄氏度后，往膏中按比例撒布川椒粉末并继续搅拌，待药粉与膏药均匀混合后冷却备用。

2.2.2维酶素灌胃液的制备将维酶素药片整片放入玻璃研磨皿中研磨成粉，按比例加入纯净水，将药物配成21.6mg/mL的溶液(人的维酶素给药剂量是2.4g/d，人与大鼠的换算系数0.018，则大鼠的剂量为216mg/kg，根据大鼠体重换算灌胃量)，然后按照大鼠的体重，按1mL/100g的用量予以灌胃，1次/日。

2.2.3MNNG溶液的制备MNNG溶液每周先用纯净水配成1g/L浓度的储存液，避光4℃保存，用时将其配成150μg/mL的饮用液，并置于光屏蔽瓶中让大鼠自由饮用。

2.2.42%水杨酸钠溶液的制备使用天秤称取水杨酸钠和纯净水，按1∶48的比例配成2%的水杨酸钠溶液，以备造模使用。

2.2.530%乙醇溶液的制备用天秤称取无水乙醇和纯净水，按3∶7的比例配成30%的乙醇溶液，以备造模使用。

2.3模型复制方法按照严茂祥[2]报道的综合造模方法，将SD大鼠分组后，除正常对照组外，其余4组大鼠采取严茂祥的综合方法复制CAG癌前病变动物模型，为期20周。A.在饮水中加入MNNG溶液进行造模，让大鼠自由饮用，正常组自由饮用自来水；B.2%水杨酸钠溶液灌胃：单日一次，按10mL/kg的剂量给大鼠灌胃，灌胃前后禁食禁水1h；C.30%酒精溶液灌胃，双日一次，按10mL/kg的剂量给大鼠灌胃，灌胃前后禁食禁水1h；D.对造模动物每日均用专用夹子夹尾一次，使其保持激怒、争斗状态，持续1h；E.饥饱失常法：2d足量喂食，1d停食，循环实施。

2.4干预方法

2.4.1正常组喂饲标准饲料，不予任何处理。

2.4.2模型组第21周开始，每天捆绑1h，并予胶布贴敷肚皮及双下肢，每只每天按1mL/100g的用量经口灌服纯净水。

2.4.3御寒暖胃膏贴敷胃经穴、对照点组A.选穴与取穴：胃经穴分别选取足三里与梁门，对照点组选取足三里旁开位于足太阳经与足少阳经之间的对照点，以及梁门穴旁开位于足厥阴肝经之外0.5cm的对照点；B.贴敷方法：第21周开始，每天将各组大鼠捆缚于鼠板,将膏药涂于所选部位上，直径为0.3cm，厚度为0.2cm，外用医用胶布固定，每日1h。C.每只每天按1mL/100g的用量经口灌服纯净水。

2.4.4药物对照组维酶素溶液，按21.6mg/kg的药量给药，1次/d，每天捆绑1h，并予胶布贴敷肚皮及双下肢。

2.5标本采集所有动物实验结束后，称取大鼠体重，禁食不禁水24h，2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，取胃，沿胃大弯剪开，生理水冲洗干净后，先观察、记录胃黏膜的损伤指数，然后放入4%的甲醛固定，给予标号，待行胃黏膜上皮形态学观察。

2.6观测指标与方法

2.6.1胃黏膜的损伤指数采用Guth指数评定法评定：按Guth法[3]计算黏膜损伤指数。全胃各病灶的长度按下面标准评分后的和为损伤指数。损伤<1mm(包括糜烂、出血点) 为1分,1mm<损伤<2mm为2分,依次类推。损伤宽度>2mm者,指数加倍。

2.6.2胃黏膜的病理形态学在上4组动物的胃体部切取5mm×7mm 大小的胃组织,用10% 福尔马林固定液固定1周后,常规石蜡包埋切片,HE染色,光镜下观察。

2.7统计学方法所有数据均以均数和标准差表示，组间比较若满足正态分布且方差齐时采用单因素方差分析，组间不全相同时采用LSD进行两两比较，方差不齐选择Tamhane T2法进行方差检验和两两比较，若不满足正态性时采用秩和检验，采用SPSS17.0软件进行统计学处理。

3结果

3.1各组胃黏膜损伤指数的变化情况由表1可知，与正常组相比，模型组的胃黏膜损伤指数明显升高，其差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比，御寒暖胃膏贴敷胃经穴组、药物对照组的胃黏膜损伤指数降低，其差异有统计学意义(P<0.05)，说明御寒暖胃膏贴敷胃经穴和维酶素片均能有效降低慢性萎缩性胃炎癌前病变大鼠胃黏膜的损伤指数；御寒暖胃膏贴敷对照点组的胃黏膜损伤指数未见明显改变，其差异没有统计学意义(P>0.05)，说明御寒暖胃膏降低慢性萎缩性胃炎癌前病变大鼠胃黏膜损伤指数的作用与穴位的特异性有关。且御寒暖胃膏贴敷胃经穴组的胃黏膜损伤指数较药物对照点组明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)，说明御寒暖胃膏贴敷胃经穴对降低慢性萎缩性胃炎癌前病变大鼠胃黏膜损伤指数的作用更加明显。

±s，n=10)

注：与正常组相比，模型组的胃黏膜损伤指数差异有统计学意义(*P<0.05)；与模型组相比，御寒暖胃膏贴敷胃经穴组的胃黏膜损伤指数差异有统计学意义(★P<0.05)，药物对照组的胃黏膜损伤指数差异有统计学意义(★P<0.05)；与模型组相比，御寒暖胃膏贴敷对照点组的胃黏膜损伤指数差异没有统计学意义(▲P>0.05)。

BPU

注：与正常组比较，#P<0.05；与模型组比较，△P<0.05，☆P>0.05。

3.2各组胃黏膜组织病理学的变化情况图1-8光镜观察结果显示：正常组大鼠各层胃组织结构完整，上皮细胞及腺体排列整齐，大小形状均匀一致，细胞呈单层柱状排列，胞质透明/空泡状，腺上皮与腺管分界清楚，固有腺及黏膜无扩张瘀血，黏膜肌层无增生，未见病理性核分裂象(图1-2);模型组大鼠黏膜层腺管结构明显紊乱，腺管形态及大小不整，有囊状扩张的腺管，细胞核大小不等，在高倍镜下细胞核比例增大、浓染或疏松网状，核仁明显；核呈杆状或类圆形，排列参差不齐，可见核分裂象(图3-4)；御寒暖胃膏贴敷胃经穴组大鼠黏膜生长较模型组有所好转，其黏膜厚度与皱壁有所恢复，黏膜未见明显水肿、萎缩、炎症，腺体排列较整齐，腺体囊状扩张较少，未见明显萎缩，高倍镜下细胞核大小较均匀，排列整齐，未见病理性核分裂象(图5-6);御寒暖胃膏贴敷对照点组的黏膜层明显萎缩变薄，固有层及黏膜下层可见较多淋巴细胞、浆细胞及单核细胞浸润，黏膜肌层增厚，纤维组织明显增生，黏膜层腺体萎缩明显，腺管形态及大小不整，细胞核大小不等，在高倍镜下细胞核比例增大、浓染，核仁明显，排列参差不齐，可见病理性核分裂象(图7-8);药物对照组大鼠黏膜生长良好，其黏膜厚度与皱壁接近正常组，黏膜未见明显水肿、萎缩、炎症，腺体排列较整齐，腺体扩张数目较少，未见明显萎缩，高倍镜下细胞排列整齐，未见病理性核分裂象(图9-10)。

图1　正常组(×100)　　　　图2　正常组(×400)

图3　模型组(×100)　　　　 图4　模型组(×400)

图5　胃经穴组(×100)　　 图6　 胃经穴组(×400)

图7　 对照点组(×100)　　 图8　 对照点组(×400)

图9　 药物对照组(×100)　图10　药物对照组(×400)

3.3各组胃黏膜血流量的变化情况由表2可知，与正常组相比，模型组的大鼠胃黏膜血流量明显减少，御寒暖胃膏贴敷胃经穴组、药物对照组大鼠胃黏膜血流量皆明显增加，其中御寒暖胃膏贴敷胃经穴组大鼠胃黏膜血流量增加最为显著；与模型组比较，御寒暖胃膏贴敷对照点组大鼠胃黏膜血流量未见明显增加。

4讨论

慢性萎缩性胃炎作为胃癌的癌前病变，其病因是非常复杂的，目前现代医学研究仍认为其发病是一个多因素作用、缓慢发展的过程[4-6]，因此，其防治也缺乏明确的药物作用靶点和准确的时间窗，给本病的防治造成了很大的障碍。但从本病的病理改变来看，胃黏膜的损伤是贯穿其发病全过程的病理变化，所以本课题组选取了胃黏膜损伤指数、组织病理学和胃黏膜血流量作为观察御寒暖胃膏贴敷胃经穴干预慢性萎缩性胃炎癌前病变大鼠的评价指标，具有可行性和现实意义。

本课题研究发现，御寒暖胃膏贴敷胃经穴不仅能降低慢性萎缩性胃炎癌前病变大鼠胃黏膜的损伤指数，而且可以逆转其胃黏膜腺体的萎缩、异型增生，减少炎症渗出，从而阻断了慢性萎缩性胃炎癌前病变大鼠向胃癌进一步发展。且这个作用可能与御寒暖胃膏贴敷胃经穴能够有效增加慢性萎缩性胃炎癌前病变大鼠胃黏膜的血流量有关。

中医学并无CAG癌前病变的病名，结合其临床表现，应属中医学的“胃脘痛”“痞满”“嗳气”“嘈杂”等范畴。《灵枢·经脉》谓：“足阳明之脉，是动则病，食则呕，胃脘痛。”本病病因主要与饮食不节、情志失司、素体虚弱、用药不当等因素有关。其病机为本虚标实、虚实夹杂，本虚为脾胃虚弱，邪实重在气滞血瘀，病位在胃，涉及脾、肾、肝；血瘀是本病发生的重要致病因素，因此，本病的中医治疗应在温中健脾、益气和胃的基础上佐以活血化瘀。穴位敷贴疗法由来已久，清代中草药外治专家吴师机在其所著的《理瀹骈文》中大力推崇和发展了这一外治法，该书在下篇膏方中记载：“御寒暖胃膏，主治：胃伤，不思饮食，胸腹胀痛，呕哕恶心，噫气吞酸，怠惰嗜卧，并治腰背冷痛。用法：糁花椒贴中脘处，药物：生姜汁熬牛胶化开，以乳香、没药、黄丹收。”本方的症候与CAG的临床表现十分吻合，其不仅具有温中和胃之意，更有活血祛瘀之功效，故与CAG的治法相吻合，故选该方作为本项目穴位贴敷的治疗用方。

现代研究发现，足阳明经穴对与胃相关的中枢及外周神经电生理、胃运动、胃分泌等均有明显调整作用[7-8]，因此，足阳明胃经为治疗胃相关疾病的首选经脉，而足三里则为足阳明胃经的合穴，也是下合穴，素有“合治内腑”之说，且《四总穴歌》中记载：“肚腹三里留。”故足三里也是治疗胃相关疾病的首选穴位；而梁门，则为局部取穴用于治疗胃脘痛。一上一下，遥相呼应，该配穴方法体现了针灸配穴中的上下配穴法，也为治疗胃病的黄金配穴。

穴位贴敷，也就是药物贴敷于穴位，其具有以下优点：一方面可被腧穴所在部位皮肤直接吸收，进入血络经脉，输布全身，以发挥其药理作用；另一方面，也可通过药物对腧穴的刺激，调节经络系统的功能，达到防治疾病的目的[9]。

综上所述，御寒暖胃膏贴敷胃经穴对慢性萎缩性胃炎癌前病变的干预作用明确，该方法值得临床推广应用。但因为其作用途径可能较为复杂，所以亟需进一步探讨其作用机制，从而为古方新用提供更加科学的实验数据。

参考文献

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[8]杨宗保,严洁,易受乡,等.电针大鼠胃经穴的血清对胃黏膜细胞ERK磷酸化水平的影响[J].基础医学与临床,2009,29(2):135-138.

[9]何书丽.自制消癌膏穴位贴敷治疗癌性疼痛62 例[J].中国民间疗法, 2011,9(8):8.

(收稿日期：2015-01-12)编辑：万崇毅

*基金项目：深圳市科技研发资金项目(JCYJ20130401105615482)。

中图分类号：R285.5

文献标识码：A