艾灸对类风湿性关节炎大鼠Th1/Th2漂移特异性转录因子T-bet和GATA-3的干预作用*

艾灸对类风湿性关节炎大鼠Th1/Th2漂移特异性转录因子T-bet和GATA-3的干预作用*

★周志刚1颜春明2张学强3覃肯3郭业频1*通信作者：郭业频，男，副教授。(1.江西中医药大学基础医学院南昌 330004；2.葡萄牙传统医学学院中医系里斯本；3.江西中医药大学研究生院南昌 330004)

摘要：目的：观察艾灸对类风湿性关节炎大鼠Th1/Th2漂移特异性转录因子T-bet和GATA-3的干预作用。方法：30只大鼠用弗氏佐剂进行造模，随机分成模型组、艾灸组，西药组三组，10只正常大鼠作为空白对照组，经处理后，观察T-bet和GATA-3的表达。结果：模型组大鼠的脾脏细胞中T-bet表达较正常组明显增高，差异存在着显著性意义(P<0.01)，艾灸组和西药组T-bet表达升高，但差异无显著性意义(P>0.05)；模型组大鼠的脾脏细胞中GATA-3表达较正常组降低，差异存在着显著性意义(P<0.05)；艾灸和西药组中脾脏细胞中GATA-3表达较正常组降低，但差异无显著性意义(P>0.05)。结论：艾灸可能通过抑制RA大鼠T细胞向Th1细胞分化，降低T-bet转录，促进GATA3转录，调整Thl/Th2功能失衡达到治疗目的。

关键词：艾灸；T-bet；GATA-3；类风湿性关节炎

类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis, RA)是一种以关节滑膜炎为主的慢性全身性自身免疫性疾病，其临床表现为关节肿胀和疼痛、晨僵、畸形和功能损害，病理特征是关节滑膜慢性炎症、血管翳形成，关节软骨和骨组织的破坏[1]，我国RA患病率大约为0.33%，大多为女性，本病致残率高，因RA的病因和发病机制尚不明确，目前对RA尚无特效治疗治法。但大多学者认为是遗传因素、环境因素和免疫功能失调等各种因素综合作用的结果。现代研究已证明正常生理状态下Th1与Th2细胞分化存在着一种动态平衡与交互抑制，Th1/Th2细胞分化的动态平衡一旦被打破，T细胞就会朝着Th1细胞分化占优势或Th2细胞分化占优势的“漂移状态”发展，机体因此而发病。因此T细胞亚群Th1、Th2分化失衡被认为是诱导RA发病的中心环节[2]。

研究已经证明针灸具有良好的抗炎、镇痛和免疫调节等作用，腧穴大多为足三里、脾俞、肾俞、大椎、命门等[3]。但艾灸法对RATh1/Th2漂移的干预实验还鲜有报道。本课题是以Th1、Th2的两个特异性指标T-bet和GATA-3来观察RA大鼠的Th1/Th2细胞分化及艾灸干预后表达趋势，以期深入揭示艾灸治疗RA的作用机理。

1材料和方法

1.1材料健康SD雄性成年大鼠，体重在200~300g之间，清洁级(动物由江西中医药大学实验动物科技中心提供)。

1.2方法40只SD健康大鼠购回后经适应性喂养7d，随机抽取10只，纳入空白对照组，于大鼠右侧后肢足垫皮内注射0.1mL生理盐水，30只大鼠作为纳入模型组中，于足跖底部注射0.1mL完全弗氏佐剂进行造模[4]造模，造模成功的模型组大鼠随机分成模型组、艾灸组，西药组各10只，右侧后肢足垫皮内注射0.1mL生理盐水的10只大鼠做为空白对照组。空白对照组和模型组不做任何治疗，只做与艾敏灸组相同的固定。艾灸组将大鼠固定，大鼠大椎、脾俞、肾俞、命门、足三里参照《实验针灸学》动物穴位图谱定位。每天一次，连续6天为一疗程，连续3个疗程；西药组予甲氨蝶呤水溶液(3.8mg/kg)每周1次灌胃。

1.3标本采集大鼠脾组织的采集可参照前期实验方法采集[5]。

1.4T-bet mRNA和GATA-3 mRNA的扩增及检测将采集后的脾细胞悬液按照参考文献进行扩增并检测[5]，表达量按参考文献进行计算，引物序列见表1。

表1　T-bet、GATA-3和β-actin序列

2结果

结果显示：与正常组比，模型组大鼠的脾脏细胞中T-bet表达明显增高，差异存在着显著性意义(P<0.01)，艾灸组和西药组的T-bet表达升高，差异无显著性差异(均P>0.05)，与模型组比较，艾灸组和西药组的T-bet表达明显降低，差异存在着显著性意义(P<0.01，P<0.05)；与正常组比较，模型组大鼠的脾脏细胞中GATA-3表达量降低，差异存在着显著性意义(P<0.05)；与模型组相比，艾灸组和西药组中GATA-3表达明显升高，差异无着显著性意义(P>0.05)，与模型组比较，艾灸组和西药组的GATA-3表达明显降低，差异存在着显著性意义(P<0.01，P<0.05)。

表2　大鼠脾组织的T-bet和GATA-3表达

注：与正常组比较，△P<0.01，▽P>0.05；与模型组比较，▲P<0.01，▼P>0.05。

3讨论

RA是一种以对称性、侵蚀性滑膜炎为病理特征，反复发作多发性小关节肿痛，晚期出现关节僵硬、畸形为主要临床表现的自身免疫性疾病。属于中医痹证范畴，与中医古籍记载的“顽痹”、“骨痹”、“历节”、“鹤膝风”等病证相类似[6]。痹证的发生是由正气不足为内因，风、寒、湿六淫邪气感染为外因，内因、外因共同作用的结果[7]。灸法主要是借助艾炷燃烧发出的热量给人体组织以温热性刺激，通过经络腧穴的“小刺激大反应”作用，并将刺激转换成良性生物信息，从而达到防治疾病目的的一种方法[8-9]。艾灸对RA有良好的治疗效果，且无副使用[10-11]。“足三里”穴属胃经，是治疗下肢痿痹之要穴。脾经与胃经相表里，且脾胃被乃后天之本，具有运化水谷，化生气血之功，故合取“脾俞”调理脾胃二经，有补养全身气血之功效。“肾俞”属足太阳膀胱经，具有补虚培元之功，对脏腑、经络、气血津液的失调都有很好的调整作用。

研究表明：Th1、Th2细胞及其分泌的细胞因子平衡状态的紊乱是造成RA的主要原因，Th1细胞在RA中占主导地位，如IFN-γ,IIL-2，IL-6，L-4，IL-10等细胞因子分泌异常，这些细胞因子共同参与病理过程如滑膜增生、血管翳形成和软骨破坏等[12-15]。以往动物实验研究曾表明：艾灸足三里、肾俞、脾俞等穴能明显减轻RA大鼠局部原发性和继发性肿胀，提高实验RA大鼠痛阈，调节细胞免疫因子，具有抗炎、镇痛和免疫调节等作用[16]，但细胞因子分泌Th1/Th2细胞调控。Th细胞分化为Th1细胞过程中受到转录因子T-bet的调控，主要介导细胞免疫反应，分泌促炎细胞因子，导致炎症反应[17]，是Th1细胞的特异性转录因子[18-19]。所有的Th2细胞因子的转录都需要GATA-3的参与，主要介导体液免疫反应，分泌抗炎因子，提高黏膜耐受性[18]。GATA-3特异性表达于Th2细胞，是Th2细胞特异性转录因子[20]。

本实验结果显示：模型组大鼠的脾脏细胞中T-bet表达明显增高，GATA-3表达显著降低，差异存在着显著性意义(均P<0.01)，说明在RA期间，大鼠T细胞分化向着Th1分化，同时抑制向Th2细胞分化，总的趋势向Th1漂移，Th1/Th2功能失衡；经艾灸治疗后，脾脏细胞中T-bet表达明显降低，GATA-3表达显著升高，说明艾灸干预后大鼠T细胞分化向着Th2分化，同时抑制向Th1细胞分化，Th1/Th2功能基本恢复正常。

由此可见，艾灸足三里、脾俞、肾俞、命门、大椎等腧穴可以抑制RA大鼠T细胞向Th1细胞分化，降低T-bet转录，抑制促炎因子分泌，减轻炎性反应，阻止滑膜下层内皮细胞肿胀、内皮小静脉形成等病变；促进RA大鼠T细胞向Th2细胞分化，促进GATA3转录，加快抗炎因子分泌，上调T细胞耐受性，抑制RA发生发展，恢复RAThl/Th2功能失衡。

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(收稿日期：2015-03-03)编辑：王河宝

*基金项目：江西省卫生和计划生育委员会(原江西省卫生厅)资助(2009A055)。

中图分类号：R245.81

文献标识码：B