氧化苦参碱注射液对大鼠实验性脑出血后作用的研究



氧化苦参碱注射液对大鼠实验性脑出血后作用的研究

王景祥1，姜微2，吕铭洋3， 张丽君4*

(1.吉林省柳河医院,吉林 柳河135300;2.吉林大学中日联谊医院 超声科，吉林 长春130033;

3.延边大学基础医学院2013届研究生，吉林 延吉133000；4.延边大学附属医院 心内科，吉林 延吉133000)

氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)是从豆科槐属植物苦参(So-phora flavescensAi.t)等中提取的生物碱,分子式为C15H24N2O,具有四环的喹嗪啶类结构。研究发现,OMT延缓乌头碱所致大鼠心律失常的发生[1]，对TLR4表达有抑制作用[2]。降低心肌细胞凋亡指数,抑制Fas蛋白表达,增强Bcl-2蛋白表达[3]。而对于脑出血方面的作用尚未见报道。本实验通过模拟脑出血模型,探讨氧化苦参碱注射液对脑出血后作用的研究。

1材料与方法

1.1　药品及试剂

OMT分子量264.36,纯度>98%,由天津一方科技有限公司提供。批号：AW7660；丹参注射液由正大青春宝药业有限公司生产，批号030623。乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)试剂盒。由中生北控生物科技股份有限公司提供，批号：130461,120811.超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及NO试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。批号：20130821,20130819，20130911。

1.2　仪器

磷酸锌水门汀,上海青浦尼康齿科器械厂生产;SN-2型脑立体定位仪,日本长城产;CJ型台式牙钻车上海产;JD-2000型电子天平,沈阳龙腾电子称量仪器有限公司;SSW-420-2S型电热三用水箱,上海博讯实业有限公司;101A-1 型干燥箱,上海市实验仪器总厂。

1.3　动物

Wis tar 雄性大鼠50 只,体重240-250 g(吉林大学实验动物部提供),按体重随机分为5组,每组10只,即假手术组、模型组、阳性药组( 丹参注射液1.5 ml/kg)、 氧化苦参碱注射液60 mg/kg、120 mg/kg剂量组。

1.4　方法

1.4.1建立大鼠实验性脑出血模型用10%水合氯醛(350 mg/kg 体重)腹腔麻醉大鼠,大鼠俯卧位固定在脑立体定位仪上,固定门齿于门齿钩上,将左右水平针分别穿破耳鼓膜并固定。将备皮后的大鼠头部皮肤常规消毒,沿正中线切开,暴露颅骨、前囟和冠状缝。找到前囟后,用钻头在颅骨表面钻一直径为1.0 mm圆孔,穿透颅骨但不伤及脑组织。将微量注射器取未肝素化的大鼠自体尾动脉血50 μl,垂直插入脑组织,位置为右侧尾状核。采用一次缓慢方法将50 μl动脉血缓慢注入尾状核,注血速度约10 μl/min,注血时间约 5 min。用磷酸锌水门汀封住钻孔。局部涂抹青霉素粉,缝合皮肤,缝合尾部切口。局部碘酒消毒。注射用青霉素钠6万单位肌肉注射,连续用4天,预防感染。假手术组操作过程同上,但不向脑内注血。于术后12 h待大鼠清醒后进行Longa氏评分,每天腹腔注射(ip) 给药 1次,给药容积均为0.2 ml/100 g,假手术组给予相同体积的生理盐水,连续给药5 日。所有大鼠在术后第5天于Longa氏评分后在10%水合氯醛腹腔注射麻醉下腹主动脉采血用于测定SOD、MDA及NO含量。取血离心测LDH及CK含量。

1.4.2神经症状观察按Zea Longa的方法对大鼠的行为障碍进行分级评分,标准是:0分为未见神经障碍症状;1分为将大鼠尾巴提起,瘫痪侧前肢曲收于腹下,不能完全伸展左侧前爪;2分为除1级体征外,大鼠置于光滑平面上,推手术侧肩部向对侧移动时阻力降低;3分为除2级体征外,大鼠自由行走时向左侧环转、转圈或倾倒;4分为大鼠出现软瘫,肢体无自由活动。

1.4.3脑含水量测定用10%水合氯醛深度麻醉大鼠，迅速取出全脑，用滤纸吸干脑表面液体和血迹，以注射点为中心，前后各1 mm冠状面切取脑组织片厚2 mm，精确称量湿重后放入电热恒温箱内80℃烘烤48 h,至恒重后称取干重。按下列公式计算脑含水量(%)=(湿重-干重)/湿重×100%。

1.4.4血浆SOD活性、MDA及NO含量的测定以10%水合氯醛麻醉大鼠,腹主动脉采血4 ml,0.2%肝素以1∶9 比例抗凝后1 000 r/min离心10 min,取血浆,按试剂盒要求操作,检测SOD活性、MDA及NO含量。

1.4.5血清LDH及CK含量的测定取血离心，取大鼠血清用半自动生化分析仪按试剂盒说明书测定乳酸脱氢酶和肌酸激酶含量。

2结果

2.1　氧化苦参碱注射液对急性脑出血大鼠神经行为学评分影响

造模后5天，按ZeaLonga的方法对大鼠的行为障碍进行分级评分。与模型组比较,氧化苦参碱注射液各剂量组神经行为学评分明显降低(P<0.05),结果见表1。

表1　　氧化苦参碱注射液对急性脑出血大鼠神经行为学的

与假手术组比较###P< 0.001;与模型组比较**P< 0.01

2.2　氧化苦参碱注射液对急性脑出血大鼠脑含水量(BWC) 的影响

大鼠脑出血后，模型组大鼠脑含水量明显增加(P<0.05) ;氧化苦参碱注射液各剂量组脑含水量与模型组比较均明显下降(P<0.05,P<0.01),结果见表2。

表2　氧化苦参碱注射液对急性脑出血大鼠脑含水量的

与假手术组比较##P< 0.01;与模型组比较*P< 0.05，**P< 0.01

2.3　氧化苦参碱注射液对急性脑出血大鼠血浆中 SOD、 MDA及NO含量的影响

各组大鼠血浆中 SOD、 MDA及NO含量见表3。与模型组比较,氧化苦参碱注射液30、60 mg.kg-1组，丹参注射液1.5 ml·kg-1组，SOD、MDA及NO含量明显改变(P<0.05，P<0.01)。

±s，n=10)

与假手术组比较##P<0.01;与模型组比较*P<0.05，**P< 0.01

2.4　氧化苦参碱注射液对急性脑出血大鼠血清中LDH、CK含量的影响

模型组大鼠术后血清中乳酸脱氢酶、肌酸激酶含量明显增高,阳性组与氧化苦参碱注射液组均可显著降低大鼠血清中乳酸脱氢酶、肌酸激酶含量(表4)。

表4　氧化苦参碱注射液对急性脑出血大鼠血浆LDH

与假手术组比较##P<0.01;与模型组比较*P<0.05，**P< 0.01

3讨论

脑出血后颅内压急剧增高,与迅速形成的颅内血肿共同作用,导致脑组织缺血、缺氧,甚至水肿、坏死,进而引起受损区域神经功能缺损,出现受损神经组织所支配侧躯体肌张力减弱、瘫痪甚至死亡等行为障碍症状[4]。实验动物脑出血后，于120 h进行行为学评分，根据观察，在注射自体动脉血液后，大鼠迅速出现行为和功能异常，出现病变对侧肢体不同程度的瘫痪，其功能异常程度与病变严重程度一致。 脑出血后血肿周围神经细胞变性、水肿、坏死，导致神经功能丧失。因此,神经行为障碍症状常用作反映神经功能状况的重要指标。

自由基具有很强的氧化性，具有强烈的引发脂质过氧化的作用，当脑出血机体组织缺血缺氧时，氧合作用降低，致SOD活性下降，损伤细胞膜，使细胞死亡。氧自由基被破坏，导致脂质过氧化反应，形成一系列的脂质过氧化物和降解产物丙二醛(MDA),MDA能与蛋白质及脂质交联形成变性高分子聚合物而使其失去生理功能，当其堆积到一定程度和一定量，可破坏核内的DNA,RNA，使细胞萎缩死亡。因此SOD的含量直接地反映了脑出血后组织细胞抗自由基损伤的能力，而MDA的含量则间接地反映出脑出血后机体细胞受自由基攻击的严重程度。NO合成过度时可产生神经毒性作用，促进白由基的产生、抑制酶活性及线粒体呼吸，造成细胞能量衰竭而死亡[4]。

脑出血血清中LDH、CK水平明显升高,血清中LDH、CK水平的高低能一定程度上反映脑组织损伤的程度。而血清中LDH、CK水平常作为判断脑细胞膜损伤程度的间接指标[5]。

本实验表明氧化苦参碱注射液能够减轻脑出血后血肿周围组织损伤，从而降低脑水肿，改善脑出血后的各项行为学指标。通过氧化苦参碱注射液治疗可显著提高脑出血后大鼠血浆SOD活性,降低MDA、NO水平,降低大鼠血清LDH、CK水平，表明氧化苦参碱注射液对急性脑出血大鼠的上述治疗作用与提高脑组织内内源性抗氧化酶活性、抑制组织过氧化等机制密切相关。

参考文献：

[1]陈霞，李英骥，葛静岩，等.氧化苦参碱对正常及乌头碱诱发心律失常大鼠动作电位的影响[J].吉林大学学报(医学版)，2004，30(5):704.

[2]李俐涛，张祥建，尹静，等．氧化苦参碱对局灶性脑缺血大鼠脑组织炎症信号TLR4表达的影响[J].中成药，2009,31(2)：194.

[3]商蕾，王玲，孙宏丽，等．氧化苦参碱对大鼠急性心肌缺血时心肌细胞凋亡的影响[J].中国药学杂志，2007,42(7)：501.

[4]李凌波，李晶，李红，等．蒺藜皂苷对大鼠实验性脑出血的脑保护作用[J].哈尔滨医科大学学报，2006,40(2)：99.

[5]蒋冠南，申锦林，覃丽，等．冰黄液对大鼠急性脑出血作用的研究[J].中药药理与临床2005，21(6)：74.

(收稿日期：2014-08-07)

文章编号：1007-4287(2015)05-0710-03

*通讯作者