不同仪器检测网织红细胞结果的可比性分析

张青杨，刁莹莹，郑军

（中国医科大学附属第一医院检验科，沈阳 110001）

不同仪器检测网织红细胞结果的可比性分析

张青杨，刁莹莹，郑军

（中国医科大学附属第一医院检验科，沈阳 110001）

目的探讨网织红细胞（RET）在不同仪器之间检测结果的相关性。方法使用参考方法对Sysmex XE-5000进行仪器校准后，比较Sysmex XE-5000与Sysmex XN-20两台仪器检测网织红细胞比率的相关性。结果校准之后，两台仪器检测网织红细胞比率的结果无统计学差异（P＞0.05），与手工方法比较也无统计学差异（P＞0.05）。结论使用参考方法对Sysmex XE-5000的网织红细胞校准之后可使实验室内部的仪器比对具有可比性。

网织红细胞；校准；参考方法；可比性

网织红细胞（reticulocyte，RET）是反映骨髓造血功能的重要指标，对贫血疾病的诊断、疗效观察和预后有重要的临床价值［1，2］。近年来，随着临床快速诊疗的需求，传统的手工检测方法逐渐被自动化网织红细胞检测技术所取代［3］。但是，目前国内外尚未建立标准的校准系统，对仪器检测结果的准确性评估尚未完善。同时，近年来医疗机构间检验结果互认的需求愈加迫切，为满足此需求，实验室内不同仪器检测结果的可比性更值得重视。

本研究选取本实验室检测网织红细胞的两种仪器，尝试对厂家不提供校准方案的仪器（Sysmex XE-5000）自建校准方案校准后，与经配套校准品校准之后的仪器（Sysmex XN-20）进行结果比较，同时使用手工方法对仪器结果进行验证，探索网织红细胞校准方案的可行性以及实验室内不同检测系统之间的可比性。

1 材料与方法

1.1 研究对象

根据血红蛋白（hemoglobin，Hb）＞120 g/L、90～120 g/L、＜90 g/L分为高、中、低3组。所有标本均来自本院门诊、住院患者和健康体检者，随机选取Hb高、中、低3个水平各20例，共60例标本用于可比性分析。标本均为空腹采集的EDTA-K2抗凝静脉血，混匀后当天完成检测。

1.2 仪器与试剂

日本Sysmex公司生产的Sysmex XE-5000与Sysmex XN-20全自动血细胞分析仪及其原装配套试剂、全血质控物；Sysmex XN-20配套校准品XNCAL；新鲜配制的新亚甲蓝染液；带Miler窥盘的Nikon共览显微镜。

1.3 方法

1.3.1 标本处理：严格按照仪器操作规程，使用配套校准品XN-CAL Sysmex XN-20进行仪器校准（包括RET参数），分别对Sysmex XN-20和Sysmex XE-5000进行仪器验证，空白计数、精密性均达到厂商要求的标准，3个水平的室内质控合格。60例新鲜全血样本，分别使用Sysmex XN-20和Sysmex XE-5000的自动进样模式进行RET检测，每份标本检测2遍取均值；同时依据文献［4］对仪器法计数剩余标本进行新亚甲蓝染色后制片，由2位工作人员使用带Miler窥盘的共览显微镜进行手工计数，每份标本油镜下计数1 000个红细胞内的RET百分数，取均值。

1.3.2 校准Sysmex XE-5000 RET检测通道：使用参考方法［5］对1份标本赋值。采集新鲜全血分装在3个试管中，第1份标本取100 μL与等量的新亚甲蓝染液充分混匀后，室温下染色5 min后制备3张玻片，由两位经验丰富的工作人员使用共览显微镜同时计数，每张玻片至少计数5 000个红细胞后，计算该标本RET比率为2.53%。

参考血细胞分析常规参数校准方案［6］，验证空白计数及精密度合格后，使用第2份标本在Sysmex XE-5000连续检测11次，去除第1次结果后计算均值为2.90%，与定值偏差为14.6%，参照Sysmex公司在Sysmex XN-20上标定的校准允许误差（8.38%），严重超出范围，需要调整仪器系数；通过计算将仪器校准系数调整（1 000→871），然后使用第3份标本在Sysmex XE-5000连续检测11次，去除第1次结果后计算均值为2.55%，与定值偏差为0.79%，符合厂商标定要求，校准合格。

1.3.3 校准后仪器比对：按照仪器操作规程对Sysmex XE-5000重新进行仪器验证，空白计数、精密性均达到厂商要求的标准。依据1.3.1方法重新对60例新鲜全血样本进行仪器检测。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 校准前仪器比对

Sysmex XE-5000在校准之前，与经配套校准品校准之后的Sysmex XN-20在检测RET时的结果相比，除Hb高值组偏差较小外，其余2组和总体与Sysmex XN-20的均值相比，偏差均超过厂商标定的仪器间比对标准（20%），需对Sysmex XE-5000进行RET通道校准；同时进行t检验发现，2台仪器总体数据间差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2 校准后比对

表1 校准前2种仪器RET检测结果比较Tab.1 Comparison of RET between two instruments before calibration（

表1 校准前2种仪器RET检测结果比较Tab.1 Comparison of RET between two instruments before calibration（

*Bias=（XE 5000-XN 20）/XN 20×100%

Group n Sysmex XN-20 Sysmex XE-5000 t P Bias（%）* Total 60 2.35±2.03 2.92±1.72 -1.763 0.040 24.26 Hb＞120 g/L 20 1.27±0.59 1.42±0.55 -0.839 0.203 11.81 Hb 90-120 g/L 20 1.78±0.78 2.15±0.70 -1.728 0.046 20.79 Hb＜90 g/L 20 3.99±2.72 4.82±2.64 -0.989 0.164 20.40

表2中数据表明，在经过校准之后，Sysmex XE-5 000与Sysmex XN-20在检测RET时的结果相比，分组及整体均值偏差均在厂商规定范围之内，t检验差异也无统计学意义（P＞0.05）；整体数据进行回归分析，相关性良好（回归曲线为y=0.989x-0.018，r2= 0.993，t=91.01，P＜0.01）。

同时，2种仪器法检测结果与手工法相比，除Hb低值组外差异均无统计学意义（P＞0.05）；整体数据进行回归分析，相关性良好（Sysmex XE-5000回归曲线为y=0.907x+0.192，r2=0.985，t=55.53，P＜0.01；Sysmex XN-20回归曲线为y=0.910x+0.227，r2= 0.975，t=47.20，P＜0.01）。

表2 校准后RET检测结果比较Tab.2 Comparison of RET after calibration

表2 校准后RET检测结果比较Tab.2 Comparison of RET after calibration

1）compared with by hand，P＜0.05；*Bias=（XE 5000-XN 20）/XN 20×100%.

Group n By hand Sysmex XN-20 Sysmex XE-5000 Comparison Between Different Instruments t P Bias（%）* Total 60 2.33±2.22 2.35±2.03 2.30±2.01 0.118 0.892 -2.13 Hb＞120g/L 20 1.26±0.77 1.27±0.59 1.26±0.58 0.081 0.936 -0.79 Hb 90-120g/L 20 1.71±1.01 1.78±0.78 1.77±0.87 0.019 0.985 -0.56 Hb＜90g/L 20 4.02±3.01 3.99±2.72 3.88±2.721） 0.128 0.898 -2.76

3 讨论

随着检验技术的快速发展，带RET的全自动血液分析仪在临床广泛的应用，使RET的检测从传统的人工染色镜检被全自动血液分析仪采用的流式分析技术取代，在计数RET的同时还可根据荧光强度等检测多个RET参数，为临床贫血性疾病的鉴别诊断以及疗效监测提供了新型指标。同时，由于发展规模和所服务的临床对象的变化，许多实验室会同时拥有多个品牌或者同一品牌不同型号的血细胞分析仪，伴随医疗机构间检验结果互认的需求，如何保证这些不同品牌或型号的血细胞分析仪检测结果的准确性和一致性，是目前各实验室必须面对的问题。基层医院已经尝试使用可溯源的定值抗凝新鲜全血对不同检测系统进行实验室间统一比对，效果显著［7］。

2011年，卫生部先后发布实施了《血细胞分析的校准指南》和《网织红细胞计数的参考方法》两份卫生行业标准。然而，目前国内外对于仪器法RET检测的标准还未确立，参考区间建立也正处于研究之中，标准的校准体系尚未完善；而资料显示［8］，仪器在长期使用过程中，其校准系数会发生变化，为使血细胞分析仪的检测结果更加准确，也更有临床诊断价值，必须定期校准。

Sysmex XN系列是Sysmex血细胞分析仪中首次配置了标准的RET校准品的仪器，而Sysmex XE-5000则尚未生产标准的RET校准品，因此为2种类型仪器之间结果的可比性增加了难度。

本研究参考血细胞分析常规参数校准方案［4］，使用参考方法［5］对新鲜全血样本赋值后对Sysmex XE-5000的RET比率进行校准，并对校准前后2台仪器之间的结果可比性进行研究，结果显示，经校准后Sysmex XE-5000与Sysmex XN-20在不同浓度水平上的检测结果均具有可比性，同时通过手工法验证，结果准确性良好，证明该校准方案在临床实验室操作中具备可行性。但在本试验进行过程中发现Hb低值组在Sysmex XE-5000与手工法间的差异有统计学意义，其中有3份标本的偏差均超过10%，测定值均在9.8～12.9之间，考虑是由于RET数量大、密度高、RNA物质多，这对于手工法及仪器法都造成一定干扰，使结果出现较大误差。

综上所述，通过自建方案对Sysmex XE-5000进行仪器校准后，可使实验室内多台仪器间的检测结果更具可比性，检测结果更准确。同时由于该校准方案所需材料均为临床标本，也不需要高精端仪器，方便了基层医院的借鉴与应用。但仍需定期参加实验室间比对计划（卫生部、省内EQA等），以持续关注检验结果的准确性。

［1］Karagülle M，Gündüz E，Mutlu FS，et al.Clinical significance of reticulocyte hemoglobin content in the diagnosis of iron deficiency anemia［J］.Turk J Hematol，2013，30（2）：153-156.

［2］Oustamanolakis P，Koutroubakis IE，Messaritakis I，et al.Measurement of reticulocyte and red blood cell indices in the evaluation of anemia in inflammatory bowel disease［J］.J Crohns Colitis，2011，5（4）：295-300.

［3］李琳，张磊，李伟.血细胞分析仪与手工法RET计数结果比对及其临床意义［J］.国际检验医学杂志，2014，35（14）：1928-1929.

［4］中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程［M］.3版.南京：东南大学出版社，2006：131-132.

［5］中华人民共和国卫生部.网织红细胞计数的参考方法（WS/T 346-2011）［S］.北京：中国标准出版社，2011：1-5.

［6］中华人民共和国卫生部.血细胞分析的校准指南（WS/T 347-2011）［S］.北京：中国标准出版社，2011：1-5.

［7］李芳文，张吉平，钟兰君，等.用新鲜血进行基层医院实验室间血细胞分析仪比对的探讨［J］.国际检验医学杂志，2013，34（10）：1282-1284.

［8］张志强.血细胞分析仪校准系数变化分析［J］.中国医疗设备，2014，29（5）：61-63.

（编辑 武玉欣）

Comparison Study of Reticulocyte Analysis Results Determined by Different Instruments

ZHANGQing-yang，DIAO Ying-ying，ZHENGJun

（Department of Laboratory Medicine，The First Hospital，China Medical University，Shenyang110001，China）

Objective To explore the correlation of reticulocyte（RET）detection results between different instruments.MethodsThe reference method（Sysmex XE-5000）for instrument calibration was carried out，then the results of reticulocyte ratio tested by Sysmex XE-5000 and Sysmex XN-20 was compared.ResultsThere was no statistical significance between two instruments for detecting reticulocyte ratio（P＞0.05）.Moreover，no statistically significant differences were found when comparing these data with the manual method（P＞0.05）.ConclusionInternal instruments are comparable for RET after calibrating Sysmex XE-5000 using reference method.

reticulocyte；calibration；reference method；comparability

R446.11

B

0258-4646（2015）11-0975-03

国家自然科学基金青年项目（81102231）

张青杨（1986-），男，技师，本科.

刁莹莹，E-mail：cmudyy@163.com

2015-04-02

网络出版时间：