灯盏花半枝莲韩信草中野黄芩苷含量比较

潘伟东，杜义龙，王肖，潘海峰

(承德医学院河北省中药研究与开发重点实验室，承德 067000)

灯盏花半枝莲韩信草中野黄芩苷含量比较

潘伟东，杜义龙，王肖，潘海峰

(承德医学院河北省中药研究与开发重点实验室，承德 067000)

目的 采用高效液相色谱法测定灯盏花、半枝莲、韩信草3种药材中野黄芩苷的含量并进行比较。方法 采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，柱温30 ℃，流动相为0.1%磷酸水-甲醇(65：35)，流速1.0 mL·min-1，检测波长335 nm，进样量10 μL。结果 灯盏花、半枝莲、韩信草中野黄芩苷含量的线性范围为0.017 5～0.28 mg·mL-1(r=0.999 7，n=5)，平均加样回收率(n=6)分别为100.25%(RSD=2.49%)、99.25%(RSD=2.65%)、100.64%(RSD=3.23%)。灯盏花、半枝莲、韩信草中野黄芩苷的含量范围分别为0.20%～5.26%，0.37%～1.59%，0.01%～0.41%。结论 灯盏花、半枝莲、韩信草中野黄芩苷的含量存在差异，野黄芩苷的总体含量灯盏花中最高，半枝莲次之，韩信草中最低。

灯盏花；半枝莲；韩信草；野黄芩苷；色谱法，高效液相

灯盏花为菊科植物短葶飞蓬[Erigeronbreviscapus(Vant.)Hand.-Mazz.]的干燥全草，主要分布于云南、湖南、广西、贵州、四川及西藏等地，其中云南产灯盏花占全国总产量的95%[1]。灯盏花素(breviscapine)为灯盏花中提取分离得到的黄酮类有效成分，其主成分为灯盏花乙素(野黄芩苷 scutellarin)，另外含有少量的灯盏花甲素[2]。2010年版《中华人民共和国药典》规定，灯盏花素制剂中含野黄芩苷含量不得低于90.0%(供口服用)或98.0%(供注射用)[3]。灯盏花素具有扩张脑血管、降低脑血管阻力、增加脑血流量、改善微循环以及抗血小板聚集等作用，临床主要用于治疗缺血性心脑血管疾病[4-5]。目前市售的灯盏花素制剂分为口服和静脉滴注两类，如灯盏花素片、灯盏花素滴丸、灯盏花素颗粒、灯盏花素注射液等[6]。随着灯盏花素制剂广泛应用于临床，灯盏花素的需求量日渐增加。作为灯盏花素制备的原药材，灯盏花的需求量也日渐增加。目前灯盏花药材年采集量约为1×106kg，由于过度采集，灯盏花野生资源以及栽培药材均有供不应求之势，而且价格昂贵。因此，寻找灯盏花的药源成为现在急需解决的一个问题。相关文献报道，半枝莲(ScutellariabarbataD.Don.)、韩信草(ScutellariaindicaLinn.)中也含有野黄芩苷，笔者从化学的角度探讨能否用半枝莲或韩信草作为制备灯盏花素的原料。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent1200 Series高效液相色谱仪(G1322A 在线脱气机、G1311A 四元泵、G1316A 柱温箱、G1315D二极管阵列检测器、G1329A自动进样器)；Agilent Chemstation色谱工作站(美国安捷伦公司)；HC-2062高速离心机(科大创新股份有限公司)；KQ-700型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；AG-245型十万分之一电子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司)。

1.2 试药 野黄芩苷(批号：PCS0329)购于北京中科仪友化工技术研究院，含量98%。甲醇、乙腈为色谱纯(Fisher Scientific，USA)，四氢呋喃为色谱纯(Mreda Technology Inc，USA)；水为娃哈哈纯净水(河北省高碑店市经济开发区)；其他试剂为分析纯。灯盏花、半枝莲、韩信草由承德民族师范学院董建新教授分别鉴定为菊科植物短葶飞蓬[Erigeronbreviscapus(Vant.)Hand.-Mazz.]、唇形科植物半枝莲(ScutellariabarbataD.Don)、唇形科植物韩信草(ScutellariaindicaLinn.)的干燥全草。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：0.1%磷酸水-甲醇(65：35)；检测波长：335 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。对照品及样品色谱图见图1。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取野黄芩苷对照品2.8 mg至10 mL量瓶，加甲醇溶解并定容，制成0.28 mg·mL-1对照品溶液，作为对照品储备液。

2.3 供试品溶液的制备 ①称取灯盏花粉末(过60目筛)约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，密塞，称定质量，超声(700 W，40 kHz)处理30 min，放冷，再称定质量，用50%乙醇补足质量，摇匀，提取液于12 000 r·min-1(r=5 cm)下离心10 min，内径0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得(D14、D16中野黄芩苷含量超限，分别稀释后进样)。②精密称取半枝莲粉末(过60目筛)约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，密塞，称定质量，超声(700 W，40 kHz)处理30 min，放冷，再称定质量，用50%乙醇补足质量，摇匀，提取液于12 000 r·min-1下离心10 min，内径0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得(B10、B13中野黄芩苷含量超限，分别稀释后进样)。③精密称取韩信草粉末(过60目筛)约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，超声(700 W，40 kHz)处理30 min，提取液回收溶剂至干，用50%乙醇溶解并转移至10 mL量瓶中，加50%乙醇至刻度，摇匀，溶液于12 000 r·min-1离心10 min，内径0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.4 线性关系考察 以对照品储备液为1号溶液，采用倍比稀释法将对照品储备液制成系列浓度溶液，得2～5号对照品溶液，野黄芩苷的浓度分别为0.14，0.07，0.035，0.0175 mg·mL-1。在“2.1”项色谱条件下，分别取上述系列对照品溶液各10 μL进样，记录峰面积。以峰面积(A)为纵坐标，对照品浓度(C)为横坐标，进行线性回归，回归方程为A=32 603C+62.138(r=0.999 7)，线性范围为0.017 5～0.28 mg·mL-1。

2.5 精密度实验 精密吸取3号对照品溶液10 μL，按“2.1”项下色谱条件，连续进样6次，记录峰面积，峰面积的RSD(n=6)值为0.09%(<3%)，表明方法精密度良好。

2.6 重复性实验 取同一批灯盏花粉末(D10)6份，每份约0.25 g，精密称定，按“2.3”项下方法平行制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件进样10 μL，平行测定，记录峰面积，峰面积RSD(n=6)值为2.1%。同法，得到半枝莲(B01)、韩信草(S02)的RSD值分别为1.3%，2.2%，均<3%，表明重复方法性良好。

2.7 稳定性实验 取同一灯盏花(D10)供试品溶液，分别在制备后0，4，8，12，16，24 h，按“2.1”项下色谱条件进样10 μL，记录峰面积，峰面积RSD(n=6)1.3%。同法，得到半枝莲(B01)、韩信草(S02)的RSD值分别为1.8%，1.5%，均<3%，表明方法稳定性良好。

2.8 加样回收率实验 称取已知野黄芩苷含量的灯盏花粉末(D10)6份，每份约0.125 g，精密称定，加入野黄芩苷对照品适量，按“2.3”项下条件制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样10 μL，进行分析测定，计算回收率。同法，测定半枝莲(B01，取约0.25 g)、韩信草(S02，取约0.25 g)的加样回收率，结果见表1。

2.9 样品含量测定 取灯盏花、韩信草、半枝莲样品，按“2.3”项方法分别制备供试品溶液各3份，按“2.1”项下色谱条件进样10 μL，进行分析测定，通过回归方程分别计算灯盏花、半枝莲、韩信草中野黄芩苷的含量，结果见表2。

3 讨论

3.1 色谱条件的优化 野黄芩苷在280和335 nm波长处有最大吸收，本研究采用2010年版《中华人民共和国药典》的335 nm为检测波长。另外，对甲醇-水、乙腈-水、水-甲醇-四氢呋喃、不同浓度的甲酸-甲醇、乙酸-甲醇、磷酸-甲醇系统，以及Agilent不同系列色谱柱进行筛选，结果使用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以0.1%磷酸溶液-甲醇(65：35)为流动相时3种药材的野黄芩苷色谱峰峰形良好、分离度高，符合定量要求。

3.2 提取方法的考察 本研究分别采用甲醇、50%乙醇[7]、三氯甲烷作为提取溶剂，同时对索氏提取、回流提取、超声提取等方法进行了优化，并对提取次数、提取时间分别进行单因素考察，结果以50%乙醇为提取溶剂，超声提取30 min，提取1次时，野黄芩苷基本提取完全。

3.3 灯盏花、半枝莲、韩信草中野黄芩苷的含量比较与分析 由表2可得到，灯盏花中野黄芩苷的含量范围为0.20%～5.26%，半枝莲中野黄芩苷含量为0.37%～1.59%，韩信草中野黄芩苷的含量为0.01%～0.41%，总体上看灯盏花中野黄芩苷含量最高，半枝莲次之，韩信草最低；灯盏花同种药材中野黄芩苷含量差异较大，如灯盏花D16中野黄芩苷含量最高，达5.26%，与D11的0.20%相差25倍，半枝莲、韩信草也存在同样问题，这可能与各药材的生长环境、采集时间、加工过程等不同有关。

3.4 灯盏花素的市场分析与展望 灯盏花素是从灯盏花提取制备而得，主要成分为野黄芩苷，2010年版《中华人民共和国药典》规定含量不得低于90%，临床上主要用于心脑血管疾病的治疗。本研究通过对3种药材野黄芩苷含量的比较，结果显示半枝莲与灯盏花中的野黄芩苷含量基本相当，且野生资源丰富，在我国各省均有分布，蕴藏量每年为450万～500万千克[8]，价格低廉。根据以上分析，认为利用半枝莲替代灯盏花制备灯盏花素具有很大的可能性，有待进一步研究。

[1] 彭成.中华道地药材[M].北京：中国中医药出版社，2011：985.

[2] 杨丽梅，顾军，林明建，等.灯盏花素的研究进展[J].天津药学，2010，22(1)：56-60.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：中国医药科技出版社，2010：109-110，379.

[4] WANG Z Y，CHEN D C，HE Y，et al.Differential effects of new breviscapine on arachidonic acid metabolisms in blood cells and endothelial cells [J].Acta Pharmacologica Sinica，1993，14(2)：148-151.

[5] 刘华，廖维靖，魏黎，等.灯盏细辛对脑缺血-再灌注后血脑屏障通透性及脑代谢物的影响[J].中国中药杂志，2009，34(2)：208-211.

[6] 来国防，程宾，王易芬，等.灯盏花的研究进展[J].商丘师范学院学报，2010，26(6)：82-87.

[7] 林燕芝，陈晓辉，唐星，等.RP-HPLC测定灯盏细辛中野黄芩苷的含量[J].药物分析杂志，2005，25(5)：594-596.

[8] 蔡少青，王璇.常用中药材品种整理和质量研究[M].北京：北京医科大学出版社，2003：673-765.

DOI 10.3870/yydb.2015.06.032

2014-02-24

2014-05-16

潘伟东(1989-)，男，河北沧州人，硕士，从事中药分析工作。电话：0314-2291186，E-mail：panweidong1223@163.com。

潘海峰(1967-)，女，河北承德人，教授，硕士，从事中药分析研究。电话：0314-2291186，E-mail：phf2301@163.com。

R284；R927.2

B

1004-0781(2015)06-0816-04