止咳片的质量控制

2015-02-10刘慧

医药导报 2015年6期

关键词：白花薄层甲醇

刘慧

(浙江中医药大学附属湖州市中医院中药房，湖州 313000)

止咳片的质量控制

刘慧

(浙江中医药大学附属湖州市中医院中药房，湖州 313000)

目的制定止咳片的质量标准。方法对止咳片中苦杏仁进行薄层色谱鉴别；采用高效液相色谱法同时测定白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量。色谱柱为C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；以甲醇-水(75：25)系统为流动相；检测波长为321 nm，流速1 mL·min-1。结果薄层色谱鉴别中，供试品在与对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点，斑点清晰，分离度好，阴性未见干扰。白花前胡甲素在61.98～619.84 ng范围内线性关系良好，线性方程Y=1.156 5X+13.452 7，r=0.999 8；白花前胡乙素在32.11～321.13 ng范围内线性关系良好，线性方程Y=1.438 6X-0.305 4，r=0.999 8。白花前胡甲素低、中、高加样回收率分别为96.19%，98.87%，97.60%，RSD分别为2.13%，1.52%，0.73%(n=3)；白花前胡乙素低、中、高加样回收率分别为96.97%，99.60%，96.74%，RSD分别为1.55%，2.28%，0.47%(n=3)。结论该方法结果准确、专属性强，重复性好，能有效控制止咳片的质量。

止咳片；白花前胡甲素；白花前胡乙素；质量标准；色谱法，薄层；色谱法，高效液相

止咳片为百部、前胡、苦杏仁3味药材组成的复方中药制剂，具有润肺定喘、祛痰止咳的功效。临床上一般用于治疗咳嗽、痰多、气喘、小儿百日咳、急慢性气管炎等[1]。该制剂现行标准收载于《卫生部药品标准中药成方制剂》(第四册)，标准仅包括性状、百部的化学鉴别项、前胡的薄层鉴别项与常规检查项，缺少对苦杏仁的质控项目并缺少含量测定项。因此，笔者采用薄层色谱(TLC)法对苦杏仁进行鉴别，采用高效液相色谱法测定止咳片中的白花前胡甲素和白花前胡乙素两种成分。结果表明该方法简便，结果准确，专属性强，完善质控指标，对全面控制本品的质量具有重要意义。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent1260系列高效液相色谱仪，包括四元泵(DEAB704165)，自动进样器(DEAEC09523)、柱温箱(DEACN12074)、DAD检测器(DEAA302930)；色谱仪工作站采用Chemistation工作站；4020P超声仪(JAC公司)；CPA225D天平(METTLER TOLEDO公司，感量：0.01 mg)。

1.2 试药白花前胡甲素对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111711-200602，含量测定用)；白花前胡乙素对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111904-201203，含量98.0%)；硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂)；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他均为分析纯。止咳片(批号：1127262，1127263，1127264)均购自北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂，取批号1127264止咳片进行方法学实验。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别取本品10片，除去糖衣，研细，加甲醇50 mL，超声处理30 min，放冷，滤过，滤液浓缩至2 mL，作为供试品溶液。另取苦杏仁苷对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15：40：22：10)10 ℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，喷以含1%磷钼酸的15%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。结果供试品与对照品相对应的色谱位置上，显相同颜色的斑点，且阴性样品无干扰，见图1。

2.2 白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量测定

2.2.1 色谱条件 Agilent XDB C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：甲醇-水(75：25)；流速1 mL·min-1；检测波长321 nm；进样体积10 μL；理论板数以白花前胡甲素峰计不低于3 000。

2.2.2 对照品溶液的制备取白花前胡甲素和白花前胡乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含白花前胡甲素30.99 μg、白花前胡乙素16.06 μg的混合溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 mL，密塞，称定质量，超声处理30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 阴性样品溶液的制备按处方量配制不含前胡的阴性样品，照供试品溶液的制备方法制备，即得。

2.2.5 系统适用性与专属性实验按上述色谱条件，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10 μL，进样，记录色谱图，结果待测峰与邻近峰分离度符合要求，阴性供试品溶液在白花前胡甲素和白花前胡乙素对照品出峰位置均无干扰见图2。

2.2.6 线性关系考察精密吸取“2.2.2”项下对照品溶液2，5，10，15，20 μL，分别注入液相色谱仪，以峰面积积分值为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线，分别得到白花前胡甲素回归方程，Y=1.156 5X+13.452 7，r=0.999 8；白花前胡乙素回归方程，Y=1.438 6X-0.305 4，r=0.999 8。结果表明白花前胡甲素进样量在61.98～619.84 ng 范围内，白花前胡乙素进样量在32.11～321.13 ng 范围内线性关系良好。

2.2.7 精密度实验精密吸取对照品溶液10 μL，连续进样5次，测定峰面积积分值，结果白花前胡甲素和白花前胡乙素峰面积RSD分别为1.52%，1.39%，精密度良好。

2.2.8 重复性实验取样品6份，按供试品溶液制备方法制备，进样分析，结果白花前胡甲素和白花前胡乙素的平均含量分别为6.02，3.23 mg·g-1，RSD分别为1.89%，2.07%。表明该方法重复性良好。

2.2.9 稳定性实验分别精密吸取同一供试品溶液10 μL，在0，4，8，12，24 h注入液相色谱仪，测定白花前胡甲素和白花前胡乙素峰面积，结果RSD分别为1.78%，1.81%，表明供试品在24 h内稳定。

2.2.10 加样回收率实验取样品9份，每份0.25 g，精密称定，每3份为一组，分别精密加入低、中、高3个梯度水平对照品(相当于含量的50%，100%，150%)，按“2.2.3”项供试品溶液制备方法进行制备并测定，结果见表1。从表1中可见，回收率符合要求。

2.2.11 样品含量测定用上述方法对收集的3批样品进行测定，结果见表2。

3 讨论

3.1 质量控制指标的选择百部、前胡、苦杏仁三者均具有化痰、降气、止咳的疗效。君药百部尚未寻找到合适的薄层、液相质量控制方法，故保留原标准中的化学鉴别方法对百部进行质量控制。原标准中缺少苦杏仁的质量控制项目，故选择薄层鉴别方法对苦杏仁进行质量控制。原标准中已有前胡的薄层鉴别方法，故另选择前胡中的指标性成分白花前胡甲素与白花前胡乙素进行定量测定，控制产品质量。

3.2 苦杏仁的鉴别苦杏仁的薄层鉴别方法在许多研究文献中需要脱脂步骤[2-4]。经考察，本品供试品溶液的制备过程是否采用脱脂步骤对斑点的影响不大，原因可能为苦杏仁为提取后进行制剂，直接采用甲醇超声已能对样品中的苦杏仁苷渗透、提取完全，故采用甲醇超声提取制备供试品，操作简便，缩短操作时间。方法灵敏度高，专属性强，斑点清晰，分离度好。

表2 3批止咳片中白花前胡甲素和白花前胡乙素含量

3.3 前胡的含量测定 2010年版《中华人民共和国药典》等[5-6]采用三氯甲烷提取，用甲醇转溶的方法制备供试品，方法稍嫌繁琐。笔者在比较提取溶剂、提取方法、提取时间的基础上，选择本研究确定的供试品溶液制备方法，优化提取溶剂，增大提取溶剂的体积比，取消蒸干、转溶等步骤，在简化操作的基础上又保证提取完全。

实验另比较甲醇-水系统[5-6]、乙腈-水梯度系统[7]和甲醇-0.5%磷酸系统，认为甲醇-水系统已完全能满足分析要求，操作简单，故选择甲醇-水系统。

本方法完善了止咳片的质量控制项目，为更全面地控制本品的质量提供了可靠、有效的方法保证。

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[7] 赵迪，周悌强，冯素香，等.HPLC-ELSD-UV法同时测定氨酚那敏三味浸膏胶囊中长梗冬青苷、白花前胡甲素、白花前胡乙素[J].中成药，2012，34(10)：1908-1912.

DOI 10.3870/yydb.2015.06.030

2014-02-28

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