高效液相色谱法测定注射用头孢他啶聚合物

刘映倩，吴群，罗立骏，唐倩

(1.重庆市食品药品检验所、重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆 401121；2.重庆医药高等专科学校，重庆 400030)

高效液相色谱法测定注射用头孢他啶聚合物

刘映倩1，吴群1，罗立骏1，唐倩2

(1.重庆市食品药品检验所、重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆 401121；2.重庆医药高等专科学校，重庆 400030)

目的 建立高效液相色谱法测定注射用头孢他啶聚合物的含量。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为TSK-GEL G2000SWXL凝胶色谱柱，流动相为磷酸盐缓冲液(pH7.0)0.005 mol·L-1磷酸氢二钠溶液-0.005 mol·L-1磷酸二氢钠溶液(61：39)，流速：0.8 mL·min-1，检测波长231 nm，柱温30 ℃，进样量20 μL 。结果 头孢他啶对照品检测线性范围为0.51～25.64 μg·mL-1(r=0.999)，注射用头孢他啶聚合物检测线性范围为0.20～3.92 mg·mL-1(r=0.99)，聚合物定量限为0.71 μg。结论 该方法快速，分离度好，可用于注射用头孢他啶聚合物的检测。

注射用头孢他啶；聚合物；色谱法，高效液相

头孢他啶类药物具有对革兰阴性菌作用强，对铜绿假单胞菌作用突出的特点，临床应用非常广泛。因药物中存在的高分子杂质与头孢类抗生素药物所致的速发型变态反应有关，因此，决定变态反应的关键质量因素是高分子杂质，药品中含高分子杂质越多，变态反应发生率就越高[1]。笔者在本研究建立有效的测定方法，准确测定多级聚合物，提高药物的安全性和有效性。

1 仪器与试药

Agilent 1260(美国Agilent公司)；头孢他啶对照品(中国食品药品检定研究院，批号：130484-200803，含量：84.8%)；注射用头孢他啶(重庆科瑞制药股份有限公司，批号：130201，130202，130203；规格：0.5 g，1.0 g，2.0 g)；乙腈(色谱纯)，其他试剂为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 色谱柱 TSK-GEL G2000SWXL凝胶色谱柱(7.8 mm×30 cm，5 μm)。

2.1.2 流动相的选择 A.磷酸盐缓冲液(pH7.0)[0.005 mol·L-1磷酸氢二钠溶液-0.005 mol·L-1磷酸二氢钠溶液(61：39)]；B.磷酸盐缓冲液(pH7.0)[0.005 mol·L-1磷酸氢二钠溶液-0.005 mol·L-1磷酸二氢钠溶液(61：39)]-乙腈(95：5)；C.以含3.5%硫酸铵的pH7.0的0.1 mol·L-1磷酸盐缓冲液[0.1 mol·L-1磷酸氢二钠溶液-0.1 mol·L-1磷酸二氢钠溶液(61：39)]。实验表明：流动相A和B中，头孢他啶聚合物和单体能完全分离，均能检测出两个聚合物峰，流动相A中两个聚合物峰分离度为1.0，流动相B中两个聚合物峰分离度为0.8，流动相C只能检测出聚合物峰1个，其响应值较低，见图1。因此，采用流动相A进行以下实验。

2.1.3 检测波长的选择 通过二极管阵列检测对头孢他啶聚合物和单体进行波谱扫描，头孢他啶聚合物在231 nm处有较强吸收；分别在231，254，210 nm波长处测定其聚合物，在231 nm处聚合物峰面积最大，峰响应值最大，其聚合物含量最高，故最终确定检测波长为231 nm。

2.2 对照品溶液的制备 称取头孢他啶对照品约15 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，用水溶解并定容，精密量取1.0 mL，置100 mL量瓶中，用水定容。

2.3 供试品溶液的制备 称取注射用头孢他啶样品约65 mg，置100 mL量瓶中，用水溶解并定容。

2.4 专属性实验 取上述供试品溶液10.0 mL，置25 mL量瓶中，加入1 mol·L-1盐酸溶液1 mL，放置5 min，用1 mol·L-1氢氧化钠溶液1 mL中和；取上述供试品溶液10.0 mL，置25 mL量瓶中，加入1 mol·L-1氢氧化钠溶液1 mL，放置5 min，用1 mol·L-1盐酸溶液1 mL中和；取上述供试品溶液10.0 mL，置25 mL量瓶中，加入30%过氧化氢溶液2滴，放置5 min；取上述供试品溶液10.0 mL，置25 mL量瓶中，置水浴中放置5 min。吸取破坏后的各供试品溶液分别进样测定，记录色谱图。结果表明：在酸、碱、氧化及热破坏条件下，头孢他啶均发生不同程度的降解，各破坏样品中聚合物峰与单体峰均能良好分离，互不干扰，该色谱条件能满足聚合物测定要求。见图2。

2.5 线性关系考察 精密吸取头孢他啶对照品，加水溶解并稀释成0.512 9，2.564 4，5.128 7，12.821 8，25.643 5 μg·mL-1浓度进样，记录色谱峰面积，以浓度(C，μg·mL-1)对峰面积(A)进行线性回归，得到回归方程A=35.582 8+39.542 8C(r=0.999)。结果表明：头孢他啶对照品在0.51～25.64 μg·mL-1范围内呈良好线性关系。精密吸取注射用头孢他啶样品，加水溶解并分别稀释成0.195 8，0.489 4，0.978 8，1.957 7，3.915 3 mg·mL-1浓度进样，记录色谱峰面积，以浓度(C，mg·mL-1)对峰面积(A)进行线性回归，得到回归方程为A=-19.386 0+158.65C(r=0.99)。结果表明：注射用头孢他啶聚合物在0.20～3.92 mg·mL-1范围内呈良好线性关系。

Fig.2 HPLC chromatogram of sample solution(A) and the solution destructed by base(B),acid(C),oxidation(D) and water bath(E)

2.6 精密度实验 取上述对照品溶液，按上述色谱条件重复进样6次，测定峰面积，结果以峰面积计算，其RSD=0.7%(n=6)，表明此方法精密度良好。

2.7 稳定性实验 取上述供试品溶液分别于0，0.5，1，2，4 h进样测定，记录色谱峰面积。结果随时间增加聚合物峰面积也逐渐增加，结果表明：供试品溶液不稳定，应临用新配。

2.8 定量限 取上述供试品溶液适量，用水稀释，当信噪比为10(S/N=10)时，计算注射用头孢拉定聚合物定量限为0.71 μg。

2.9 方法比较 按照《中华人民共和国药典》2010年版二部与现拟定方法测定注射用头孢他啶聚合物的含量结果。见表1。

表1 两种方法测定注射用头孢他啶聚合物结果

3 讨论

《中华人民共和国药典》2010年版二部测定注射用头孢他啶聚合物，采用葡聚糖凝胶G-10(40～120 μm)作为高分子杂质分离色谱系统的凝胶介质，采用分子排阻色谱法进行测定，其方法耗时长，不能对头孢他啶聚合物及单体进行基线分离，导致测定结果不准确。现拟定方法参照β-内酰胺类抗生素的头孢地嗪钠有关物质Ⅱ[2]，采用球状蛋白色谱亲水硅胶(相对分子质量适用范围为1 000～10 000)为填充剂的色谱柱，采用分子排阻色谱法进行高分子杂质的控制。该方法测定注射用头孢他啶聚合物专属性好，分析时间短，聚合物与单体之间能达到基线分离，能有效分离其聚合物，准确测定出其聚合物的量。

本方法与《中华人民共和国药典》方法采用的色谱柱不相同，所以不能以《中华人民共和国药典》方法的判定结果认为注射用头孢他啶的聚合物含量不合格。采用G2000凝胶色谱柱测定聚合物的方法是目前聚合物检测的一种新趋势，目前申报的抗生素聚合物测定均采用此方法。如要制定此方法测定注射用头孢他啶聚合物的含量限度，则需要收集市面上所有流通及生产的头孢他啶原料及制剂进行检测，最终确定其聚合物含量限度。

[1] 黄肖民.头孢菌素类抗生素高分子杂质分析探讨[J].科技创新与应用，2013，(21)：50-51.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京：中国医药科技出版社，2010：179.

DOI 10.3870/yydb.2015.06.027

Determination of Ceftazidime for Injection by HPLC

LIU Yingqian1, WU Qun1, LUO Lijun1,TANG Qian2

(1.ChongqingInstituteforFoodandDrugControl,ChongqingPharmaceuticalProcessandQualityControlEngineeringTechnologyResearchCenter,Chongqing401121,China； 2.ChongqingMedicalandPharmaceuticalCollege,Chongqing400030,China)

Objective To establish an HPLC method for the determination of ceftazidime for injection. Methods HPLC column was TSK-GEL G2000SWXL gel column.Mobile phase of phosphate buffer (pH 7.0) was 0.005 mol·L-1disodium hydrogen phosphate solution-0.005 mol·L-1sodium dihydrogen phosphate solution (61：39), the flow rate was 0.8 mL·min-1. The detection wavelength was 231 nm； column temperature was 30 ℃； the injection volume was 20 μL. Results Ceftazidime reference linear range was 0.51-25.64 μg·mL-1(r=0.999), ceftazidime for injection polymer linear range was 0.20-3.92 mg·mL-1(r=0.99), and the limit of quantification polymer was 0.71 μg. Conclusion The method is rapid and the separation was good.It can be used for the detection of ceftazidime for injection.

Ceftazidime for injection； Polymer； Chromatography，high performance liquid

2014-02-20

2014-05-02

刘映倩(1981-)，女，贵州赤水人，副主任药师，学士，研究方向：药物分析。电话：(0)13594057636，E-mail：wenling8081@sina.com。

唐倩(1979-)，女，四川广安人，副教授，硕士，研究方向：药物分析。电话：(0)18680866274，E-mail：qiantang60460@163.com。

R978.11；R927.2

B

1004-0781(2015)06-0802-03